يعد إمداد الدم الطبيعي إلى القوقعة أمرا بالغ الأهمية لمرض القوقعة الصناعية Meniere خاصة للحفاظ على إمكانات القوقعة الصناعية الداخلية التي تعد القوة الدافعة الأساسية لمعاملة خلايا الشعر. وقد ارتبطت هذه الوظيفة من الدورة الدموية ارتباطا وثيقا مع أشكال مختلفة من فقدان السمع. إن الفهم الأفضل لتدفق الدم في القوقعة الصناعية سيمكن من إدارة أكثر فعالية لاضطرابات السمع الناتجة عن خلل تدفق الدم.
ومع ذلك ، فإن قياس تدفق الدم المباشر يمثل تحديا كبيرا للغاية بسبب صعوبة تقييم الأذن الداخلية. لا تزال تقنيات تقييم تدفق الدم القوقعة الصناعية قيد التطوير حاليا. نوضح هنا إحدى الطرق الحديثة التي تم إنشاؤها في مختبرنا تفتح نافذة العضلات في الإقامة مع المجهر الفلوري عالي الدقة لتضييق تدفق دم القوقعة الصناعية في أنواع الحيوانات الصغيرة مثل الفئران.
تطبيق هذه التقنية مع نماذج الكتلة عبر الجينية لديه القدرة على تطوير البحوث لكشف الروابط بين وظيفة السمع وعلم الأمراض المتعلقة بتدفق الدم القوقعة الصناعية في المخاطر داخل الأوعية الدموية. يجب أن تتم إجراءاتنا بحذر. بالإضافة إلى نزيف الجسم اللحظي ، يجب مراقبة العلامات الحيوية للحيوانات ، بما في ذلك ضغط الدم وضربات القلب ، أثناء الجراحة.
ابدأ بجمع ما يقرب من ملليمتر واحد من الدم في الهيبارين عن طريق ثقب القلب. الطرد المركزي للدم في 3000 مرة G لمدة ثلاث دقائق عند أربع درجات مئوية. قم بإزالة البلازما ، ثم اغسل حبيبة خلايا الدم بملليلتر واحد من PBS ثلاث مرات عن طريق الطرد المركزي عند 3000 مرة G لمدة ثلاث دقائق عند أربع درجات مئوية.
قم بتسمية خلايا الدم بملليلتر واحد من 20 ميكرومولار DiO أو Dil في PBS ، واحتضنها في الظلام لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. اغسل خلايا الدم المصنفة بملليلتر واحد من PBS وأجهزة الطرد المركزي ثلاث مرات في 3000 مرة G لمدة ثلاث دقائق. أعد تعليق بيليه الخلية في 30٪ هيماتوكريت مع ما يقرب من 0.9 ملليلتر من PBS قبل الحقن.
قم بإعداد أدوات جراحية معقمة ومنصة تصوير ووضع وسادة تدفئة أسفل الستائر. راقب رد الفعل الضعيف وقوة العضلات العامة للفئران المخدرة للتحقق من عمق التخدير. ضع الحيوان على وسادة التدفئة الدافئة وذيله في نظام المراقبة لمراقبة ضغط الدم وضربات القلب.
الحفاظ على درجة حرارة المستقيم عند 37 درجة مئوية وتسجيل ضغط الدم الانقباضي للحيوان وضغط الدم الانبساطي ومتوسط ضغط الدم في حالة التخدير. افتح الثورا الطبلية اليسرى عبر نهج جانبي وبطني تحت مجهر ستيريو تاركا الغشاء الطبلي والعظيمات سليمة. قم بعمل شق على طول خط الوسط من عنق الحيوان مع شل حركة رأسه لتقليل الحركة.
إزالة الغدة تحت الفك السفلي اليسرى والبطن الخلفي للعضلة digastric والكي. حدد موقع الفقاعة العظمية وكشفها عن طريق تحديد العضلة القصية والعصب الوجهي الممتد أماميا نحو الفولا. افتح البولا العظمية بإبرة قياس 30 وقم بإزالة العظم المحيط بعناية باستخدام ملاقط جراحية لتوفير رؤية واضحة للشريان القوقعي والشريان المستقر مع وجود هامشه الإنسي على حافة مكان النافذة المستديرة ويسبب تفوقا أماميا نحو النافذة البيضاوية.
