يتكون نظام الصيام المتقطع من يومين إلى واحد من يوم واحد من الصيام يتبعه يومان من التغذية يجعل من الممكن دراسة آثار التدخلات الغذائية التي تنطوي على تقييد الطاقة بشكل دوري بدلاً من آثار السعرات الحرارية. على عكس الصيام يوم بديل، مما يؤدي إلى تحت تغذية اثنين إلى واحد الصيام المتقطع يوفر الفئران مع ما يكفي من الوقت للتعويض الكامل عن فقدان الطاقة وخفض وزن الجسم، والذي يحدث أثناء الصيام. وهذا يسمح للعلماء بفحص آثار الصيام الدوري بشكل مستقل عن السعرات الحرارية.
اثنين إلى واحد الصيام المتقطع يعزز عددا من الفوائد ضد النظام الغذائي في استخدام في السمنة والخلل الأيضي المرتبطة بما في ذلك اختلال التوازن الجلوكوز وأمراض الكبد الدهنية. ويمكن تعديل هذا البروتوكول بسهولة لنظام غذائي خمسة إلى اثنين يتكون من خمسة أيام من التغذية ويومين من الصيام أو التغذية المقيدة الزمنية حيث يقتصر الحصول على الطعام على ثماني ساعات في اليوم. إذا كان أحد يستخدم نموذج الماوس، التي تظهر سلوك التغذية البديلة، مثل hyperphagia، قد لا يكون تغذية libitum الإعلانية شرط التحكم المناسبة.
في هذه الحالة، سوف تكون هناك حاجة إلى قاعدة تغذية الزوج لفحص ومقارنة آثار الصيام المتقطع. ابدأ بإعداد نظام غذائي طبيعي أو نظام غذائي عالي الدهون لنماذج ماوس السمنة المستحثة بالدهن والحمية. قياس وزن الجسم الأساسي وتكوين كل سبعة أسابيع من العمر الماوس C57BL/6J الذكور باستخدام مقياس و EchomRI، على التوالي.
استناداً إلى الوزن وتكوين الجسم النتائج بشكل عشوائي وعلى قدم المساواة تقسيم الفئران إلى مجموعتين: الإعلانية libitum أو AL، والصيام المتقطع أو مجموعات IF. ثم ضع اثنين أو ثلاثة فئران في القفص لضمان حصول الفئران على مياه الشرب مجانًا. السماح للفئران أسبوع واحد للتأقلم مع بيئة القفص الجديدة قبل بدء نظام IF.
عندما تكون جاهزة لبدء فترة الصيام، نقل الفئران إلى قفص نظيف مع الفراش الطازج في الساعة 12:00 .m. توفير كمية من الطعام المرجح لمجموعة AL. لا طعام لمجموعة IF.
بعد 24 ساعة، تزن الفئران في كلتا المجموعتين، فضلا عن بقايا الطعام في أقفاص AL. في الساعة 12:00 .m، وتوفير كمية مرجحة من المواد الغذائية لكل من AL وIF المجموعات.
مرة واحدة في فترة التغذية هو أكثر من قياس وزن الفئران وبقايا الطعام. كرر الدورة طوال مدة الدراسة. إعداد تغذية الزوج أو مجموعة PF تسيطر على مدة التجربة من أجل ضمان مقارنة مستقلة عن السعرات الحرارية إلى IF. قياس كمية الطعام المستهلكة من قبل مجموعة IF.
قم بتقسيمه بالتساوي إلى ثلاثة أجزاء وتوفير جزء واحد يوميًا إلى عنصر تحكم PF. عند العمل مع الحيوانات مع السلوكيات الغذائية المتغيرة، مثل فرط الفاتغة، من المهم توفير كمية متساوية من الطعام يوميا لمجموعة التحكم التي تغذيها الزوج من أجل منع الفئران من تناول الطعام في كل مرة. لتحليل تكوين الجسم من الفئران بدوره على تحليل تكوين الجسم، وترك الجهاز على لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات للاحماء.
قبل استخدامه، قم بتشغيل اختبار نظام لضمان دقة القياس. وإذا لزم الأمر، معايرة النظام مع زيت النيولا. قياس وزن الجسم لكل فأرة.
