이 프로토콜은 초파리 종양 동종 이식에서 자동 주입기 장치의 사용을 설명하는 최초의 프로토콜 중 하나입니다. 최근 몇 년 동안 인기를 얻은 주제. 이 방법의 주요 장점은 종양 동종 이식의 속도, 일관성 및 수율을 향상시킴으로써 초파리에서 암 연구의 효율성을 증가시킨다는 것입니다.
초파리의 종양 동종 이식은 마스터하기 어려울 수있는 섬세한 기술입니다. 인내심을 갖고 연습이 완벽하다는 것을 신뢰하십시오. 파리를 건너 섭씨 18도에서 6 일 동안 알을 배양 한 후 부화 한 유충이 들어있는 바이알을 섭씨 29도에 설정된 인큐베이터로 옮깁니다.
마취 된 야생형 또는 돌연변이 성인 파리를 성별에 따라 정렬하십시오. 다섯 센티미터 길이의 플라이 테이프 조각을 현미경 슬라이드에 고정하고 끈적 끈적한면을 위로 향하게하십시오. 포셉으로 날개를 테이프에 부착하여 파리를 고정시킵니다.
컨트롤러 상자와 자동 인젝터를 광학 현미경의 반대쪽에 놓습니다. 유리 모세관의 한쪽 끝을 네 단계 마이크로 피펫 풀러를 사용하여 처리하고, 이를 좁은 닫힌 단부로 가열한다. 포셉을 사용하여 모세관을 약 60도 각도로 클립하여 3.5 인치 유리 모세관을 준비하십시오.
인젝터의 캡을 가볍게 풉니다. 빈 버튼을 누른 채 인젝터 바늘을 전체 길이의 70~80%가 표시될 때까지 전진시킵니다. 주사기를 사용하여 유리 모세관을 미네랄 오일로 채 웁니다.
유충 중 하나를 선택하고 100 마이크로 리터의 슈나이더 배지로 채워진 해부 판으로 옮겨 SG 상상 고리 종양 해부를 준비하십시오. 한 쌍의 포셉을 사용하여 애벌레 몸체의 중간 부분을 잡고 다른 한 쌍의 포셉을 사용하여 애벌레 머리를 꼬집고 길게 스트레칭 힘을 가하십시오. 유충의 Y 자형 SG를 찾아 분리 한 다음 인접한 조직을 제거하여 SG 상상 고리 종양을 해부합니다.
유리 모세관을 슈나이더 미디엄으로 채우기 버튼을 눌러 상단 0.5 센티미터 세그먼트까지 채 웁니다. 원발성 종양을 찾아 종양이 모세관으로 흡입 될 때까지 채우기 버튼을 누릅니다. 종양이 모세관의 끝 또는 모세관의 끝에서 몇 밀리미터 떨어진 곳에 있는지 확인하십시오.
테이프에 고정 된 성인 파리를 찾으십시오. 그런 다음 포셉을 사용하여 하복부를 부드럽게 누르고 모세관으로 복부의 아래쪽 측면 큐티클을 관통하십시오. 종양이 새로운 숙주 복부에 들어갈 때까지 빈 버튼을 누릅니다.
포셉을 사용하여 호스트의 날개를 부드럽게 꼬집어 테이프에서 제거하십시오. 그런 다음 신선한 음식으로 새 바이알에 넣으십시오. 동종이식 후 10 내지 14일 경에 형광 현미경을 사용하여 숙주 복부에서 성장한 종양을 스크린하고, 두 쌍의 포셉을 사용하여 숙주 밖으로 성장한 동종이식편된 종양을 해부한다.
한 쌍의 포셉을 사용하여 복부를 누르고 다른 한 쌍은 복부 큐티클을 절개하여 동종 이식 된 종양을 노출시킵니다. 부착된 숙주 조직으로부터 종양을 조심스럽게 분리한다. 멸균 바늘을 사용하고 종양을 모세관 크기에 적합한 작은 조각으로 해부하십시오.
새로운 세대의 성인 숙주가 종양의 동종 이식을 완료하기 위해이 과정을 반복하십시오. 종양 발달 과정은 동종이식 후 10일째에 성인 숙주 복부에서 성장하는 1세대 SG 상상 고리 종양의 라이브 이미징에 의해 추적되었다. 6세대 SG 상상 고리 종양이 10일째에 숙주 복부의 많은 부분을 차지하고, 동종이식 후 여기에 도시되어 있다.
이 단계에서의 이미징은 종양 성장 패턴뿐만 아니라 이동 및 침윤 행동을 밝히는 데 도움이 될 수 있습니다. 종양 이식은 종양 진행, 진화 및 전이에 대한 종단 연구를위한 훌륭한 기술입니다. 종양 숙주 상호작용을 연구하는 데 매우 중요한 결과.
이 프로토는 Temodal 약물을 사용하는 암 약물 스크리닝에서 큰 잠재력을 가지고 있습니다. 이 기술을 사용하면 연구원은 조사에서 상당한 시간과 노력을 절약 할 수 있습니다.
