Этот протокол является одним из первых, описывающих использование аутоинъекторного аппарата при аллотрансплантации опухоли дрозофилы. Тема, которая выросла в популярности в последние годы. Основным преимуществом данного метода является то, что он повышает эффективность исследования рака у дрозофилы за счет улучшения скорости, консистенции и выхода аллотрансплантации опухоли.
Аллотрансплантация опухоли при дрозофиле является деликатной техникой, которую может быть трудно освоить. Будьте терпеливы и верьте, что практика делает ее совершенной. После скрещивания мух и высиживания яиц в течение шести дней при 18 градусах Цельсия перенесите флаконы, содержащие вылупившихся личинок, в инкубатор, установленный при температуре 29 градусов Цельсия.
Сортируйте обезболенных диких или мутантных взрослых мух на основе их пола. Закрепите пятисантиметровую ленту на предметном стекле микроскопа липкой стороной вверх. Обездвиживайте мух, приклеивая их крылья к ленте щипцами.
Поместите блок контроллера и автоинжектор на противоположные стороны светового микроскопа. Обработайте один конец стеклянного капилляра с помощью четырехступенчатого съемника микропипетки, нагревая его до узкого закрытого конца. Используйте щипцы, чтобы обрезать капилляр под углом примерно 60 градусов, чтобы подготовить 3,5-дюймовый стеклянный капилляр.
Слегка открутите колпачок инжектора. Удерживайте пустую кнопку, чтобы продвинуть иглу инжектора до тех пор, пока не появится от 70 до 80% ее общей длины. Используйте шприц, чтобы заполнить стеклянный капилляр минеральным маслом.
Выберите одну из личинок и переложите на рассеченную пластину, заполненную 100 микролитрами среды Шнайдера, чтобы подготовиться к рассечению опухоли имагинального кольца SG. Используя одну пару щипцов для удержания средней части тела личинки, зажмите головку личинки с помощью другой пары щипцов и приложите силу растяжения вдоль. Найдите и изолируйте Y-образный SG личинок, затем рассекните опухоль воображаемого кольца SG, удалив соседнюю ткань.
Заполните стеклянный капилляр средней частью Schneider до верхнего сегмента 0,5 сантиметра, удерживая кнопку заполнения. Найдите первичную опухоль и нажимайте кнопку заполнения, пока опухоль не будет отсасываться в капилляр. Убедитесь, что опухоль находится на кончике капилляра или в нескольких миллиметрах от кончика капилляра.
Найдите взрослую муху, иммобилизованную к ленте. Затем используйте щипцы, чтобы осторожно удерживать нижнюю часть живота и проткнуть капилляром нижнюю боковую кутикулу живота. Нажимайте пустую кнопку, пока опухоль не войдет в живот нового хозяина.
Используя щипцы, аккуратно зажмите крылья хозяина вверх, чтобы снять его с ленты. Затем поместите его в новый флакон со свежими продуктами. Скрининг опухолей, которые выросли в брюшной полости хозяина, с использованием флуоресцентного микроскопа около 10-14 дней после аллографа и рассечения выращенной аллотрансплантированной опухоли из хозяина с помощью двух пар щипцов.
Используйте одну пару щипцов, чтобы удерживать живот, а другую пару, чтобы разрезать брюшную кутикулу, обнажая аллотрансплантированную опухоль. Тщательно изолируйте опухоль из прикрепленных тканей хозяина. Используйте стерильные иглы и рассекайте опухоли на более мелкие кусочки, которые подходят для размера капилляров.
Повторите этот процесс для нового поколения взрослых хозяев, чтобы завершить аллотрансплантацию опухоли. Процесс развития опухоли отслеживался живой визуализацией опухоли первого поколения SG, растущей в брюшной полости взрослого хозяина на 10-й день, после аллотрансплантации. Опухоль имагинального кольца SG шестого поколения, занимающая большую часть брюшной полости хозяина на 10-й день, здесь показана посталлотрансплантация.
Визуализация на этом этапе может помочь выявить модели роста опухоли, а также ее миграционное и инвазионное поведение. Трансплантация опухоли является отличным методом для продольных исследований прогрессирования опухоли, эволюции и метастазирования. Результаты, имеющие большое значение, для изучения взаимодействий опухолевых хозяев.
Этот прото имеет большой потенциал в скрининге лекарств от рака с использованием препаратов Темодал. Используя эту методику, исследователи смогут сэкономить значительное время и силы в расследовании.
