أصبحت نماذج Xenograft المشتقة من المريض وخطوط الخلايا الأولية جزءًا لا يتجزأ من تطور الدواء وبدء تطور أبحاث بيولوجيا الأورام. تحافظ نماذج Xenograft المشتقة من المريض على المظهر الهستوولوجي للخلايا السرطانية، وتحتفظ بالتغايرية داخل الجسم، وتعكس بشكل أفضل المكونات البشرية ذات الصلة في البيئة الدقيقة للورم. نماذجه هي لتمثيلات أكثر دقة للسرطان البشري ثم خطوط الخلايا السرطانية التقليدية ولها القدرة على تحسين التقييم قبل الكلينيكي للعلاجات السرطانية الجديدة.
بالإضافة إلى ذلك، قد تكون هذه النماذج مفيدة في مقارنة الخصائص الجزيئية أو بصمات الأورام بين مجموعات فرعية مختلفة من مرضى السرطان. ويوصى الفئران NSG كنموذج الماوس المثبطة للمناعة. بسبب نقص المناعة الشديدة للفئران ، يجب الحفاظ على العقم في جميع التجارب.
في ظل ظروف معقمة، واستخدام ملقط ومقص لتشريح بعناية أنسجة الورم وتقليم لهم في عدة قطع صغيرة. بعد تخدير الماوس، استخدم مقصًا معقمة لإجراء شق سنتيمتر واحد على كلا الجناحين الظهرية. استخدام ملقط العقيمة لتعطيل الأنسجة تحت الجلد.
ثم، مقطع قطعة من نسيج الورم، ووضعها في الموقع العميق. أغلق منطقة الزرع عن طريق الغرز تحت الجلد بإبر خياطة جراحية. تعقيم الجرح باليود.
بعد ذلك، ضع الفئران بلطف في قفص فارغ مع الحفاظ على ا. إيلاء اهتمام وثيق للفئران لأنها ينبغي أن تستيقظ وتبدأ المشي بعد ما يقرب من ثلاث إلى أربع دقائق. ضع الفئران التي خضعت لعملية جراحية في قفص جديد منفصل عن تلك التي لم تخضع لعملية جراحية.
تقييم حجم الورم عن طريق ملاسة موقع الزرع وقياسها مع الفرجار Vernier مرتين في الأسبوع. بعد القتل الرحيم الفئران، واستخدام ملقط معقمة ومقص لعزل الورم ببطء من الفئران. اغسل أنسجة الورم في DPBS في طبق طوله 10 سنتيمترات.
يمكنك ملقط ومقص لتشريح وإزالة المناطق النخرية والأنسجة الدهنية والجلطات الدموية والأنسجة الضامة. بعد ذلك ، استخدم قالبًا لخفض أنسجة الورم إلى سمك أقصى قدره ملليمتر واحد. اغسل شرائح الورم بـ DPBS في طبق طوله 10 سنتيمترات.
لبدء عملية التهيج، استخدم ملقط لنقل الشرائح إلى أنبوب V1 واحتضان أربع درجات مئوية لمدة أربع دقائق. لفة وعكس أنبوب لفترة وجيزة واحتضان في أربع درجات مئوية لمدة أربع دقائق أخرى. بعد ذلك، صب حل V1 وشرائح في طبق 10 سم واستخدام ملقط لنقل شرائح إلى أنبوب V2. احتضان أربع درجات مئوية لمدة أربع دقائق.
لفة وعكس أنبوب لفترة وجيزة واحتضانه في أربع درجات مئوية لمدة أربع دقائق أخرى. بعد ذلك، صب حل V2 والشرائح في طبق 10 سم. نقل شرائح في أنبوب V3 واحتضان في أربع درجات مئوية لمدة خمس دقائق.
لفة وعكس أنبوب لفترة وجيزة واحتضان في أربع درجات مئوية لمدة خمس دقائق أخرى. تأكد من أن جميع شرائح بالوعة إلى الجزء السفلي من الأنبوب. إذا بقيت عدة شرائح عائمة، لفة وعكس أنبوب لفترة وجيزة واحتضان في أربع درجات مئوية حتى جميع شرائح تغرق تماما.
ثم، صب حل V3 وشرائح في طبق 10 سم. قطع أصحاب الأنسجة إلى الطول المناسب ووضعها على الشاش العقيم. نقل الشرائح إلى أصحاب.
