نماذج زرع أدوات قيمة للبحوث المناعية التي تتطلب في كثير من الأحيان الخبرة الجراحية. هنا، نقدم نهجاً مجدياً لزرع خلايا عضلة القلب والقلب غير المغاير في الفئران. من خلال تسليط الضوء على جميع الخطوات الحاسمة لنموذجنا وتبسيطها، يجب أن يكون الباحثون الذين ليس لهم خلفية جراحية قادرين على إتقان هذا النموذج في فترة زمنية معقولة.
كلا النموذجين زرع تقديم رؤى قيمة في آليات التسامح والرفض ويمكن تطبيقها في مختلف الأنواع. لدينا الكثير من الخبرة في تدريس هذا النموذج للأفراد دون تدريب جراحي مسبق. بعد تعلم الخطوات الحاسمة، ونحن المشورة الصبر والممارسة الكافية مع الحيوانات المتوفى.
لتكريس القلب المانحة، بعد التأكد من عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في تخدير سبعة إلى 22 أسبوع الجرذان المانحة الحيوان، وتطبيق مواد التشحيم العين واستخدام مقصات الميكانيكية لإزالة الفراء البطن والصدر. وضع الفئران في موقف supine على قاعدة التدفئة وإصلاح الأطراف في قاعدة الجدول العملية مع عصابات مرنة. تطهير الجلد المكشوف مع 70٪ الإيثانول وإجراء عملية استئصال البطن المتوسطة.
إدراج الداورس في شق واستخدام مسحات القطن تعقيم لتعبئة الأمعاء إلى الجانب الأيسر من المانحة لفضح الوريد السفلي كافا. بعد ذلك ، ثقب الوريد السفلي الكافا للسماح للحقن الوريدي من 500 وحدة دولية من الهيبارين المذابة في ملليلتر واحد من محلول ملحي متساوي التوتر الجليدي البارد. وقف النزيف في موقع ثقب بعد تراجع إبرة عن طريق ضغط الضوء باستخدام مسحة القطن.
اِنز الحجاب الحاجز، وأؤدي عملية thor جانبية جانبية من المانحين، ثم قم بزك جدار الصدر. إزالة الميكروبيوم والعصب المبهم عن طريق إعداد حادة باستخدام اثنين من أصحاب الإبرة الدقيقة. بالنسبة للاستئصال، قم بتحويل الأوعية البطنية وأدخل الفرع الحاد لمقص مدبب في الجيب التاجي.
استخدم ضغطًا لتشريح الشريان الأورطي الصاعد والشريان الرئوي بقدر الإمكان تحت جر القلب السدي الفاتح. وضع واحد 5-0 رباط حول الأجوف الوريدي العلوي والأدنى والأوردة الرئوية وتشديد الأربطة خطوة الحكمة كما dorsally ممكن. قطع الأنسجة الظهرية إلى الرباط واستخراج القلب.
لزرع القلب explanted، استخدم قنية قياس 18 من القسطرة الوريدية لطرد 30 ملليلتر من الجليد الباردة، محلول ملحي متساوي التوتر تكملها 1000 وحدة دولية من الهيبارين من خلال الشريان الأورطي الصاعد والشريان الرئوي قبل وضع القلب في أنبوب 15 ملليلتر من محلول ملحي على الجليد. بعد إعداد 10 إلى 14 أسبوع من العمر فئران المتلقي كما أظهرت للتو، تعبئة الأمعاء إلى الجانب الأيسر العلوي من المتلقي على ضغط دافئ، وطيب. وضبط المجهر الجراحي أو بديل كاف.
بعد تعبئة الاثني عشر وjejunum القريبة، على التوالي، وذلك باستخدام التكبير الكامل من خمسة إلى سبعة، واستخدام مسحات القطن وتشريح حادة لفضح الشريان الأورطي البطني وفينا الكافا السفلية. باستخدام اثنين من أصحاب الإبر الصغيرة لرفع الأوعية البطن دون إصابة الأوردة القطنية، ووضع المشبك الوعائي كولي على الأوعية. استخدام 30 إلى 45 درجة مقوسة 27 قنية قياس لثقب الأوعية البطنية.
واستخدام مقص بوتس لتكبير موقع الثقب إلى شق طولي يطابق حجم تجويف الأوعية المانحة. لإزالة الجلطات ومنع تجلط بعد الجراحة ، قم بضخ الأوعية المالحة ووضع الكسب غير المشروع في الموقع. باستخدام اثنين من مقاطعة بسيطة 8-0 الغرز أحادية الخيوط غير القابلة للرُب، وإصلاح الشريان الأورطي الصاعد للمتبرع إلى الشريان الأورطي البطني للمتلقي في زوايا القحفية والقوية من الشق الطولي.
