هذا البروتوكول هو من بين أول من يصف استخدام جهاز الحقن الذاتي في زرع ورم ذبابة الفاكهة. موضوع نما في شعبية في السنوات الأخيرة. الميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي أنها تزيد من كفاءة أبحاث السرطان في ذبابة الفاكهة من خلال تحسين سرعة واتساق وعائد زراعة الورم.
زرع الورم في ذبابة الفاكهة هو تقنية حساسة يمكن أن يكون من الصعب إتقانها. كن صبورا وثق في أن الممارسة تجعل الكمال. بعد عبور الذباب واحتضان البيض لمدة ستة أيام عند 18 درجة مئوية ، انقل القوارير التي تحتوي على اليرقات الفاقسة إلى حاضنة محددة عند 29 درجة مئوية.
فرز النوع البري المخدر أو الذباب البالغ المتحور بناء على جنسه. قم بتثبيت قطعة طولها خمسة سنتيمترات من شريط الذبابة على شريحة مجهرية مع الجانب اللزج لأعلى. شل حركة الذباب عن طريق لصق أجنحتها على الشريط مع ملقط.
ضع صندوق التحكم والحاقن التلقائي على الجانبين المتقابلين من المجهر الضوئي. قم بمعالجة أحد طرفي الشعيرات الدموية الزجاجية باستخدام مجتذب ماصة صغيرة من أربع خطوات ، وتسخينها إلى نهاية مغلقة ضيقة. استخدم الملقط لقص الشعيرات الدموية بزاوية 60 درجة تقريبا لإعداد شعيرات شعرية زجاجية مقاس 3.5 بوصة.
قم بفك غطاء الحاقن برفق. اضغط باستمرار على الزر الفارغ لدفع إبرة الحاقن حتى يظهر 70 إلى 80٪ من طولها الإجمالي. استخدم حقنة لملء الشعيرات الدموية الزجاجية بالزيوت المعدنية.
اختر إحدى اليرقات وانقلها إلى لوحة تشريح مملوءة ب 100 ميكرولتر من شنايدر المتوسطة للتحضير لتشريح الورم الحلقي الوهمي SG. باستخدام زوج واحد من الملقط لتثبيت القسم الأوسط من جسم اليرقات ، قرصة رأس اليرقات باستخدام زوج آخر من الملقط وتطبيق قوة تمتد بالطول. حدد موقع SG على شكل Y لليرقات وعزله ، ثم قم بتشريح ورم الحلقة الوهمية SG عن طريق إزالة الأنسجة المجاورة.
املأ الشعيرات الدموية الزجاجية ب Schneider's Medium وصولا إلى الجزء العلوي الذي يبلغ طوله 0.5 سم عن طريق الضغط مع الاستمرار على زر التعبئة. حدد موقع الورم الأساسي واضغط على زر التعبئة حتى يتم شفط الورم في الشعيرات الدموية. تأكد من أن الورم يجلس عند طرف الشعيرات الدموية أو على بعد عدة ملليمترات من طرف الشعيرات الدموية.
حدد موقع ذبابة بالغة مشلولة إلى الشريط. ثم استخدم الملقط للاحتفاظ برفق أسفل البطن واخترق البشرة الجانبية السفلية للبطن مع الشعيرات الدموية. اضغط على الزر الفارغ حتى يدخل الورم إلى بطن المضيف الجديد.
باستخدام ملقط ، اضغط بلطف على أجنحة المضيف لإزالته من الشريط. ثم ضعه في قارورة جديدة مع الطعام الطازج. فحص الأورام التي نمت في البطن المضيف باستخدام المجهر الفلوري حوالي 10 إلى 14 يوما بعد الألوغراف وتشريح الورم المزروع من المضيف باستخدام زوجين من الملقط.
استخدم زوجا واحدا من الملقط للضغط على البطن والزوج الآخر لفتح بشرة البطن ، مما يعرض الورم المجعد. عزل الورم بعناية عن الأنسجة المضيفة المرفقة. استخدم إبر معقمة وقم بتشريح الأورام إلى قطع أصغر مناسبة لحجم الشعيرات الدموية.
كرر هذه العملية لجيل جديد من المضيفين البالغين لإكمال عملية زرع الورم. تم تتبع عملية تطور الورم عن طريق التصوير الحي للجيل الأول من ورم الحلقة الخيالية SG الذي ينمو في بطن مضيف بالغ في اليوم 10 ، بعد الزرع. الجيل السادس من ورم الحلقة الخيالية SG يحتل جزءا كبيرا من البطن المضيف في اليوم 10 ، بعد الزرع يظهر هنا.
قد يساعد التصوير في هذه المرحلة في الكشف عن أنماط نمو الورم وكذلك سلوكيات الهجرة والغزو. زرع الورم هو تقنية رائعة للدراسات الطولية لتطور الورم وتطوره وورم خبيث. نتائج ذات أهمية كبيرة ، لدراسة تفاعلات مضيف الورم.
هذا البروتو لديه إمكانات كبيرة في شاشات أدوية السرطان باستخدام الأدوية Temodal. باستخدام هذه التقنية ، سيتمكن الباحثون من توفير الكثير من الوقت والجهد في التحقيق.
