يهدف هذا البروتوكول إلى محاكاة الإعداد السريري للمرض المتبقي بعد جراحة إزالة الورم ، وبالتالي يسمح لنا باختبار علاجات السرطان الجديدة في سياق التئام الجروح بعد الجراحة. وميزة هذه التقنية هي أنها تسمح بتوحيد كمية الجرح الذي تسببه وكمية الورم للبقاء. هذه التقنية مهم بشكل خاص للدراسات قبل الكلينيكية في أن تحديد علاجات جديدة للسرطانات، أنه الانتكاسات محليا مثالا على ذلك هو ساركوما الأنسجة الرخوة.
هذا العرض البصري أمر بالغ الأهمية لإثبات تقنية الانقلاب ، والتي تسمح لنا بكشف الورم المرتبط بجانب الجلد. ابدأ هذا الإجراء مع التطعيم تحت الجلد للخلايا السرطانية المعدة في الفئران ، كما هو موضح في بروتوكول النص. في اليوم 12، تلقيح آخر، عندما وصلت الأورام إلى حجم ما يقرب من 50 ملليمتر مربع، جرعة الفئران مع 100 ميكرولترات من البوبرينورفين تحت الجلد في scruff من الرقبة، 30 دقيقة قبل الجراحة.
اضبط المنطقة الجراحية مع لوحة الحرارة المغطاة بمعطف المقعد و اضبط مخروط الأنف للتخدير. ترتيب معدات جراحية نظيفة بحيث تكون في متناول اليد، بما في ذلك الكلورهيكسادين، مسحة، الشاش، هلام العين، اثنين من ملقط المنحني، مقص، قضيب كليب، مزيل مقطع، وعبوات مقطع. تدفئة غرفة التدفئة إلى 37 درجة مئوية واقامة آخر وسادة الحرارة للانتعاش.
لاحظ أن هذا الإجراء يتطلب شخصين. يجب على المساعد مراقبة تنفس الماوس عن كثب أثناء الإجراء. بعد تخدير الماوس كما هو موضح في بروتوكول النص، قم بإجراء اختبار قرصة واختبار انعكاس القرنية للتأكد من تخدير الماوس بالكامل قبل بدء الجراحة.
غطي عيون الفأر بكمية صغيرة من جل العيون لتجنب جفاف العين. ابدأ هذه الجراحة عن طريق سحب المنطقة الجراحية بالكلورهيكسادين. باستخدام ملقط وزوج من مقص جعل شق واحد على التوالي سنتيمتر على طول الجانب الظهري، ثلاثة ملليمترات بعيدا عن الورم.
لا تقطع الجلد مباشرة تغطي الورم لأنها لن تلتئم بشكل جيد. تجنب استخدام مشرط لقطع الورم واستخدام الملاقط مغرفة القطع. باستخدام ملاقط، وسحب بعيدا اللفافة والأنسجة الدهنية تحت الجلد بين الورم والصواتيون.
عادة ما يتم ربط الورم تحت الجلد بجانب الجلد. افتح الجرح عن طريق الإمساك بلطف بالجلد على جانب تحمل الورم باستخدام ملاقط وعكس الورم بحيث يكون مرئيًا في الخارج. باستخدام زوج من مقص، وقطع بعيدا كبسولة الورم من النصف لإزالة، بدءا من قاعدة الورم الأقرب إلى الفتحة.
لجراحة 50٪ ديبولك، قطع عبر منتصف الورم. باستخدام ملقط منحنية مغرفة حتى قسم من الورم الذي يتعين إزالته. استخرج أي بقايا من منطقة ديبولك
ل75٪ debulk, تبدأ من خلال تنفيذ 50٪ ديبول الورم ثم قطع في نصف 50٪ المتبقية من الورم. استخرج 25٪ من الورم باستخدام ملقط منحني. لإغلاق موقع الجراحة، ضع الورم المتبقي مرة أخرى تحت الجلد واستخدام ملقط، وسحب اللوحات الجلدية معًا ومحاذاة الجلد على طول الجرح.
عقد الجلد معا خمسة ملليمترات من حافة الجرح واستخدام لقطات جراحية لإغلاق الجرح بدءا من الجانب، الأقرب إلى ملقط. تطبيق العديد من مقاطع حسب الحاجة لضمان عدم تعرض الأنسجة الكامنة. عموما، يتم تطبيق ثلاثة إلى أربعة مقاطع مع اثنين من الثغرات ملليمتر بين القصاصات.
السماح للفئران لاسترداد عن طريق وضعها في غرفة التدفئة الدافئة. ضع قفص الفأر على وسادة الحرارة. مراقبة الفئران في غرفة التدفئة حتى أنها قد تعافى من التخدير.
ثم، وضع الفئران مرة أخرى في القفص، وترك القفص على وسادة الحرارة لمدة 10 دقائق أخرى حتى الفئران أصبحت أكثر نشاطا. إعطاء الفئران المواد الغذائية الرطبة والناعمة. مراقبة الفئران ساعة واحدة بعد الجراحة للشفاء.
مراقبة الفئران مرة أخرى في نهاية اليوم وصباح اليوم التالي وضمان لقطات تبقى في مكانها. علاج الفئران في فترة ما حولية مع ظهور أو العلاج neoadjuvant في أي وقت من الأوقات، اعتمادا على علاج الفائدة. على سبيل المثال، علاج الفئران بجرعة واحدة من 100 ميكروغرام من المضادة للCTLA-4 intraperitoneally في اليوم 15 بعد التطعيم.
بدلا من ذلك ، علاج الفئران مع ثلاث جرعات من 200 ميكروغرام من المضادة لPP - 1 intraperitonally في أيام ، 15 ، 17 ، و 19 بعد التطعيم. ال استئصال جراحية غير مكتملة من 50 ورم ملليمتر مربع, المشار إليها هنا من قبل نتائج خط منقط في 100٪ إعادة إنتاج الأورام في غياب العلاج المناعي المساعد. لذلك ، فإن نمو الورم إلى حجم 50 ملليمتر مربع هو حجم مثالي للسحب الجزئي.
ثم استخدم النموذج لاختبار العلاجات المناعية المساعدة باستخدام الأجسام المضادة ضد وحدات نقاط التفتيش ، واللمفيات تي السامة للخلايا المرتبطة البروتين أربعة ومستقبلات الموت المبرمجة واحد. العلاج من الفئران مع المضادة لCTLA-4، أدى إلى معدل علاج 80٪، في حين أن علاج الفئران مع المضادة PD-1 أدى إلى معدل علاج 25٪ وتوفر الاستجابة مع مكافحة PD-1 فرصة لاختباره تركيبات جديدة، لمزيد من تحسين معدل الاستجابة. من المهم أن يبقى الورم المتبقي ملتصقاً بالبشرة، وإلا فإن إمدادات الدم سوف تقطع ويصبح الورم هو النخر.
بعد هذا الإجراء، يمكن تحليل الأورام من خلال مجموعة متنوعة من الطرق، مثل عملية استئصال الخلايا التدفق من أجل تقييم كيفية تأثير الجراحة على الخلايا المتسللة الورم. وقد سمح لنا هذا النموذج الماوس لاستكشاف كيفية التئام الجروح يؤثر على العلاجات المناعية السرطان.
