자유롭게 움직이는 동물의 신경 활동을 기록하는 다중 섬유 광도 측정법

섬유 광측정 CSOM 이미징은 유전적으로 인코딩된 사용자 지정 표시기와 광섬유를 결합하여 자유롭게 움직이는 동물의 신경 활동을 모니터링합니다. 어떤 신경의 특정 그룹 감독 또는 행동 또는 자극에 응답에서 재생 하는 방법을 이해 하는 것이 중요 하다. 이 기술은 그들의 연결 또는 유전 단면도에 의해 정의된 특정 두뇌 지구에서 기록하는 접근가능한 쪽입니다, 노이즈에 신호를 분리하기 위하여 통제에 내장된.

프로세서를 시연하는 것은 내 실험실대학원생인 에카테리나 화성노바입니다. 먼저 5축 변환기의 모든 나사를 느슨하게 합니다. 패치 코드에 5축 변환기에 부착된 어댑터에 나사를 고정합니다.

그런 다음 470 나노미터 의 발광광을 저전력으로 켜고 섬유의 끝을 자동 형광 플라스틱 슬라이드를 가리킵니다. 라이브 모드에서 무료 금속 산화물 반도체 또는 CMOS 카메라의 다음 기록. 게인을 늘리거나 목표의 초점에 이미지가 표시될 때까지 조회 테이블을 조정합니다.

470 나노미터 광이 카메라에서 이미지를 해결할 수 있을 때까지 패치 코드의 SMA 또는 FC 끝의 섬유를 중심으로 하는 것을 목표로 5축 번역기를 진행합니다. 마지막으로 이미지가 중심이 되고 잘 해결될 때까지 X 및 Y 축을 조정합니다. 패치 코드의 바리올 끝에서 방출되는 빛을 시각화하여 등위축원으로 표시되어야 합니다.

섬유를 더 잘 시각화하기 위해 모든 여기 라이트를 켜서 시작합니다. 그리고 픽셀이 포화되지 않고 섬유의 선명한 이미지가 존재되도록 카메라 이득을 조정합니다. 그런 다음 예비 이미지를 가져 가라.

관심 영역 또는 섬유 주위에 ROIS를 그립니다. 그리고 기록 하는 동안 평균 강도 값의 측정을 위해 그들을 유지 합니다. 여러 섬유 레코딩의 경우 모든 섬유의 라이브 레코딩으로 독립적으로 테스트합니다.

광원쪽으로 하나의 섬유를 가리키고 손가락으로 누릅니다. 채널의 변동을 관찰합니다. 그런 다음 섬유 의 끝에 컬러 테이프를 적용하여 어떤 섬유에 해당하는 ROI에 해당하는 라벨을 부착합니다.

마지막으로 스탠드, 클램프 및 홀더를 사용하여 경기장 위에 패치 코드를 걸어 서 녹음 영역을 설정합니다. 마지막으로, 동물이 섬유의 길이에 의해 움직임에 제한되지 않고 자유롭게 전체 경기장 전체에 걸쳐 이동할 수 있는지 확인하십시오. 먼저 패치 코드의 섬유의 단부 끝을 눈으로 검사하고 미니 섬유 현미경으로 검사합니다.

섬유표면이 긁힌 경우 섬유 연마 필름을 사용하여 섬유질을 미세한 모래로 재연마합니다. 그런 다음 70 %에탄올과 면 팁 어플리케이터로 패치 코드의 단부 끝을 청소하십시오. 70%에탄올과 면 팁 어플리케이터를 사용하여 광섬유 캐뉼라를 청소하십시오.

검은 수축 튜브로 덮인 세라믹 스플릿 슬리브를 사용하여 패치 코드의 바리올 끝을 이식된 섬유에 연결합니다. 연결 중에 소매가 꽉 되어 있는지 확인합니다. 동물이 몇 분 동안 회복하도록 허용하십시오.

그런 다음 광학 신호 녹음을 시작하고 실험을 실행합니다. 녹화하는 동안 품질 녹음을 보장하기 위해 라이브 추적에주의 깊게 주의하십시오. 그리고 슬리브가 충분히 단단하지 않다는 것을 나타내는 신호의 점프를 조심하십시오.

이중 색 레코딩의 경우, 적색 형광 칼슘 센서와 적절한 이색 거울 및 필터를 자극하기 위해 광측정 시스템에 516 나노미터 LED를 추가합니다. 그런 다음 목표와 CMOS 카메라 사이에 이미지 스플리터를 추가하여 녹색 및 빨간색 방출 파 길이를 분리합니다. 마지막으로, 빨간색과 녹색의 모든 섬유 주위에 ROIS를 그립니다.

해당 섬유 및 채널로 각 ROI를 명확하게 식별해야 합니다. 470 나노미터 및 560 나노미터 LED로 동시 여기를 트리거하고 410 나노미터 LED로 대체합니다. 결과는, 측정된 형광이 LHA-LHB 통로의 활성화를 가진 마우스를 위한 공기 퍼프의 투여와 동시에 현저하게 증가하였다.

그러나, 녹색 형광 단백질 또는 GFP를 발현하는 마우스에서는, 공기 퍼프의 투여 중에 신호의 변화가 검출되지 않았다. 이 기술은 연구원이 다른 두뇌 지구에 있는 세포의 특정 모형에서 합리적으로 기록하는 것을 허용합니다. 동물이 자유롭게 행동하는 동안.

이것은 행동과 관련있는 이 두뇌 지구의 기능을 해부하는 기능을 추가합니다.