إلى أنستوموز الشريان الأورطي التصاعدي للمتبرع مع الشريان الأورطي البطني للمستلم وضع الكسب غير المشروع إلى يمين الأوعية المتلقية أثناء تنفيذ النصف الأول من انستوموزيه مع تشغيل 8-0 خياطة أحادية النقّاد. ثم ضع الكسب غير المشروع على يسار الأوعية المتلقية وقم بتنفيذ النصف الثاني من مرض الاستئصال. إصلاح الشريان الرئوي المانحة إلى الكافا الوريدي السفلي بطريقة مماثلة مع عقدتين زاوية في زوايا الجمجمة وcaudal.
بعد تثبيت السفينة المانحة مع عقدة في كل زاوية، ووضع غرزة من الخارج إلى داخل السفينة لتشغيل anastomosis داخل الجامة للنصف الأول من مرض الاستئصال. قبل أن خياطة أسفل، وضع غرزة أخرى من الداخل إلى الخارج. لمنع الانسداد المحيطي بعد الانتهاء من النصف الثاني من انستومسيس، طرد الانستموم مع المالحة قبل تشديد عقدة النصف الثاني من osistomosis.
ضع شاشًا سحيفي حول كل من أنستوبوسس وأطلق بعناية المشبك الوعائي كولي للسماح بإعادة ضخ الكسب غير المشروع. إدارة أي نزيف مع ضغط الضوء وتعقيم مسحات القطن. بعد حوالي 60 ثانية، يجب أن يبدأ القلب في النبض.
استبدال بعناية الأمعاء وإغلاق اللفافة البطنية والجلد مع فصل مستمر 3-0 خياطة تشغيل بولي. في الوقت التجريبي المناسب، حصاد قلب الفئران المانحة كما هو موضح واستخدام مشرط معقمة أو مقص معقمة لتمزيق القلب إلى ثلاثة أجزاء من ثلاثة ملليمترات. هضم القطع في 20 ملليلتر من متوسطة الثقافة تكمل مع 0.5 ملليغرام لكل ملليلتر من الكولاجيناز لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية.
في نهاية عملية الهضم، إضافة الأنسجة إلى منخل كبير المسام، في حين إزالة المتوسطة الثقافة. إضافة خمسة إلى 10 ملليلتر من محلول ملحي متساوي التوتر والضغط الطين الأنسجة من خلال منخل. وبعد الطرد المركزي تعليق الخلية مرتين، ارشحه من خلال مصفاة خلية ميكرومتر 40.
شطف مصفاة مع خمسة إلى 10 ملليلتر من محلول ملحي متساوي التوتر لجمع أي خلايا المتبقية. وبعد الطرد المركزي، إعادة تعليق خلايا القلب الفئران المعزولة في محلول ملحي بتركيز من خمسة أضعاف 10 إلى الخلايا الخامسة لكل ملليلتر. تحميل حقنة ملليلتر واحد مع حل الخلية ووضع الحيوان المتلقي تخدير في موقف الجانبي مع الأذن المستهدفة التي تواجه.
إصلاح الأذن مع الاصبع وشريط على الوجهين، واستخدام 27 القنب قياس لحقن تحت الجلد 20 ميكرولترات من حل خلايا عضلة القلب على مقربة من الأوعية الشعرية البصرية في أذن المتلقي. بعد فترة الملاحظة التجريبية المناسبة، استخراج العقد اللمفاوية عنق الرحم استنزاف وإجراء التحليلات المناسبة المصب من الفائدة. نجت عمليات زرع الزرع السينوجينية لمدة تصل إلى 100 يوم دون علامات فشل الكسب غير المشروع.
يمكن أن يؤدي مزيج المانحين المتلقين المحددين إلى سرعات مختلفة من رفض زراعة القلب غير المتغايرة. تكشف أقسام التبريد من القلوب المرفوضة عن زيادة تسلل الخلايا المناعية، في حين أن الطعوم السينيجينية خالية إلى حد كبير من الخلايا المناعية. استئصال الرحم اللمفاوي وإعادة تحفيز فحوصات من استنزاف الخلايا الليمفاوية العقدة بعد حقن الخلايا عضلة القلب عن طريق الفم يكشف عن استجابات مناعية واضحة سلالة محددة تجاه الأنسجة القلبية غير المتغايرة في متلقي زرع الحساسية، مما يبرر المزيد من التحليلات المناعية مثل التنميط السيتوكين.
التعامل مع الأوعية بعناية عند إدخال واستخراج الإبرة. لا تضع الكثير من الاهتمام على الغرز لمنع تضيق. لا تضع الكثير من الغرز لكل التهاب في الدم.
