Bu yöntem, farklı türlerde tozlaşma gereksinimlerini belirlemeye ve çeşitleri arasında uyumsuzluk ilişkileri kurulmasına yardımcı olabilir. Bu yaklaşımın en büyük avantajı, laboratuvar koşullarında çeşitli uyumsuzlukların değerlendirilmesine olanak sağlamasıdır. Alan koşullarında gerçekleştirilen deneylerde oluşabilecek çok sayıda sorundan kaçınmak.
Bu, bir dizi çeşidin ilgili uyumsuzluk gruplarına ithafı ile birlikte tanımlamasağlar. Çeşitleri arasındaki uyumluluk ilişkisinin belirlenmesi. Bu yaklaşım aynı zamanda kiraz veya erik gibi diğer meyve ağacı bitkileri kendi kendine uyumsuzluk ve uyumsuzluk ilişkisini belirlemek için yararlı olabilir.
Alandaki çiçekleri örnekleyerek başlayın. Önceki tozlaşmaönlemek için kayısı için BBCH ölçeğinde Sahne 58 karşılık gelen balon aşamasında, çiçekleri toplayın. Laboratuvarda, çiçek anthers çıkarın ve oda sıcaklığında kuruması için bir kağıt parçası üzerine yerleştirin.
24 saat sonra polen tanelerini 26 milimetrelik ince bir örgü ile elek. Her kendi kendine ve çapraz tozlaşma için aynı balon gelişim aşamasında 30 çiçek bir grup emasculate ve emasculation 24 saat sonra su çiçekçi köpük üzerinde tabanca yerleştirin ve aynı tarikat çiçekpolen ile bir boya fırçası kullanarak tabanca tozlaşma. Bir kontrol olarak uyumlu bir tozlaştırıcı çiçek polen ile her çeşit tabanca başka bir dizi tozlaşma.
72 saat sonra, ıslak çiçekçi köpük tabanca kaldırmak ve 4 santigrat derece en az 24 saat asetik asit 3:1 etanol bir fiksatif çözelti tabanca düzeltmek. Daha sonra fiksatif atın ve% 75 etanol ekleyin, örnekleri tamamen çözelti içinde batık olduğundan emin olun. Numuneler kullanıma kadar etanolde 4 santigrat derecede saklanabilir.
Katılaşmış polen çimlenme ortamında kontrol polenleri için kullanılan aynı çeşitlerin polen tanelerini dağıtın ve 24 saat sonra mikroskop altında gözlemleyin. Tabancaları her yıkamada bir saat damıtılmış suyla 3 kez yıkayarak mikroskopi için hazırlayın. Son yıkamadan sonra, 24 saat boyunca 4 santigrat derecede %5 sodyum sülfit bırakın.
Sonra bir kilogram santimetre kare 10 dakika sodyum sülfit doku yumuşatmak için onları otoklav. Bir cam slayt üzerine otoklavlı tabanca yerleştirin ve yumurtalık etrafında trichomes kaldırmak için bir neşter kullanın. Sonra bir coverglass ile tabanca ezmek.
Polen tüpü büyümesi sırasında duyarsız depozeleri lekelemek için preparatların üzerine bir damla aniline mavisi uygulayın ve polen tüplerini el yazması talimatlara göre bir mikroskopla stili boyunca gözlemleyin. İlkbaharda toplanan genç yapraklardan genomik DNA elde etmek için ticari bir kit kullanın. Daha sonra el yazması talimatlara göre reaktifleri birleştirerek PCR'yi ayarlayın.
Reaksiyon karışımını girdaplayıp PCR plakasındaki kuyular arasında dağıtın. Her kuyuya 1 mikrolitre DNA seyreltme ekleyin ve el yazmasında özetlenen termo-bisiklet programını kullanarak PCR çalıştırın. Reaksiyon tamamlandıktan sonra, kapiller elektroforez veya agarose jel elektroforez kullanarak sonuçları analiz.
