يحدد هذا البروتوكول أربعة مجالات رئيسية للمساعدة في تحسين المنهجية والحصول على زراعة رئة موثوقة. الأول هو تقنية الكفة القابلة للتكرار. والثاني هو تحديد المساحة الوربية الرابعة بدقة وتكرار ، وإغلاق شامل للجرح ، ثم كيفية التعافي والحصول على عينات للتحليل.
تساعد هذه التقنيات في تطوير طريقة موثوقة لزراعة الرئة للعمل على الآليات الجزيئية وتطوير التدخلات العلاجية. ابدأ بإعداد الجهاز الجراحي عن طريق تشغيل معدات مراقبة معدل ضربات القلب / تشبع الأكسجين وتسخين اللوحة إلى 42 درجة مئوية. أيضا ، قم بتشغيل آلة التهوية والتخدير لتسخين مبخر الأيزوفلوران.
املأ حقنة التخدير ب 10 ملليلتر من الأيزوفلوران السائل وقم بتركيب المحقنة على آلة التهوية والتخدير. بعد ذلك ، قم بتشغيل المجهر الجراحي مع ضبط الارتفاع والتركيز وفقا للتفضيلات وابدأ تشغيل جهاز الكي الكهربائي. وبالمثل ، قم بإعداد ووضع الأدوات الجراحية.
حدد حجم المقياس الصحيح للقسطرة الوعائية التي سيتم استخدامها لصنع الأصفاد بناء على وزن جسم الجرذ بالرجوع إلى الجدول الأول. بعد تحضير الأصفاد للشريان الرئوي والشعب الهوائية والوريد الرئوي ، ضع قسطرة الأوعية الدموية بالحجم المناسب على سطح معقم تحت المجهر الجراحي. بعد ذلك ، استخدم شفرة جراحية ضلع الظهر رقم 11 لقطع قسطرة الأوعية الدموية إلى زاوية 90 درجة لتشكيل جسم كفة بطول ملليمترين بعرض وارتفاع ملليمتر واحد في الجزء العلوي من جسم الكفة.
بعد تحضير الغلاف للجراحة ، قم بعمل شق جلدي بطول ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات ، منتصف الرقبة ، بالمقص ، وقم بتشريح الأنسجة والعضلات تحت الجلد بعناية باستخدام الملقط. بالنسبة للتنبيب الرغامي ، قم بخيط 4-0 خيط حريري حول القصبة الهوائية. بعد ذلك ، أدخل قسطرة وعائية قياس 16 في القصبة الهوائية واربط الخيط حول القصبة الهوائية بإحكام بعقدة مزدوجة ، متبوعة بعقدة واحدة لتثبيت قسطرة الأوعية في مكانها.
قم بتوصيل قسطرة الأوعية بجهاز التنفس الصناعي للحفاظ على مستوى التخدير الجراحي في الفئران بنسبة 1 إلى 2٪ إيزوفلوران. استخدم المقص لإجراء بضع القص البطني ، كشق مشترك في خط الوسط والعرض. بعد ذلك ، قم بحقن 1،000 وحدة لكل كيلوغرام من الهيبارين مع حقنة الأنسولين عبر الوريد الأجوف السفلي ، أو IVC ، واترك 10 دقائق للدورة الدموية الجهازية.
أثناء تهوية الرئتين ، قم بقطع الأذنين اليمنى واليسرى بمقص زنبركي تشريح دقيق ثم أدخل قسطرة وعائية قياس 18 عبر الشريان الرئوي لغسل الرئتين بالجاذبية ب 20 ملليلتر من محلول الحفظ في حقنة معلقة على 28 سم من الماء ، متصلة بالأنبوب والقسطرة الوعائية. افصل جهاز التنفس الصناعي عن الأنبوب الرغامي لتوصيله بحقنة سعة خمسة ملليلتر مملوءة بحجم مناسب من الهواء بناء على وزن الجسم. بعد ساعة واحدة من نقص التروية الدافئ ، قم باستئصال كتلة القلب والرئة باستخدام مقص الربيع المحوسب والتشريح الدقيق وضعه على شاش معقم مبلل بالثلج البارد PBS على طبق بتري معقم على الجليد.
