سمح هذا البروتوكول للإجابة على سؤال مهم في مجال الانبثاث السرطان. بما في ذلك، كيف تستعمر الخلايا السرطانية الرئة؟ كيف تبقى الخلايا السرطانية نائمة؟
وما الذي يدفعهم للخروج من السكون وتشكيل الانبثاث في نهاية المطاف. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو أن العملية النقيلية الديناميكية يمكن دراستها مباشرة في الجسم الحي ، في الوقت الحقيقي ، في بيئة صغيرة حقيقية. يمكن أن توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة على العديد من الأمراض الرئوية ، ولكنها مفيدة بشكل خاص لفهم سلوك الخلايا السرطانية الفردية المنتشرة في الرئة ، وهو موقع شائع للانبثاث.
لتبدأ باستخدام خياطة الحرير 2-0 لربط عقدة في قاعدة القسطرة قياس 22، وترك ذيول طويلة 2 بوصة. بمجرد تخدير الماوس تماما ، حرك الماوس إلى طاولة العمليات ، وازن الفأرة ، ثم قم بتأمين قسطرة التنبيب عن طريق ربط خياطة الحرير 2-0 حول خطم الماوس. قم بتوصيل جهاز التنفس الصناعي بقسطرة التنبيب.
باستخدام الشريط الورقي، قم بتأمين الأطراف الأمامية القحفية والأطراف الخلفية بشكل مسموع إلى المرحلة الجراحية الساخنة. ضع شريطا ورقيا بطول ظهر الفأر لزيادة التعرض إلى أقصى حد للمجال الجراحي. ارفع الجلد باستخدام ملقط واصنع شقا دائريا يبلغ حوالي 10 مم عند حوالي 7 مم إلى اليسار إلى القص وحوالي 7 مم متفوقا على الهامش الفرعي.
استئصال الأنسجة الرخوة overlying الأضلاع. رفع الضلع السادس والسابع باستخدام ملقط. استخدام شفرة واحدة من مقص تشريح الصغرى حادة مع الجانب مدورة نحو الرئة لاختراق بعناية العضلات الوربي بين الأضلاع السادسة والسابعة لدخول الفضاء داخل الصدر.
تفريغ دقيق عبوة الهواء المضغوط في عيب لانهيار الرئة وفصل الرئة من جدار الصدر. أطلق الهواء المضغوط في رشقات نارية قصيرة لمنع إصابة الرئة المسببة للياتوجينيك. ضع لكمة الخزعة على أداة القطع وناور بعناية قاعدة أداة القطع من خلال شق الوربي.
توجيه قاعدة أداة القطع بالتوازي مع جدار الصدر ولكمة ثقب دائري 5 ملم من خلال القفص الصدري. باستخدام خياطة حرير 5-O، ضع غرزة سلسلة محفظة، ما يقرب من 1 ملم من الحفرة، محيطا. بعد ذلك، ضع إطار النافذة في جدار الصدر مع حواف العيب الدائري الملتقط داخل أخدود النوافذ.
ربط بإحكام خياطة الحرير 5-O لتأمين تأمين النافذة المزروعة. ضعي تيارا ثابتا ولطيفا من الهواء المضغوط لمدة 10 إلى 20 ثانية تقريبا لتجفيف الرئة. استخدم ملقط لقبضة إطار النافذة من الحافة الخارجية ورفع بلطف لضمان فصل الرئة من تحت السطح من إطار النافذة.
الاستغناء عن طبقة رقيقة من مادة لاصقة سيانواكريلات على طول تحت السطح من إطار النافذة البصرية. اضغط برفق ولكن بحزم إطار النافذة البصرية على أنسجة الرئة لمدة 10 إلى 20 ثانية للتعلق. الاستغناء عن قطرة 5 ملم من لاصقة على زلة غطاء مستطيلة.