Kapiller elektroforez ler için, su buharlaşmasını önlemek için 1 damla mineral yağ ile birlikte okuyucu plakasının kuyusuna 1 mikrolitre PCR ürün ekleyin. Daha sonra ayırma tamponu ekleyerek ayırma plakasını hazırlayın. Yeni bir örnek plaka oluşturmak ve plakaüzerindeki tüm kuyular için örnek adlarını kaydetmek için gen analizörü için ticari yazılımı kullanın.
Daha sonra analiz yöntemini seçin ve iki plakayı gen analizörüne yerleştirin. Kılcal damar dizisini distile suyla doldurun. Lineer poliakrilamid jel yük ve çalıştır tıklatın.
PCR sonuçlarını jel elektroforez ile analiz ediyorsanız, el yazması yönlere göre tampon çalıştıran elektroforezdeki agarose eriterek %1 agarose jel hazırlayın. Sonra jel için nükleik asit leke 4 mikrolitre ekleyin ve yavaşça karıştırın. Bir tarak ile bir jel tepsi ayarlayın ve kabarcıklar önlemek için özen orta jel dökün yavaşlıyor.
Tamamen katılaşmış kadar oda sıcaklığında jel bırakın, yaklaşık 30-45 dakika. Sonra elektroforez odasına koyun. Tarak çıkarın ve 1x TAE tampon ile kaplayın.
Jeli DNA merdiveni ile yükleyin ve ardından PCR ürünleri yükleme boyası ile karıştırın. Sonra mavi boya hattı jel şerit yaklaşık% 75 olana kadar 60-90 dakika boyunca 90 volt jel çalıştırın. Çalışma tamamlandıktan sonra, jeli bir transilluminator kullanarak görselleştirin.
Floresan mikroskopi ile her bir çeşit için kendi kendine uyumluluğu belirlemek için polen tüpü büyümesi gözlendi. Polen tüpü büyümesi tutuklandığında ve en az bir polen tüpü tarzının tabanına ulaştığında kendi kendine uyumlu olarak kabul edildi. 5 astar çifti kombinasyonları kılcal veya jel elektroforez ile birlikte PCR kullanarak S-alelleri tanımlamak için kullanılmıştır.
İlk olarak, S-alelleri SRc primer çifti kullanılarak ilk S-RNase intron amplifikasyonu ile tespit edilmiştir. Daha sonra RNase'nin ikinci intronu, S6, S9, S1 ve S7 alellerini ayırt etmek için üç astar setiyle güçlendirildi. SFB geninin V2 ve HVB değişken bölgeleri, Sc ve S8 alellerini tanımlamak için AprFBC8 astar seti ile güçlendirilmiştir.
S-alelleri belirlendikten sonra, uyumsuz genotiplerle farklı uyumsuz gruplar oluşturulabilir. Kapiller elektroforezlerde kontrolü kullanmayı unutmamak önemlidir, çünkü parça boyutunda yanlış alel tanımlamasına neden olan daha fazla farklılık olarak rapor edebilen otomatik bir parça analiz sistemi kullanırlar. Mikroskopi gözlemleri ve genetik analizin birleşimi kayısıda kendi kendine uyumsuzluğu belirlemek ve çeşitleri arasındaki uyumsuzluk ilişkilerini kurmak için çok yararlı bir yaklaşım almıştır.
Kendi kendine uyumsuzluk artık kayısı yerlileriçin bağlantıdır. Faktörlerin belirlenmesi dahil gibi görünüyor. İleride yapılacak çalışmalar kayısıdaki bu çeşidin genetik olarak dinlendirilmesine odaklanmalıdır.
Bu belgesel yaklaşımın birleşimi, ticari meyve bahçelerinde çeşitlerin uygun seçimi ve kayısı yetiştirme programlarında desen genotiplerinin seçilmesi için değerli bilgilerle sonuçlanmaz. Benzer bir yaklaşım diğer odunsu çok yıllık bitkileri kullanılabilir.
