يسمح هذا البروتوكول بالتسليم المباشر للعلاجات في الجهاز العصبي المركزي للجرذان لتقييم العوامل الدوائية والديناميكا الدوائية وفعالية العلاجات الجديدة في نماذج أمراض الفئران. هذا الإجراء آمن وفعال ولا يتطلب معدات باهظة الثمن أو أدوات جراحية. وسوف يكون إثبات الإجراء يي تشن ويي لو، علماء البحوث من مختبري.
لإعداد cannulas دليل خاص، واستخدام أداة دوارة مع قطع عجلة لقطع كلا طرفي إبرة قياس 19 للحصول على ما يقرب من واحد ونصف إلى اثنين من cannula دليل سنتيمتر طويل. ثم استخدام عجلة طحن من أداة دوارة على نحو سلس كلا الطرفين. لإعداد الجمعية الأسلاك القسطرة، وقطع واحد قطعة طولها ثمانية سنتيمترات من 011 بوصة قطر PE10 الأنابيب لتكون بمثابة القسطرة داخل القثطار لكل.
استخدم قلم علامة مقاومة الإيثانول لجعل علامة سمين من نهاية واحدة من كل قطعة من الأنابيب. لكل حيوان، إدراج سلك نمط 11 سنتيمترا طويلة قطع من البوليتيترافلورو الإيثيلين المغلفة أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ في تجويف القسطرة PE10 سنتيمتر ثمانية. لإعداد تجميع قسطرة التسليم، قطع قطعة من خمسة إلى 10 سنتيمتر 023 بوصة قطر PE50 القسطرة وإدراج محول أنابيب قياس 23 في نهاية واحدة من القسطرة.
ثم أدخل إبرة قياس 30 مع محور قطع إلى ما يقرب من 0.5 سنتيمتر قطعة من أنابيب PE10 وربط أنابيب PE10 إلى الطرف الآخر من القسطرة. لإعداد دليل تجميع الإبرة cannula، وضع قنية دليل على نهاية إبرة قياس 23. قبل البدء في الجراحة، ضع وسادة تسخين على طاولة الجراحة واغطي الوسادة بغطاء معقمة من الأغطية.
ضع أنبوب طرد مركزي مخروطي 50mL على الورقة وتأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع في الجرذ التجريبي المُجرف. بعد وزن الحيوان، حلق الظهر من الذيل إلى العمود الفقري الصدري السدي ووضع الجرذ الحليق على ورقة معقم في موقف عرضة. ضع أنبوب 50 مل تحت البطن لثني العمود الفقري في منطقة أسفل الظهر ، وتطبيق مرهم العيون على العينين.
المقبل، حقن تحت الجلد مليغرام واحد لكل كيلوغرام من الإفراج المستمر Buprenorphine وتنظيف الجلد المكشوفة مع povidone متتابعة والدعك الكحول. ثني الحيوان مع ورقة شفافة معقم. لوضع القسطرة وحقن المركب ، حدد الحفرتين الطبيعيتين بين العضلات فوق الحوض الحليق ، ومع وجود يد واحدة تحمل الحفر ، استخدم اليد الأخرى للضغط بلطف والشعور بالعمود الفقري من الاتجاه السدي إلى الاتجاه التاجي لتحديد المسافة البادئة الرئيسية الأولى بين الفقرات.
بعد تحديد الفضاء بين الفقرات بين الفقرتين S1 و L6، انتقل قليلاً إلى حد ما لتحديد الفضاء بين الفقرات بين الفقرتين L5 و L6. استخدام مشرط لجعل شق لا يزيد عن سنتيمترين طويلة في الجلد والعضلات كبسولة في هذا الموقع على طول خط الوسط من اتجاه روسترال إلى السد بحيث يكون موقع الحقن في مركز الشق. استخدام مقص تشريح لتشريح بعيدا النسيج الضام حتى يمكن تصور طبقة العضلات.
