הדמיית CSOM של פוטומטריית סיבים משלבת מחוון מותאם אישית מקודד גנטית וסיבים אופטיים לניטור הפעילות העצבית בבעלי חיים הנעים בחופשיות. וזה קריטי כדי להבין איך קבוצה מסוימת של נוירונים לשחק בבימוי או להגיב לפעולה או גירוי. טכניקה זו היא דרך נגישה להקליט מאזורי מוח ספציפיים המוגדרים על ידי הקשר שלהם או פרופילים גנטיים, עם שליטה מובנית להפריד אות לרעש.
הדגמת המעבד תהיה, יקטרינה מרטינובה, סטודנטית לתואר שני במעבדה שלי. התחל על ידי שחרור כל הברגים על מתרגם חמשת הצירים. בורג בכבל התיקון למתאם המודבק על מתרגם חמשת הצירים.
לאחר מכן הפעל את אור העירור של 470 ננומטר בה הספק נמוך ומקם את קצה הסיבים מצביע על מגלשת פלסטיק פלואורסצנטי אוטומטית. הרשומה הבאה מהמוליכים למחצה משלימים של תחמוצת מתכת או מצלמת CMOS במצב חי. הגדל את הרווח או התאם את טבלת בדיקת המידע עד שהתמונה תהיה גלויה בנקודת המוקד של המטרה.
לקדם את מתרגם חמשת הצירים לכיוון המטרה להבטיח כי אור 470 ננומטר מרוכז על הסיבים בקצה SMA או FC של כבל התיקון, עד תמונה ניתן לפתור במצלמה. לבסוף, התאימו את צירי X ו- Y עד שהתמונה תמורכז ותיפתר היטב. דמיינו את האור הנפלט מקצה הטלאי המגוון של כבל התיקון, כפי שהוא אמור להופיע כעיגול איזוטרופי.
התחל על ידי הפעלת כל אורות העירור כדי לדמיין טוב יותר את הסיבים. ולהתאים את רווחי המצלמה כך שלא יהיו פיקסלים רוויים, ותמונה ברורה של הסיבים קיימת. ואז לצלם תמונה ראשונית.
צייר אזורים מעניינים או ROIS סביב הסיבים. ושמור אותם למדידת ערכי העוצמה הממוצעים במהלך ההקלטות. עבור הקלטות סיבים מרובים, לבדוק עצמאיים על ידי הקלטה חיה מכל הסיבים.
כוון סיב אחד לכיוון מקור אור והקש באצבע. שימו לב לתנודות בערוץ. לאחר מכן להחיל סרט צבעוני על סוף הסיבים על תווית אשר ROI מתאים לאיזה סיבים.
לבסוף, הגדר את אזור ההקלטה על ידי תליית כבל התיקון מעל הזירה באמצעות דוכנים, מלחציים ומחזיקים. לבסוף, ודא כי החיה לא תהיה מוגבלת בתנועה על ידי אורך הסיבים והוא יכול לנוע בחופשיות ברחבי הזירה כולה. התחל על ידי בדיקת הקצה הדיסטלי של הסיבים של כבל התיקון על ידי עין, ועם מיקרוסקופ סיבים מיני.
אם פני השטח של הסיבים שרוט, מחדש ללטש את הסיבים באמצעות סרט ליטוש סיבים עם חצץ עדין. לאחר מכן נקו את הקצוות הדיסטליים של כבל התיקון עם 70%אתנול ומוליך קצה כותנה. נקה את הנולאס סיבים אופטיים באמצעות 70%אתנול ומוליך קצה כותנה.
חבר את הקצה המגוון של כבל הטלאי לסיבים המושתלים באמצעות שרוול מפוצל קרמי מכוסה בצינור כיווץ שחור. במהלך החיבור, ודא כי השרוול הוא הדוק. אפשר לחיה להתאושש לכמה דקות.
ואז להתחיל להקליט את האות האופטי, ולהפעיל את הניסוי. בזמן ההקלטה לפקוח עין זהירה על עקבות לחיות כדי להבטיח הקלטות איכות. ולצפות כל קפיצות באות, המציין השרוול הוא לא חזק מספיק.
להקלטות הצבע הכפולות, הוסיפו LED של 516 ננומטר למערכת הפפוטומטריה כדי לרגש את חיישן הסידן הפלואורסצנטי האדום, ואת המראות והמסננים הדיקרואריים המתאימים. לאחר מכן הוסיפו מפצל תמונה בין המטרה למצלמת CMOS כדי להפריד בין אורכי גלי הפליטה הירוקים והרדום. לבסוף, צייר ROIS סביב כל הסיבים בשני הצבעים, אדום וירוק.
הקפד לזהות בבירור כל ROI עם הסיבים והערוצים המתאימים. עורר קריאה בו זמנית עם 470 ננומטר, ו 560 נורות LED ננומטר, ולהחליף אותם עם LED 410 ננומטר. התוצאות מצביעות על כך שהנורסצנטיות הנמדדת גדלה באופן משמעותי במקביל לניהול פחזניות אוויר לעכברים עם הפעלת מסלול LHA-LHB.
עם זאת, בעכברים המבטאת חלבון פלואורסצנטי ירוק או GFP, לא זוהה שינוי באות במהלך הממשל של פחזניות אוויר. טכניקה זו מאפשרת לחוקרים להקליט באופן סביר מסוג מסוים של תאים באזורי מוח שונים. בעוד חיה מתנהגת בחופשיות.
זה מקדם את היכולת לנתח את הפונקציות של אזורי המוח האלה כפי שהם מתייחסים להתנהגות.