التفاف أصحاب مع الشاش. باستخدام ملقط، ضع أصحاب في النيتروجين السائل والسماح لهم احتضان لمدة خمس دقائق. بعد ذلك، تسمية قوارير التبريد مع معلومات الأنسجة.
نقل أصحاب مع شرائح الأنسجة في قارورة، والتي سيتم تخزينها في النيتروجين السائل. أولاً، استئصال عينات سرطان المعدة من عينات مُجَزَّة أو أنسجة PDX التي تم حصادها. ضع الأنسجة على الجليد ونقلها إلى طبق ثقافة معقمة 10 سم.
استخدام ملقط ومقص لإزالة المناطق النخرية والأنسجة الدهنية والجلطات الدموية والأنسجة الضامة. اغسل أنسجة الورم مرة واحدة مع DPBS التي تحتوي على البنسلين والستربتوميسين في طبق طوله 10 سنتيمترات. بعد ذلك، قطع الورم إلى قطع على غطاء الطبق.
يجب أن يكون سمك أقصى من كل قطعة واحد ملليمتر. نقل القطع إلى أنبوب 50 ملليلتر الطرد المركزي التي تحتوي على سبعة ملليلتر من الكولاجينات من النوع 1 و تريبسين الحل. دوامة الخليط لفترة وجيزة.
احتضان في حمام مائي في 37 درجة مئوية لمدة 30 إلى 40 دقيقة، مع التأكد من دوامة الخليط كل خمس دقائق. بعد ذلك، إضافة حجم متساو من 1640-1640 متوسطة 10٪ FBS ودوامة الخليط بدقة. نقل هذا الخليط إلى أنبوب جديد 50 ملليلتر الطرد المركزي عن طريق الترشيح البطيء من خلال مرشح 40 ميكرولتر.
الطرد المركزي filtrates في سرعة تتراوح بين 113 و 163 مرات ز لمدة خمس إلى سبع دقائق في درجة حرارة الغرفة. إزالة بعناية هذا مُندفع. غسل بيليه مع خمسة ملليلتر من برنامج تلفزيوني وإزالة بعناية عظمى.
إذا كانت الكريه حمراء، فهي تحتوي على كريات الدم الحمراء. resuspend بلطف بيليه مع 500 ميكرولترات من خلايا الدم الحمراء تحلل العازلة واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق. ثم، إضافة خمسة ملليلتر من برنامج تلفزيوني.
أجهزة الطرد المركزي بسرعة تتراوح بين 113 و 163 مرة ز لمدة خمس إلى سبع دقائق في درجة حرارة الغرفة. إزالة بعناية من فوق سنط و resuspend بيليه مع ثقافة المتوسطة ونقل الخليط إلى طبق معقمة 10 سم. احتضان الثقافة في 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون، مع التأكد من استبدال المتوسطة مع المصل التي تحتوي على المتوسطة كل يومين إلى ثلاثة أيام.
في هذه الدراسة, يتم إنشاء سرطان المعدة نماذج PDX وخطوط الخلايا الأولية. وينظر إلى أول ورم تنمو ببطء أكثر من تلك الموجودة في الأجيال اللاحقة، مع أخذ ثلاثة أسابيع أو أكثر للوصول إلى الحجم المناسب. معدل نجاح الجيل الأول من تكوين الورم تحت الجلد هو أكثر من 80٪ يتم تأكيد هوية الخلايا السرطانية من نماذج PDX من نماذج PDX بواسطة تلطيخ H & E.
ويعتبر معدل نجاح تكوين الورم من أنسجة الورم cryopreserved أن تكون خلايا الورم 95٪ تقريبا يمكن التعرف عليها بسهولة من خلال الاختلافات في مورفولوجيا. يتم توثيق الخلايا الأولية بشكل مستقل من قبل اثنين من أخصائيي الأمراض تحت المجهر. لمزيد من التأكيد، يتم استخدام تلطيخ H&E لمراقبة مورفولوجيا الخلايا السرطانية بعد التثبيت.
معدل العزلة الناجحة لخطوط الخلايا الأولية هو ما يقرب من 40٪ وقد ثبت أن هذه النماذج أن تكون تنبؤية من النتائج السريرية ويجري استخدامها لتقييم المخدرات قبل السريرية عن طريق تحديد علامة، والدراسات البيولوجية، واستراتيجيات الطب الشخصية.