إجراء شق سنتيمتر واحد في كبسولة العضلات الجانبي على الفور إلى عملية العمود الفقري الظهرية في الفقرات القطنية L6. ضع دليل الإبرة التجميع بالقرب من الجانب الأمامي من الفقرة القطنية السادسة ودفع الجمعية في الفضاء بين الفقرات على طول الجانب الأمامي من الفقرة السادسة بحيث تخترق نهاية الإبرة القناة الشوكية. استخدام ملقط حادة لتحديد موقع عملية العمود الفقري الظهرية من الفقرات القطنية L6 ثم دفع الإبرة على طول الجانب الأمامي من الفقرة السادسة في الفضاء العاكس.
دفع قنية دليل في مكان على طول الإبرة، وإزالة الإبرة، وإدراج تجميع سلك القسطرة في cannula دليل. الالقنان القسطرة في زاوية 45 درجة تقريبا إلى القناة الشوكية، قوة نهاية القسطرة ما يقرب من 0.3 سم في القناة. إزالة سلك نمط ما يقرب من 2.5 سم من داخل الطرف القثطار وتقدم القسطرة في القناة الشوكية حتى وسم اثنين سنتيمتر على القسطرة مرئية فقط تحت العضلات.
عندما يكون القسطرة في مكانها، قم بإزالة قنية الدليل لترك القسطرة والأسلاك في مكانها. تقدم القسطرة في القناة الشوكية حتى علامة سنتيمترين عند مدخل القناة وسحب السلك النمط تماما. يمكن تصور السائل الشوكي الدماغي دخول القسطرة المزروعة.
ثم قم بتوصيل تجميع قسطرة التسليم إلى نهاية القثطار المزروع عبر نهاية إبرة قياس 30. بعد ذلك ، قم بتحميل 60 ميكرولترات من المالحة المعقمة في حقنة 100 ميكروليتر وتحميل بولوس من 30 ميكروليتر من مجمع الاختبار في حقنة ثانية. توصيل حقنة ملحية إلى نهاية محول أنابيب من تجميع قسطرة التسليم وشطف 20 ميكرولترات من المالحة العقيمة في الفضاء داخلالكال.
عندما يتم مسح كل من المالحة، استبدال حقنة المالحة مع حقنة محملة bolus وحقن 30 ميكرولترات من مجمع الاختبار في الفضاء داخلالكال على مدى فترة 30 ثانية. عندما تم تسليم كل من bolus، استبدال حقنة محملة بولوس مع حقنة أخرى محملة المالحة وشطف القسطرة مع 40 ميكرولترات إضافية من المالحة. عندما تم تسليم الحجم الثاني من المالحة، فصل الجمعية قسطرة التسليم من القسطرة المزروعة واستخدام زوج من حار جدا الحرارة معقمة تشريح ملقط لتضييق الخناق على أنابيب لقطع aseptically والحرارة ختم القسطرة المزروعة.
استخدم خياطة أحادية قابلة للامتصاص لتأمين القسطرة المختومة حراريًا إلى النسيج الضام ثم استخدم خياطة غير قابلة للغلق لإغلاق الجلد. ثم استخدم الشاش والملوحة لغسل أي دم من الجلد ووضع الجرذ في حاضنة ساخنة مع المراقبة حتى إعادة الكفاءة الكاملة. في هذه التجربة التمثيلية، تم الحصول على ضربة قاضية جيدة جدا في جميع المناطق التي تم جمعها بعد تسليم oligonucleotide واحد bolus antisense كما هو موضح.
ومع ذلك، تم قياس درجة ما من التباين الإقليمي مع إظهار الحبل الشوكي أعلى نسبة من الضربة القاضية. بعد الحقن الناجح لـ oligonucleotide antisense ، أو علاجات أخرى ، في نموذج مناسب ، يمكن للمرء تقييم العوامل الدوائية ، والديناميكا الدوائية ، وفعالية العلاجات.