قم بقص منطقة النقيض في الرئة اليسرى بعناية باستخدام مقص زنبركي Vannas-Tubingen واشتر الوريد الرئوي الأيسر والشريان الرئوي والشعب الهوائية. استخدم مرقئ البعوض للاستيلاء على لسان الكفة. بعد ذلك ، خذ الطرف البعيد من الوريد الرئوي أو الشريان الرئوي أو الشعب الهوائية من خلال جسم الكفة المناسب وحرك الأنسجة الإضافية حول الكفة قبل التثبيت ب 8-0 خياطة النايلون.
بمجرد الانتهاء من ذلك ، استخدم مقص زنبركي Vannas-Tubingen لتقليم الأنسجة الزائدة والكفة حول جسم الكفة. لتحضير الجرذ المتلقي ، ارسم خطا على صدر الجرذ من الشق فوق القصي إلى عملية الخنجري. في منتصف هذا الخط ، ارسم خطا على طول الجانب الأيسر من الصدر يقيس نصف القياس من الشق فوق القصي إلى عملية الخنجري.
باستخدام كابل الألياف الضوئية المتصل بضوء LED من مجموعة التنبيب الرغامي ، قم بتصور المتلقي وتنبيبه باستخدام قسطرة وعائية قياس 16. بمجرد سحب الرئتين ، ضع شاشا معقما حول الرئة اليسرى أثناء إمساكه بمشبك Dieffenbach bulldog وقم بتطبيق مشبك Yasargil على منطقة هيلار الرئة اليسرى بالقرب قدر الإمكان. عندما يتم تحضير الجرذ ، انتقل إلى مفاغرة الوريد الرئوي عن طريق وضع 7-0 خياطة نايلون حول الوريد الرئوي للمتلقي.
شق الوريد الرئوي للمتلقي باستخدام مقص زنبركي Vannas-Tubingen عن طريق قطع الأوردة المقطعية العلوية والسفلية بشكل عرضي قدر الإمكان ، وطرد الدم ب 0.2 ملليلتر من وحدة دولية واحدة لكل ملليلتر من محلول ملحي هيبارين باستخدام حقنة الأنسولين. ضع رئة المتبرع ملفوفة بشاش بارد ورطب ومعقم في التجويف الصدري ، وأدخل الوريد الرئوي المقيد للمتبرع في الوريد الرئوي للمتلقي قبل تأمين المفاغرة بخياطة النايلون 7-0 الموضوعة مسبقا. بالنسبة إلى مفاغرة الشعب الهوائية أو الشعب الهوائية ، ضع خياطة نايلون 7-0 حول القصبات الهوائية للمتلقي قبل شق القصبات الهوائية للمتلقي عن طريق قطع الشعب الهوائية العلوية والسفلية بشكل عرضي قدر الإمكان.
بعد إدخال القصبات الهوائية المتبرعة في القصبات الهوائية للمتلقي ، قم بتأمين المفاغرة بخياطة النايلون 7-0 الموضوعة مسبقا. بعد ذلك ، قم بإجراء مفاغرة الشريان الرئوي كما هو موضح سابقا. للسماح بوفرة وتهوية رئة المتبرع المزروع ، قم بإزالة مشبك Yasargil على الهيلوم ، متبوعا بإغلاق شق بضع الصدر بخياطة من النايلون 6-0.
اجمع سائل BAL من الرئتين الأصلية أو المزروعة حسب الرغبة. تم حساب نسبة الوزن الرطب إلى الجاف للفصوص لقياس الوذمة الرئوية. أظهر الفص المزروع زيادة كبيرة في نسبة الوزن الرطب إلى الجاف مقارنة بالفص الأصلي للمتبرع أو المتلقي ، مما يشير إلى عدم وجود وذمة رئوية.
في رأينا ، الخطوتان الحاسمتان لهذا الإجراء هما واحدة ، استخدام المعالم التشريحية بدقة لتحديد الفضاء الوربي الرابع ، ثم اثنتان ، تحديد الأصفاد واستخدامها بشكل مناسب للحصول على تقنية الكفة القابلة للتكرار. يعد نموذج زرع رئة الفئران القابل للتكرار والمتسق أساسا للتحقيقات الجزيئية في وفرة نقص التروية وزرعها بشكل عام.