ثم، وضعه في حامل أسطواني الحيوانات الصغيرة. إدراج محدد لتقييد الحركة الفعلية للماوس أثناء القياس. ضع الحامل في محلل تكوين الجسم.
تشغيل برنامج المسح الضوئي، والتي يجب أن تستغرق 90 إلى 120 ثانية. ثم، إزالة حامل من المعدات. ضع الفأرة في القفص
إجراء اختبار تحمل الجلوكوز والأنسولين لفحص آثار الصيام المتقطع على التوازن الجلوكوزي. بعد الصيام بين عشية وضحاها أو ست ساعات، قم بإجراء حقنة داخل الصفاق من الجلوكوز أو الأنسولين على كل فأر. ثم, قياس السكر في الدم في 0, 5, 15, 30, 60, و 120 دقيقة حقنة بعد باستخدام glucometer.
للتحقيق في آثار الصيام المتقطع على استقلاب الطاقة ، قم بإجراء قياس حراري غير مباشر على مدى دورة واحدة من IF. بعد أن تتأقلم الفئران مع النظام ، سرعتها عن طريق إزالة الطعام والفتات من النطاط وأسفل القفص. إعادة تقديم الطعام بعد 24 ساعة لفترة إعادة التغذية لمدة يومين. في نهاية دورة IF ، أحضر الفئران مرة أخرى إلى قفصها الأصلي وجمع البيانات من البرنامج.
شهدت الفئران التي صامت لمدة 24 ساعة ما يصل إلى 10٪ انخفاض في وزن الجسم، والتي تم استردادها بالكامل بعد يومين من إعادة التغذية. عند مقارنة كمية الطاقة بين واحد إلى واحد واثنين إلى صيام متقطع واحد ، تبين أن يومًا واحدًا من فترة إعادة التغذية لم يكن كافيًا للتعويض عن السعرات الحرارية المفقودة التي حدثت أثناء الصيام. بالمقارنة مع AL، أدى العلاج IF إلى انخفاض وزن الجسم زيادة في الفئران من النوع البرية التي تتغذى مع الطعام العادي أو النظام الغذائي عالي الدهون دون اختلافات كبيرة في تناول الطعام.
وكشف تحليل تكوين الجسم أن IF خفض كتلة الدهون دون تغيير كتلة العجاف في الفئران من النوع البري. أكدت التجارب مع التحكم في تغذية الزوج أن انخفاض زيادة وزن الجسم من قبل IF لم يكن بسبب تغيير كمية الطاقة في الفئران من النوع البري. ومع ذلك ، في السمنة الوراثية ، ob / ob ، الفئران الزوج تغذية مجموعة السيطرة كان لا يمكن أن يعزى عن مجموعة IF في وزن الجسم وتكوين الجسم.
وأظهرت اختبارات تحمل الجلوكوز والأنسولين أن النظام الغذائي عالي الدهون IF الفئران أظهرت تحسنا كبيرا في التوازن الجلوكوز مقارنة مع النظام الغذائي عالية الدهون AL وارتفاع الدهون حمية فئران تغذية الزوج. في فئران ob/ob، أظهرت مجموعة IF معالجة الجلوكوز المحسنة بشكل كبير مع رحلات الجلوكوز الصغيرة مقارنة بمجموعة التحكم التي تغذيها الزوج مع حساسية الأنسولين غير المتأثرة. وكان تأثير أيضي آخر من IF لوحظ في الفئران من النوع البري ارتفاع استهلاك الأكسجين يدل على نفقات الطاقة على وجه التحديد خلال فترة التغذية.
يمكن أن يتأثر سلوك تغذية الفئران بالعوامل البيئية بما في ذلك كثافة السكن. لذلك ، من المهم الحفاظ على نفس العدد من الفئران في قفص واحد بين المجموعات وعلى مدار الدراسة. عند استخدام نموذج ماوس جديد، فمن المستحسن لدراسة سلوك التغذية قبل إجراء تجربة الصيام المتقطعة.
يمكن تطبيق الصيام المتقطع من إيزوكالوسريكين إلى واحد بسهولة على نماذج أمراض أخرى بما في ذلك السكري وأمراض القلب وتصلب الشرايين والأمراض العصبية.
