Этот протокол направлен на имитацию клинических условий остаточного заболевания после операции по дебулированию опухоли, и поэтому позволяет нам тестировать новые методы лечения рака в контексте послеоперационного заживления ран. Преимущество этого метода заключается в том, что он позволяет стандартизировать количество нанесенных ран и количество опухоли, чтобы остаться. Этот метод особенно важен для доклинических исследований в том, что выявление новых методов лечения рака, что он рецидивов локально примером которого является саркома мягких тканей.
Эта визуальная демонстрация имеет решающее значение для демонстрации техники инверсии, которая позволяет нам подвергать опухоль, прикрепленную к коже. Начните эту процедуру с подкожной прививки подготовленных раковых клеток у мышей, как описано в текстовом протоколе. На 12-й день, после прививки, когда опухоли достигли размера около 50 квадратных миллиметров, доза мышей со 100 микролитров бупренорфина подкожно в потертости шеи, за 30 минут до операции.
Настройка хирургической области с тепловой площадкой, покрытой скамейке пальто и создать нос конус для анестезии. Упорядочить чистое хирургическое оборудование так, что они находятся в пределах легкой досягаемости, в том числе хлоргексадин, тампон, марля, гель для глаз, два изогнутых тибры, ножницы, клип аппликатор, клип удаления, и клип заправки. Разогрейте нагревную камеру до 37 градусов по Цельсию и установите еще одну тепловую площадку для восстановления.
Обратите внимание, что эта процедура требует двух человек. Помощник должен внимательно следить за дыханием мыши во время процедуры. После анестезии мыши, как описано в текстовом протоколе, выполнить щепотку тест и роговицы рефлекс тест, чтобы убедиться, что мышь полностью анестезирована до начала операции.
Обложка глаза мыши с небольшим количеством офтальмологического геля, чтобы избежать сухости глаз. Начните эту операцию с мазка хирургической области с хлоргексадином. Использование миппов и ножниц делает один сантиметр прямой разрез вдоль спинной стороны, в трех миллиметрах от опухоли.
Не режьте кожу непосредственно покрытие опухоли, как это не заживет хорошо. Избегайте использования скальпеля, чтобы сократить опухоль и использовать пинцет, чтобы зачерпнуть куски. Используя пинцет, вытяните фасции и подкожной жировой ткани между опухолью и брюшной полы.
Подкожная опухоль обычно крепится к коже. Откройте рану, осторожно удерживая кожу на стороне подшипника опухоли с помощью пинцета и инвертировать опухоль так, чтобы она была видна снаружи. Используя ножницы, отрезать капсулу опухоли от половины, чтобы удалить, начиная с основания опухоли ближе всего к открытию.
Для 50%debulk хирургии, сократить через середину опухоли. Использование изогнутых типсов зачерпнуть раздел опухоли, которые будут удалены. Сочерпать любые остатки из области debulk.
Для 75%debulk, начните с выполнения 50%опухолевой дебулки затем сократить в два раза остальные 50% опухоли. Scoop до 25% опухоли с помощью изогнутых типсов. Чтобы закрыть хирургическое место, поместите оставшуюся опухоль обратно под кожу и с помощью миппов, потяните лоскуты кожи вместе и выстроить кожу вдоль раны.
Держите кожу вместе пять миллиметров от края раны и использовать хирургические зажимы, чтобы закрыть рану, начиная сбоку, ближе всего к типсам. Применить столько клипов, сколько необходимо для обеспечения не лежащие в основе ткани подвергается. Как правило, три-четыре клипа применяются с двумя миллиметрами зазоров между клипами.
Разрешить мышей, чтобы восстановить, поставив их в теплой камере отопления. Поместите клетку мыши на тепловую площадку. Мониторинг мышей в отопительной камере, пока они не оправились от анестезии.
Затем поместите мышей обратно в клетку, оставьте клетку на тепловой площадке еще на 10 минут, пока мыши не станут более активными. Дайте мышам влажную и мягкую пищу. Мониторинг мышей через час после операции для восстановления.
Мониторинг мышей снова в конце дня и на следующее утро и обеспечить клипы остаются на месте. Лечить мышей периоперационной с появлением или неоадъювантной терапии в любой момент времени, в зависимости от лечения интереса. Например, лечить мышей с одной дозой 100 микрограммов анти-CTLA-4 intraperitoneally на 15 день после прививки.
Кроме того, лечить мышей с тремя дозами 200 микрограммов анти-PD-1 intraperitoneally в дни, 15, 17 и 19 после прививки. Неполная хирургическая ресекция 50 квадратных миллиметров опухолей, показанная здесь пунктирной линией, приводит к 100%-ным воспроизводимым отрастаемости опухолей при отсутствии адъювантной иммунотерапии. Таким образом, рост опухоли до размера 50 квадратных миллиметров является идеальным размером для частичной дебулки.
Затем модель была использована для тестирования адъювантных иммунотерапии с использованием антител против контрольных модулей, цитотоксических Т-лимфоцитов, связанных белка четыре и запрограммированных рецепторов смерти один. Лечение мышей с анти-CTLA-4, привело к излечению скорость 80%В то время как лечение мышей с анти-PD-1 привело к излечению скорость 25%Ответ с анти-PD-1 дает возможность проверить его новые комбинации, для дальнейшего улучшения скорости ответа. Важно, чтобы оставшаяся опухоль оставалась прикрепленной к коже, иначе кровоснабжение будет прервано и опухоль станет некротической.
После этой процедуры, опухоли могут быть проанализированы с помощью различных методов, таких как цитометрия потока для того, чтобы оценить, как операция влияет на проникновение опухоли клеток. Эта модель мыши позволила нам изучить, как заживление ран влияет на иммунотерапии рака.
