يمكن أن تساعد هذه الطريقة في تحديد متطلبات التلقيح في أنواع مختلفة وإنشاء علاقات عدم التوافق بين الأصناف. والميزة الرئيسية لهذا النهج هي أنه يسمح بتقييم العديد من حالات عدم التوافق في ظل ظروف المختبر. تجنب المشاكل العديدة التي يمكن أن تحدث في التجارب التي يتم تنفيذها في ظل ظروف الميدان.
وهذا يسمح بتحديد جنبا إلى جنب مع تكريس عدد من أصناف لجماعات عدم التوافق المقابلة. تحديد العلاقة بين التوافق بين الأصناف. هذا النهج يمكن أن تكون مفيدة أيضا لتحديد عدم التوافق الذاتي وعدم التوافق العلاقة في غيرها من المحاصيل شجرة الفاكهة مثل الكرز أو البرقوق.
تبدأ بأخذ عينات من الزهور في هذا المجال. جمع الزهور في مرحلة البالون، الذي يتوافق مع المرحلة 58 على مقياس بي بي سي للمشمش لتجنب التلقيح السابقة. في المختبر، وإزالة الذرات من الزهور ووضعها على قطعة من الورق لتجف في درجة حرارة الغرفة.
بعد 24 ساعة، غربال حبوب اللقاح مع غرامة 26 ملليمتر شبكة. Emasculate مجموعة من 30 الزهور في نفس المرحلة التنموية البالون لكل الذاتي وعبر التلقيح ووضع المسدسات على رغوة بائع الزهور في الماء بعد 24 ساعة من الإماهة والتلقح المسدسات باستخدام فرشاة الطلاء مع حبوب اللقاح من الزهور من نفس الأصناف. تلقيل مجموعة أخرى من مسدسات كل أصناف مع حبوب اللقاح من الزهور من ملقح متوافق كتحكم.
بعد 72 ساعة، وإزالة المسدسات من رغوة بائع الزهور الرطب وإصلاح المسدسات في حل التثبيت من 3:1 الإيثانول لحمض الخليك لمدة 24 ساعة على الأقل في 4 درجات مئوية. ثم تجاهل المثبت وإضافة 75٪ الإيثانول، والتأكد من أن العينات مغمورة تماما في الحل. يمكن تخزين العينات في الإيثانول عند 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.
تشتت حبوب اللقاح من نفس الأصناف المستخدمة في التلقيحات التحكم في ترسخ حبوب اللقاح المتوسطة ومراقبة لهم تحت المجهر بعد 24 ساعة. إعداد المسدسات للمجهر عن طريق غسلها 3 مرات بالماء المقطر لمدة ساعة واحدة في الغسيل. بعد الغسيل الأخير، اتركها في كبريتيد الصوديوم بنسبة 5٪، عند 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة.
ثم اطقم بها في كيلوغرام واحد لكل سنتيمتر مربع لمدة 10 دقائق في كبريتيت الصوديوم لتليين الأنسجة. ضع المسدسات المُلقّرة على شريحة زجاجية واستخدم مشرطًا لإزالة الـtrichomes حول المبيض. ثم اسحق المسدس بغطاء زجاجي
تطبيق قطرة من aniline الأزرق على الاستعدادات لطخة ترسبات قاسية خلال نمو أنبوب حبوب اللقاح ومراقبة أنابيب حبوب اللقاح على طول النمط مع المجهر وفقا لاتجاهات المخطوطات. استخدام مجموعة تجارية لاستخراج الحمض النووي الجينومي من أوراق الشباب التي تم جمعها في فصل الربيع. ثم قم بإعداد PCR عن طريق الجمع بين الكواشف وفقًا لاتجاهات المخطوطات.
دوامة مزيج التفاعل وتوزيعه بين الآبار في لوحة PCR. أضف 1 ميكرولتر من تخفيف الحمض النووي في كل بئر وتشغيل PCR باستخدام برنامج الدراجات الحرارية الموضحة في المخطوطة. بمجرد اكتمال التفاعل، تحليل النتائج باستخدام الكهرباء الشعرية أو agarose هلام الكهرباء.
