الأكسجين التدرج ektacytometry هو مقايسة وظيفية أن تقييم ميل المنجلي الفردية. حتى الآن، لا تتوفر أو تستخدم أي مقايسات وظيفية أخرى. الأكسجين التدرج ektacytometry قادرة على تحديد التوتر الأكسجين الذي خلايا الدم للمريض مع مرض الخلايا المنجلية تبدأ في المنجل.
هذا التوتر الأكسجين هو المريض محددة ويمكن أن تكون بمثابة علامة حيوية لشدة المرض. في مرض الخلايا المنجلية، يمكن استخدام هذه التقنية لرصد فعالية العلاج ويمكن استخدامه لتطوير علاجات جديدة. العرض التوضيحي المرئي لهذه التقنية مهم لأنه حساس جداً.
هناك العديد من العوامل التي سوف تؤثر على القياس الذي كنت لا تعرف عند بدء العمل مع هذه التقنية. شخص يحاول هذا للمرة الأولى قد تواجه أن هذه التقنية حساسة جدا لإعداد العينة والتعامل مع العينة. نصيحتي هي العمل موحدة قدر الإمكان وتطوير روتين.
لبدء هذا الإجراء، قم بتشغيل الكمبيوتر ومقياس ektacytometer وفتح البرنامج على الكمبيوتر. افتح أسطوانة النيتروجين للتأكد من توفر النيتروجين لتكلس العينة. خفض بوب في الكأس وتأكد من أن الكأس يمكن أن تتحول بحرية.
عند تشغيل البرنامج، تحقق من الرسالة تأكد من أن صمام الغاز مفتوح وانقر فوق موافق. تأكد من أن ektacytometer يبدأ عملية التحقق الذاتي وحدد بداية. إذا فشل الاختيار الذاتي، إعادة تشغيله عن طريق النقر فوق فحص الأجهزة، pO2، الذاتي الاختيار. اختر مسح PO2 من الاختبارات المختلفة المدرجة على اليسار.
اختر الإعدادات الموجودة على يمين الشاشة وتأكد من أنها تم تعيينها حسب المعلمات المذكورة في جدول واحد من بروتوكول النص مع التأكد من الاحتفاظ بنفس الإعدادات لكل قياس. احفظ هذه الإعدادات بالنقر فوق موافق، ثم النقر فوق موافق مرة أخرى. أولاً، جمع عينات الدم عن طريق التشظي في أنبوب يحتوي على EDTA وتخزين الدم عند أربع درجات مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل ولكن لا تزيد عن 24 ساعة.
بعد ذلك، اخلط العينات بلطف عن طريق عكس إلى تجانس. السماح للعينات الاحماء لدرجة حرارة الغرفة على مقعد الأسطوانة قبل القياس. استخدام محلل أمراض الدم لقياس تعداد الدم الكامل عن طريق وضع الالطموح في الأنبوب والضغط على الزر وراء إبرة محلل أمراض الدم لبدء القياس وسوف يستخدم المحلل بين 20 و 200 ميكرولترات من الدم كله.
ثم توحيد عينة الدم كله إلى عدد RBC من 200 مليون من خلايا الدم الحمراء في خمسة ملليلتر من PVP عن طريق حساب حجم العينة التي سيتم إضافتها. للبدء، وقطع تلميح ماصة وقبل الرطب عن طريق إعادة تعليق الدم ثلاث مرات. ثم الماصة حجم العينة المحسوبة في قارورة PVP.
بلطف مزيج العينة يدويا عن طريق عكس حتى أنها متجانسة. رسم ببطء مليلتر من الدم وخليط PVP في حقنة ثلاثة ملليلتر دون الإبرة. دفع المكبس لإزالة أي فقاعات الهواء مرئية وحل عينة الزائدة حتى يتم ترك ما بين 1.5 و 1.8 ملليلتر في الحقنة.
قم بإدخال حجم العينة الإجمالية ببطء وبشكل زوجي في البوب من خلال الموصل. تأكد من أن مستوى العينة فوق جهاز استشعار الأكسجين وثقب الشفط الصغير. في البرنامج، انقر فوق جديد وملء في معرف العينة، والملاحظات، وتاريخ التبرع، واللزوجة من PVP.
انقر فوق موافق وpirate. بعد 60 ثانية من التعرق، يتحول الكأس ويتبخر مرة أخرى لمدة 15 ثانية. عند توقف الاستدارة، انقر فوق موافق. أغلق غطاء الجهاز.
