بروتوكولنا مهم ، لأنه يتوسع في الأساليب الحالية لإنتاج مادة بيولوجية قابلة للتحلل ، تحدث بشكل طبيعي. أسلوبنا يؤكد على إنتاج كرات السليلوز البكتيرية القابلة للاستنساخ. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي سهولة الوصول إلى المواد الضرورية: السكر والماء والشاي والخل ، بداية الثقافة البكتيرية ، قارورة محيرة ، وشاكر مداري.
شخص ما أداء هذه التقنية للمرة الأولى قد لا تكون قادرة على تحديد المجالات بشكل صحيح وإزالة الجماهير السليلوز البكتيرية غير النظامية. لقد أظهرنا هذه الخطوات في الفيديو، ولكن لا تثبط عزيمتك إذا لم تنجح في المرة الأولى. العرض البصري لهذه الطريقة عادة ما يكون مفيدا للباحثين لتصور ما هي أحجام وكميات وأشكال الجماهير السليلوز البكتيرية المفضلة وغير المفضلة.
تبدأ بغلي 350 ملليلتر من الماء deionized باستخدام غلاية الشاي. ثم نقل الماء الساخن إلى كوب 500 ملليلتر. استخدام قفازات الحماية من الحرارة، وتأكد من أن شريط الزجاج يمكن أن تصمد أمام درجات حرارة الماء المغلي.
حل تماما 42.5 غرام من السكروز الحبيبات في الماء الساخن باستخدام قضيب اثارة. حاد كيس مع 2.54 غرام من الشاي الأسود في قارورة تحتوي على محلول السكروز لمدة ساعة واحدة. إزالة كيس الشاي مع قضيب اثارة دون كسرها مفتوحة، والتخلص منه في سلة المهملات.
أضف 100 ملليلتر من الخل الأبيض المقطر إلى الكأس، وحرك الخليط جيدا. نقل 80 ملليلتر من خليط الشاي الحمضية المعدة إلى قارورة حائرة 250 ملليلتر، والسماح لذلك لخليط لتبرد إلى 20 إلى 25 درجة مئوية. أضف 20 ملليلتر من سائل ثقافة المبتدئين الميكروبي إلى القارورة المحيرة عندما يكون السائل في درجة حرارة الغرفة ، وغط القارورة مع Parafilm.
ضع القارورة المحيرة على طاولة اهتزاز مدارية، واسمح لها بالهز بمعدل 125 دوران في الدقيقة لمدة ثلاثة أيام عند 20 إلى 25 درجة مئوية لإنتاج كرات BC. إزالة الجماهير BC غير المرغوب فيها من الأشكال غير كروية مع ملاقط لمنع المزيد من الجماهير BC غير النظامية من تشكيل. بمجرد أن تتشكل كرات BC ، صبها بلطف من القارورة لمزيد من الاستخدام.
في هذا البروتوكول، أظهرت مجالات BC معدل نمو مرتفع لأول 48 ساعة من الثقافة، وظل الحجم ثابتا بعد الوصول إلى الحد الأقصى. بدأت مجالات BC لتشكيل tendrils حول اليوم الثامن من الثقافة. تم اختبار توزيع حجم المجالات بعد تغليف الملوثات الصلبة مثل الفحم الحيوي والخرز البوليمري ونفايات المناجم.
ولوحظ أن إضافة المواد الصلبة إلى مجالات BC لها تأثير ثابت على حجم الكرة أو ترددها. ويبدو أن سرعة الهز المدارية، ودرجة الحرارة المحيطة، وتشكيل الجسيمات غير المنتظمة هي العوامل الرئيسية التي تؤثر على شكل الجسيمات الكروية وحجمها وتكرارها. لوحظ أن ارتفاع درجة حرارة الغرفة أو إزالة غير سليمة من الجماهير غير النظامية غيرت شكل كرة BC سليمة إلى جزيئات ستيلاتي أو كتل سلسلة.
لتحديد جزء من المواد الصلبة المغلفة في مجالات BC ، تم إجراء تحليل حراري للجاذبية. وقد أكد التقييم الحراري والمجهري معا التغليف الفعال للجسيمات الصلبة داخل مجالات قبل الميلاد. ظهرت التشكيل الجانبي TGA التفاضلية للطائرة قبل الميلاد في مقادير متطابقة تقريبا مع BC مع حبات البوليسترين.
ومع ذلك ، لوحظت ذروة إضافية مقابلة للتحلل الحراري لخرزات البوليسترين. من المهم للغاية إضافة ثقافة المبتدئين الميكروبية عندما يبرد الشاي إلى درجة حرارة الغرفة. بالإضافة إلى ذلك، يجب أن نضمن أن الثقافة لديها كائنات حية نشطة وصحية.
ويمكن استخدام هذه الطريقة لإزالة الملوثات في المعالجة البيئية. ويمكن أيضا استخدام المجالات للإفراج المراقب عن مادة ذات أهمية. هذه التقنية تمكننا من تغليف المواد البيئية داخل مجالات السليلوز البكتيرية.
وقد يكون ذلك مفيدا لمنصات الإطلاق أو الإصلاح الخاضعة للتحلل البيولوجي.