لكهربائيات الشعيرات الدموية إضافة 1 ميكرولتر من المنتج PCR في بئر لوحة القارئ جنبا إلى جنب مع 1 قطرة من الزيوت المعدنية لمنع تبخر المياه. ثم قم بإعداد لوحة الفصل بإضافة عازلة الفصل. استخدام البرمجيات التجارية لمحلل الجينات لإنشاء لوحة عينة جديدة وحفظ أسماء العينات لجميع الآبار على لوحة.
ثم حدد طريقة التحليل وأدخل اللوحتين في محلل الجينات. املأ صفيف الشعيرات الدموية بالماء المقطر. تحميل هلام polyacrylamide خطي وانقر فوق تشغيل.
إذا تحليل نتائج PCR مع جل الكهرباء، وإعداد جل agarose 1٪عن طريق حل agarose في الكهرباء تعمل العازلة وفقا لاتجاهات المخطوطات. ثم إضافة 4 ميكروليتر من وصمة عار حمض نووي إلى هلام ومزيج بلطف. إعداد علبة هلام مع مشط وتباطؤ صب هلام في منتصف مع الحرص على تجنب فقاعات.
اترك الجل في درجة حرارة الغرفة حتى تتوطد تمامًا ، حوالي 30-45 دقيقة. ثم وضع في غرفة الكهرباء. قم بإزالة المشط واغطيه بمخزن 1x TAE.
تحميل هلام مع سلم الحمض النووي تليها منتجات PCR مختلطة مع صبغة التحميل. ثم تشغيل الجل في 90 فولت لمدة 60-90 دقيقة حتى خط صبغة زرقاء في ما يقرب من 75٪ من حارة هلام. بمجرد اكتمال المدى، تصور هلام باستخدام transilluminator.
وقد لوحظ نمو أنبوب اللقاح في التلقيح الذاتي وعبر عن طريق المجهر الفلوريس لتحديد النفس (في) التوافق لكل أصناف. اعتبرت أصناف كان في ذاتيّة يتعارض عندما [لقاح] أنابيب تمّ أوقفت نموّ و [سلف-ويف] عندما على الأقلّ واحدة لقاح أنبوب يبلغ القاعدة من الأسلوب. واستخدمت 5 تركيبات زوج التمهيدي لتحديد S-alleles باستخدام PCR في تركيبة مع الشعيرات الدموية أو جل الكهربائي.
أولاً، تم تحديد S-alleles من خلال تضخيم أول S-RNase intron باستخدام زوج التمهيدي SRc. ثم تم تضخيم intron الثاني من RNase مع ثلاث مجموعات التمهيدي لتمييز S6، S9، S1، و S7 alleles. وتم تضخيم مناطق متغير V2 وHVB من جين SFB مع تعيين التمهيدي AprFBC8 لتحديد أليل Sc و S8.
وبمجرد تحديد الـ S-alleles، يمكن إنشاء مجموعات مختلفة من عدم التوافق مع الأنماط الجينية التي تكون غير متوافقة. من المهم أن نتذكر أن استخدام التحكم في الكهرباء الشعرية، لأنها تستخدم نظام تحليل أجزاء التلقائي التي يمكن أن تقرير كأكثر الاختلافات في حجم جزء تسبب تحديد غير دقيقة أليل. وقد أدى الجمع بين الملاحظات المجهرية والتحليل الجيني إلى اتباع نهج مفيد للغاية لتحديد عدم التوافق الذاتي في المشمش وإقامة علاقات عدم التوافق بين الأصناف.
عدم التوافق الذاتي هو الآن الرابط للسكان المحليين في المشمش. ويبدو أن تحديد العوامل ينطوي على ذلك. وينبغي تركيز الجهود في المستقبل على التصحُر الجيني لهذا التنوع في المشمش.
وينتَجَد هذا النهج الوثائقي في معلومات قيِّمة من أجل الاختيار المناسب للنظيفات في البساتين التجارية وأنماط نمطية في برامج تربية المشمش. ويمكن استخدام نهج مماثل في المحاصيل المعمرة الخشبية الأخرى.
