该协议允许将治疗药物直接输送到大鼠的中枢神经系统,以评估大鼠疾病模型中新疗法的药代动力学、药理动力学和疗效。此过程安全、有效,不需要昂贵的设备或手术工具。演示程序将是易晨和易罗,我的实验室的研究科学家。
要准备专用导轨,请使用带切断轮的旋转工具切断 19 量表针的两端,以获得大约 1 个半到 2 厘米长的导轨管。然后使用旋转工具的砂轮使两端平滑。要准备导管总成,请切割一块8厘米长、直径为011英寸的PE10管,作为每种动物的导管。
使用防乙醇的标记笔,从每根管子的一端做两厘米的标记。对于每种动物,将一条 11 厘米长的线材从聚四氟乙烯涂层不锈钢丝切割到 8 厘米 PE10 导管的流明中。要准备输送导管组件,请切割一块直径为 023 英寸的 5 至 10 厘米 PE50 导管,并将 23 量轨导管适配器插入导管的一端。
然后插入一个 30 量表针,将轮毂切断到大约 0.5 厘米的 PE10 油管中,并将 PE10 油管连接到导管的另一端。要准备导管针组件,请将导管放在 23 表针的端上。在开始手术之前,在手术台上放置一个加热垫,用无菌窗帘盖住垫。
将 50mL 锥形离心管放在片上,确认麻醉实验鼠对头趾捏缺乏反应。称量动物后,将背部从尾巴剃到胸椎,然后将剃光的老鼠放在易发位置的无菌纸上。将 50mL 管放在腹部下,使脊柱在腰椎区域弯曲,并涂抹在眼睛的眼科软膏。
接下来,皮下注射每公斤1毫克持续释放的布丙诺啡,并清洁暴露的皮肤与顺序的波维酮和酒精磨砂。用芬斯特化的无菌透明片将动物拖下水。对于导管的放置和复合物的注射,识别剃光的骨盆上方的肌肉之间的两个自然坑,用一只手握住凹坑,用另一只手轻轻按压和感觉脊柱从胸腔到旋转体方向,以定位椎骨之间的第一个主要凹痕。
在确定S1和L6椎骨之间的椎间空间后,稍微移动一点,以识别L5和L6椎骨之间的椎间空间。使用手术刀,使一个不超过两厘米长的切口在这个部位的皮肤和肌肉胶囊沿中线从旋转到骨道方向,使注射部位将在切口的中心。使用解剖剪刀解剖结缔组织,直到肌肉层可以可视化。
在肌肉胶囊中做一厘米切口,立即横向到L6腰椎的后脊柱过程。将导管针组件定位在第六个腰椎前侧附近,沿第六椎骨的前部将组件推入椎间空间,使针的端部穿透脊柱管。使用钝钳定位L6腰椎的背脊过程,然后沿着第六椎骨的前部将针头推入无脊椎空间。
沿着针头将导管管推入原位,取出针头,并将导管丝组件插入导管。将导管以大约 45 度角向脊柱管倾斜,迫使导管的端端进入管中约 0.3 厘米。从导管的内部下部取出约 2.5 厘米的线,将导管推进到脊柱管中,直到导管上的两厘米标记在肌肉下方可见。
当导管就位时,拆下导管管,使导管和样式线保持原位。将导管推进到脊柱管中,直到两厘米的标记位于运河的入口处,并完全收回样式线。脑脊髓液可以可视化进入植入导管。
然后通过 30 量表针端将输送导管组件连接到植入导管的端端。接下来,将60微升无菌盐水装入100微升注射器,将30微升试验化合物的宝条装入第二个注射器中。将盐水注射器连接到输送导管组件的管状适配器端,将 20 微升无菌盐水冲洗到内部空间。
当所有盐水都冲洗后,用装瓶的注射器更换盐水注射器,并在 30 秒内将 30 微升测试化合物注入内侧空间。当所有螺栓已交付后,用另一个盐水加载的注射器更换装有纤维的注射器,然后用另外 40 微升盐水冲洗导管。输送第二卷盐水后,将输送导管组件从植入导管中分离出来,并使用一对非常热的热消毒解剖钳夹住导管,以无菌切割和热封植入导管。
使用可吸收的单丝缝合线将热密封导管固定到结缔组织,然后使用不可吸收的缝合线关闭皮肤。然后使用纱布和盐水清洗皮肤上的任何血液,并放置大鼠在加热培养箱与监测,直到完全恢复。在这个具有代表性的实验中,在单一玻利莫核苷酸传递后收集的所有区域都获得了很好的击倒。
然而,在脊髓的敲击百分比最高时,测量了某种程度的区域变异性。在成功将反义寡核苷酸或其他治疗药物注射到适当的模型中后,可以评估药物动力学、药效学和治疗效果。