استخدام أداة التقاط فراغ لالتقاط زلة غطاء 5 ملم. تراجع تحت السطح من الغطاء تنزلق إلى لاصقة، ومن ثم كشط قبالة لاصقة الزائدة ثلاث مرات ضد الجانب من زلة غطاء مستطيلة لجعل طبقة رقيقة جدا من لاصقة على زلة الغطاء. ضع الغطاء بعناية في زاوية داخل الاستراحة في مركز إطار النافذة البصرية ، فوق أنسجة الرئة مباشرة.
لفترة وجيزة المشبك جهاز التنفس الصناعي لتوليد الضغط الإيجابي، فرط تضخيم الرئة. قم بتوجيه الغطاء إلى الانزلاق الموازي لأنسجة الرئة، باستخدام الحركة الدوارة لإنشاء ترسب مباشر بين سطح الرئة وسطح السطح السفلي لزلة الغطاء. الحفاظ على ضغط لطيف لمدة 25 ثانية تقريبا لضبط لاصقة سيانواكريلات.
فصل زلة الغطاء من أداة بيك اب فراغ مع ملقط. إنشاء خياطة سلسلة محفظة، محيط، أقل من 1 ملم من الحافة المقطوعة لشق الجلد باستخدام خياطة الحرير 5-O. دس أي جلد زائد تحت الحافة الخارجية للإطار النافذة قبل ربط النافذة بإحكام مع عقدة قفل.
الاستغناء عن كمية صغيرة من لاصقة في واجهة الزجاج المعدني لضمان ختم محكم بين زلة الغطاء وإطار النافذة. إرفاق الإبرة المعقمة إلى حقنة الأنسولين 1 مل. أدخل الإبرة أسفل عملية xiphoid ، وتقدم نحو الكتف الأيسر ، وأدخل تجويف الصدر من خلال الحجاب الحاجز.
سحب بلطف مرة أخرى الحقنة لإزالة أي الهواء المتبقي من تجويف الصدر. أظهر التصوير داخل الفوتونت لمنطقة رئوية واحدة أنه يمكن نقل الأوعية الدموية الدقيقة على مدى ثلاثة أيام متتالية. تم تحديد نقطة الفرع القابلة للتعريف من سفينة واحدة كل يوم على التوالي.
خلقت الكريات الحمراء غير المصنفة ظلالا عند تدفقها في أوعية أكبر. يمكن استخدام زاوية نقاط الفرع بالنسبة للوعاء لحساب معدلات تدفق كريات الدم الحمراء. كما تم قياس سرعة كريات الدم الحمراء عن طريق حقن الماوس بغلافات ميكروسفيرية فلورية وتم قياس أطوال مساراتها مقسومة على وقت اكتساب الإطار.
كانت الميكروسفيرات الثابتة والمتدفقة مميزة. تم تتبع مصير الخلايا السرطانية المنشورة بالتصوير المتسلسل على مدى عدة أيام ، باستخدام النافذة للتصوير عالي الدقة للرئة. وصلت الخلية السرطانية واستقرت في الأوعية الدموية في الرئة في اليوم الأول.
ومع ذلك، لم يتم الكشف عن الخلية في الأوعية الدموية في الرئة في اليومين الثاني والثالث، مما يشير إلى إعادة تدوير أو البذخ. تم تصور الخطوات التي بلغت ذروتها للتقدم النقيلي في الرئة بدءا من وصول الخلايا السرطانية ، وإسراف الخلايا السرطانية في الورم الرئوي والانتشار لتشكيل الانبثاث الكلي. الحرص على تجنب الصدمات في الرئة أثناء وضع إطار النافذة البصرية.
الرئة عرضة للنزيف، والتي سوف تعوق في وقت لاحق تغطية الالتزام زلة أثناء التنسيب. وتشمل الطرق الأخرى التي يمكن إجراؤها بعد هذا الإجراء المجهر داخلفيتال، والتي عندما تستخدم مع نهج معدلة للميكروتوغرافيا، يسمح إعادة تخصيص دقيقة للمناطق ذات الأهمية للتصوير المتكرر. سمح هذا البروتوكول تصور الرئة في التحقيق في سؤال رئيسي حول آلية الانبثاث.
تحمل هذه الدراسة إمكانية إعادة بناء علاج جديد لمرضى السرطان.