انقر فوق متابعة والبدء الآن كما يتم ektacytometry تدرج الأكسجين مع مكسب ثابت. بعد القياس، اطبع التقرير الذي يعرض المنحنى والمعلمات التي يتم حسابها تلقائيًا من قبل البرنامج. تأكد من تخزين البيانات الأولية تلقائيًا في المجلد المعين في الإعدادات.
أولاً، قم بإزالة حقنة العينة واستبدلها بحقنة مملوءة بالماء المقطر أو الماء الأيوني. اضغط على تنظيف ومسح الموصل ببطء أثناء الشطف مع التأكد من تدفق في كلا الاتجاهين. المقبل، وإزالة حقنة ورفع بوب.
استخدم قطعة قماش ناعمة لتجفيف البوب والموصل تمامًا. ثم استخدام حقنة كبيرة لمسح الموصل من أجل إزالة أي ماء المتبقية في أنبوب وبوب. الحفاظ على حقنة في مدخل ومنع منفذ بوب للحصول على الضغط مرة أخرى في الأنابيب وبالتالي إزالة المياه المتبقية.
ثم جفف الكأس مع تجنب لمس بقعة الأكسجين. خفض بوب والكأس تجهيز الجهاز للقياس المقبل. بعد التأكد من أن يتم شطف الجهاز بشكل صحيح، تحقق للتأكد من أن الأنابيب المناسبة تتعلق بمحلول التنظيف.
أغلق البرنامج، واضغط على إغلاق، ثم اضغط على البدء لبدء برنامج التنظيف في نهاية اليوم. ثم إفراغ زجاجة النفايات واستخدام قطعة قماش ناعمة لتجفيف بوب والكأس. أغلق غطاء الجهاز.
أغلق أسطوانة النيتروجين واطفئ الكمبيوتر والآلة. يمكن استخدام قياس الأكسجين المتدرجة في استئصال الدم لدراسة السلوك المنجلي لخلايا الدم الحمراء تحت مجموعة من تركيزات الأكسجين. في قياس الأكسجين المتدرجة، يتبع إزالة الأكسجين المستمر للعينة بواسطة غاز النيتروجين إعادة الأكسدة السريعة بواسطة الهواء المحيط.
في ظل هذه الظروف، يمكن ملاحظة انجلس خلايا الدم الحمراء تحت deoxygenation. وهذا سوف يسبب تشويه نمط الانعراج لأن الخلايا الحمراء المنجلية لن محاذاة بشكل صحيح تحت ضغط القص المطبق. تظهر خلايا الدم الحمراء المنجلية تغيرًا في الشكل أثناء إزالة الأكسجين الذي يحاكي الظروف أثناء قياس الأكسجين الانحداري ولكنه لا يظهر أي تغيير في الشكل عند التكاثيف بالأكسجين.
هذه العملية يؤدي إلى تشويه نمط الحيود أثناء ektacytometry تدرج الأكسجين وبالتالي في انخفاض في مؤشر التمضان. يُظهر منحنى تمثيلي تم الحصول عليه بواسطة مقياس التكاتس المعلمات الستة التي تعكس خصائص مختلفة للسلوك المنجلي: مؤشر استطالة الحد الأقصى، ومؤشر الحد الأدنى للإطالة، ودلتا EI، ونقطة المنجلي، والمساحة تحت المنحنى، والانتعاش. المنحنيات التمثيلية لخلايا الدم الحمراء من الضوابط الصحية، والمرضى الذين يعانون من الصفات HbS، ومرض مرض الخلايا المنجلية homozygous تظهر هنا.
الاختلافات الواضحة في منحنيات تمثيلية من مرضى الخلايا المنجلية homozygous تعامل مع اليوريا الهيدروكسيل ونقل الدم يسلط الضوء على فائدة هذه الأقوال. هناك العديد من العوامل التي تؤثر على ektacytometry تدرج الأكسجين مثل درجة الحرارة، ودرجة الحموضة، وosmolarity من PVP، ولكن أيضا بقايا المياه ودرجة خلط محلول عينة الدم يمكن أن تؤثر على القياسات. ولذلك، من الضروري معالجة العينات الموحدة.
يمكن تنفيذ نتيجة قياس الأكسجين المتدرجة مباشرة في الممارسة السريرية ، مما يساهم في الطب الشخصي. هذه التقنية تجعل من الممكن لدراسة سلوك المنجلي للتحقيق في إمكانات العلاجات الجديدة لمرض الخلايا المنجلية ويمكن أن تكون بمثابة علامة حيوية ذات صلة سريريا لشدة المرض.
