このプロトコルは、ショウジョウバエ腫瘍同種移植における自己注射器装置の使用を記載する最初のものの一つである。近年人気が高まっているトピック。この方法の主な利点は、腫瘍他家移植の速度、一貫性および収量を改善することによってショウジョウバエにおける癌研究の効率を高めることである。
ショウジョウバエの腫瘍他家移植は、習得するのが難しい繊細な技術です。忍耐強く、練習が完璧になると信じてください。ハエを交配し、卵を摂氏18度で6日間孵化させた後、孵化した幼虫を含むバイアルを摂氏29度に設定したインキュベーターに移す。
麻酔をかけられた野生型または突然変異型の成虫のハエを性別に基づいてソートする。長さ 5 cm のフライ テープを顕微鏡スライドに固定し、粘着性のある面を上にします。鉗子で翼をテープに接着してハエを固定する。
コントローラーボックスとオートインジェクターを光学顕微鏡の反対側に置きます。ガラスキャピラリーの一端を4段階のマイクロピペットプーラーを用いて処理し、それを狭い閉じた端に加熱する。鉗子を使用してキャピラリーを約60度の角度でクリップし、3.5インチのガラスキャピラリーを準備します。
インジェクタのキャップを軽く緩めます。空のボタンを押したままにして、全長の70〜80%が表示されるまでインジェクター針を進めます。シリンジを使用して、ガラスキャピラリーを鉱物油で満たします。
幼虫の1つを選択し、100マイクロリットルのシュナイダー培地で満たされた解剖プレートに移して、SG想像上のリング腫瘍解剖に備えます。1対の鉗子を使用して幼虫体の中央部を保持し、別の一対の鉗子を使用して幼虫の頭をつまみ、縦方向に伸張力を加える。幼虫のY字型SGを見つけて単離し、次いで隣接する組織を除去することによってSG想像上の環腫瘍を解剖する。
充填ボタンを押したまま、シュナイダーのミディアムでガラスキャピラリーを上部の0.5センチメートルセグメントまで満たします。原発腫瘍を見つけ、腫瘍が毛細血管に吸引されるまで充填ボタンを押します。腫瘍が毛細血管の先端または毛細血管の先端から数ミリメートル離れていることを確認してください。
テープに固定されている成体のハエを見つけます。次に、鉗子を使用して下腹部を静かに押さえ、毛細血管で腹部の下側キューティクルを突き刺します。腫瘍が新しい宿主の腹部に入るまで空のボタンを押します。
鉗子を使用して、ホストの翼をそっとつまんでテープから取り外します。それからそれを新鮮な食物と一緒に新しいバイアルに入れます。アログラフ撮影後10〜14日頃に蛍光顕微鏡を用いて宿主腹部に増殖した腫瘍をスクリーニングし、2対の鉗子を用いて宿主から増殖した同種移植腫瘍を解剖した。
1対の鉗子を使用して腹部を押さえ、もう1対を使用して腹部キューティクルを切り開き、同種移植腫瘍を露出させます。付着した宿主組織から腫瘍を慎重に単離する。滅菌針を使用し、腫瘍を毛細血管のサイズに適した小さな断片に解剖します。
腫瘍の他家移植を完了するために、新世代の成体宿主に対してこのプロセスを繰り返します。腫瘍発生の過程は、他家移植後10日目に成人宿主腹部に生育する第1世代SG想像環腫瘍のライブイメージングによって追跡した。10日目に宿主腹部の大部分を占める第6世代SG虚環腫瘍を、他家移植後がここに示されている。
この段階でのイメージングは、腫瘍の成長パターン、ならびに腫瘍の遊走および浸潤挙動を明らかにするのに役立つ可能性がある。腫瘍移植は、腫瘍の進行、進化および転移のための縦断的研究のための素晴らしい技術である。非常に重要な結果, 腫瘍宿主の相互作用を研究するために.
このプロトは、テモダルという薬剤を使用した抗がん剤スクリーニングにおいて大きな可能性を秘めています。この手法を使用すると、研究者は調査の時間と労力を大幅に節約できます。