استخدم شفرة سكين صغيرة لكشط عظم الجدار الجانبي عند المنعطف الأوسط العلوي لقوقعة الفأر على بعد حوالي 1.25 ملم من القمة حتى يتم تكسير بقعة رقيقة. قم بإزالة رقائق العظام باستخدام خطافات سلكية صغيرة. قم بتغطية نافذة الوعاء بغطاء مقطوع للحفاظ على الظروف الفسيولوجية الطبيعية وتوفير رؤية بصرية لتسجيل صور السفينة.
قم بعمل شق سنتيمتر واحد على طول الوريد الصافن الأيمن لفضح الوعاء. على التوالي غرس 100 ميكرولتر كل من محلول FITC-Dextran وتعليق خلايا الدم في الحيوان من خلال الوريد الصافن لتمكين تصور الأوعية الدموية وتتبع تدفق الدم. راقب تدفق الدم في الوقت الفعلي على شاشة فيديو بعد خمس دقائق من الحقن.
صور الأوعية الدموية باستخدام مجهر فلوري مجهز بهدف مسافة عمل طويلة وغلاف مصباح يحتوي على مرشح إثارة متعدد النطاقات ومرشح انبعاثات متوافق. سجل الفيديو باستخدام كاميرا جهاز رقمية عالية الدقة بالأبيض والأسود تحصل على أكثر من 350 صورة لكل فيديو. لضمان التحليل الناجح لسرعة التدفق.
قياس قطر السفينة باستخدام البرامج المناسبة وتحديد المسافة بين نقطتين ثابتتين عبر السفينة في الصور التي تم الحصول عليها. افتح فيديو تدفق الدم في البرنامج واضبط مقياس الصور. تتبع خلايا الدم الملطخة DiO المحددة باستخدام وظيفة التتبع.
ثم استخدم المسافة التي تحركت بها الخلايا والفاصل الزمني بين إطارات الصور في الفيديو للحساب التلقائي لسرعة التدفق. احسب التدفق الحجمي باستخدام المعادلة الواردة في مخطوطة النص. لإنشاء نموذج التعرض للضوضاء قبل تسجيل تدفق الدم ، ضع الحيوانات في أقفاص شبكية سلكية وعرضها لضوضاء النطاق العريض عند مستوى ضغط صوت 120 ديسيبل في كشك التعرض للصوت لمدة ثلاث ساعات.
ثم لمدة ثلاث ساعات إضافية في اليوم التالي. سجل تدفق الدم بعد أسبوعين من التعرض للضوضاء. بعد التعرض الجراحي للشعيرات الدموية القوقعية في الجدار الجانبي، تم إجراء مراقبة مجهرية فلورية عالية الدقة داخل الحيوية لخلايا الدم المسماة DiL في الأوعية التي تحمل علامة FITC Dextran من خلال نافذة وعاء مفتوحة.
تظهر هنا خلايا الدم المصنفة DiL في أوعية ستريا الموسومة ب FITC Dextran. تظهر خلايا الدم المسماة Dio الموسومة ب FITC Dextran أن كثافة الأوعية الدموية للرباط الحلزوني أقل من كثافة الأوعية الدموية الأكثر كثافة. يظهر IVM عالي الدقة أنماط تدفق الدم في المجموعات الضابطة والضوضاء المعرضة للضوضاء.
يمكن رؤية النمط المضطرب للدورة الدموية في المجموعات المعرضة للضوضاء. وشملت الحالات الشاذة انخفاض قطر الوعاء وزيادة التباين في قطر السفينة. تم حساب سرعات تدفق الدم في مجموعات التحكم والضوضاء المعرضة عن طريق تتبع جذور خلايا الدم المسماة DiO.
كانت سرعة الدم وحجمه في المجموعة المكشوفة للضوضاء أقل بكثير مما كانت عليه في المجموعة الضابطة. يتطلب الإنشاء الناجح لنافذة السفينة المفتوحة درجة عالية من المهارة الجراحية. يجب توخي الحذر في إزالة عظم الجدار الجانبي للقوقعة الصناعية.
