يجمع التصوير الضوئي للألياف CSOM بين مؤشر مخصص مرمز وراثيًا وألياف بصرية لمراقبة النشاط العصبي في الحيوان الذي يتحرك بحرية. وهو أمر بالغ الأهمية لفهم كيفية مجموعة معينة من الخلايا العصبية تلعب في توجيه أو الاستجابة لعمل أو حافز. هذه التقنية هي طريقة يمكن الوصول إليها للتسجيل من مناطق محددة في الدماغ يتم تعريفها من خلال الاتصال أو الملفات الشخصية الوراثية ، مع المدمج في السيطرة على فصل الإشارة إلى الضوضاء.
إظهار المعالج سيكون، إيكاترينا مريخوفا، طالبة دراسات عليا في مختبري. تبدأ من خلال تخفيف جميع مسامير على مترجم محور خمسة. المسمار في الحبل التصحيح إلى محول الذي هو الملصقة على مترجم المحور الخمسة.
ثم بدوره على ضوء 470 نانومتر استثارة في انخفاض الطاقة ووضع غيض من الألياف مشيرا إلى شريحة بلاستيكية الفلورسنت السيارات. السجل التالي من أشباه الموصلات المعدنية أكسيد أو كاميرا CMOS في الوضع الحي. زيادة الربح أو ضبط جدول البحث حتى تظهر الصورة عند النقطة المحورية للهدف.
تقدم المترجم محور خمسة نحو الهدف ضمان أن 470 نانومتر ضوء يتركز على الألياف في نهاية SMA أو FC من الحبل التصحيح، حتى يمكن حل صورة على الكاميرا. وأخيراً، قم بضبط محاور X و Y حتى يتم توسيط الصورة وحلها بشكل جيد. تصور الضوء المنبعث من نهاية variole من الحبل التصحيح, كما ينبغي أن تظهر كدائرة متساوي التروبية.
تبدأ من خلال تشغيل جميع الأضواء الإثارة لتصور أفضل الألياف. وضبط مكاسب الكاميرا بحيث لا يتم مشبعة بكسل، وصورة واضحة من الألياف موجودة. ثم تأخذ صورة أولية.
رسم المناطق ذات الاهتمام أو ROIS حول الألياف. والاحتفاظ بها لقياس قيم شدة المتوسط أثناء التسجيلات. للتسجيلات الألياف متعددة، اختبار للمستقلين عن طريق تسجيل مباشر من جميع الألياف.
أشر إلى ألياف واحدة نحو مصدر الضوء، واضغط بإصبع. مراقبة التقلبات في القناة. ثم تطبيق الشريط الملون على نهاية الألياف إلى التسمية التي توازي العائد على الاستثمار الذي الألياف.
وأخيرا، قم بإعداد منطقة التسجيل عن طريق تعليق الحبل التصحيح فوق الساحة باستخدام المدرجات، المشابك، وحاملات. وأخيرا، تأكد من أن الحيوان لن تكون محدودة في الحركة بطول الألياف ويمكن أن تتحرك بحرية في جميع أنحاء الساحة بأكملها. تبدأ من خلال فحص نهاية ألياف الحبل التصحيح بالعين، ومع مجهر الألياف المصغرة.
إذا كان سطح الألياف هو خدش، وإعادة تلميع الألياف باستخدام الألياف فيلم تلميع مع حصى غرامة. ثم تنظيف نهايات جست من الحبل التصحيح مع 70٪ الإيثانول والقطن طرف قضيب. تنظيف الألياف البصرية cannulas باستخدام 70٪ الإيثانول والقطن طرف قضيب.
قم بتوصيل نهاية الزى من الحبل اللاصق بالألياف المزروعة باستخدام كم خزفي مغطى بأنبوب أسود. أثناء الاتصال، تأكد من أن الأكمام ضيقة. السماح للحيوان لاسترداد لبضع دقائق.
ثم ابدأ بتسجيل الإشارة البصرية، وقم بتشغيل التجربة. بينما تسجيل إبقاء العين دقيق على التتبع الحية لضمان جودة التسجيلات. ومشاهدة أي يقفز في إشارة، مشيرا إلى الأكمام ليست ضيقة بما فيه الكفاية.
للتسجيلات المزدوجة اللون، إضافة 516 nanometer LED إلى نظام القياس الضوئي لإثارة استشعار الكالسيوم الفلورسنت الأحمر، والمرايا والفلاتر dichroic المناسبة. ثم إضافة تقسيم صورة بين الهدف وكاميرا CMOS لفصل أطوال موجة الانبعاثات الخضراء والحمراء. وأخيرا، رسم ROIS حول جميع الألياف في كل من الألوان، الأحمر والأخضر.
تأكد من تحديد كل عائد استثمار بوضوح مع الألياف والقناة المقابلة. تشغيل الإثارة في وقت واحد مع 470 نانومتر، و 560 المصابيح نانومتر، وتناوب عليها مع 410 نانومتر LED. وتشير النتائج إلى أن الفلورس المقاس زاد بشكل كبير بالتزامن مع إدارة نفث الهواء للفئران مع تنشيط مسار LHA-LHB.
ومع ذلك ، في الفئران التي تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر أو GFP ، لم يتم اكتشاف أي تغيير في الإشارة أثناء إدارة نفث الهواء. هذه التقنية تسمح للباحثين لتسجيل معقول من نوع معين من الخلايا في مناطق مختلفة من الدماغ. بينما الحيوان يتصرف بحرية
وهذا يعزز القدرة على تشريح وظائف هذه المناطق الدماغ لأنها تتعلق السلوك.
