تسمح هذه التقنية بفصل أنواع الخلايا المختلفة والخلايا التي تمر بعمليات مختلفة تعتمد فقط على الكثافة مع القليل من التلاعب أو عدم التلاعب في فترة قصيرة من الزمن. المزايا الرئيسية لهذه الطريقة هي أنها طفيفة التوغل ، تتطلب كميات صغيرة ، توفر نتائج سريعة ، لا تعتمد على قراءات كلاسيكية ، ولا يلزم وجود موظفين متخصصين. يمكن تطبيق هذه التقنية للكشف عن أمراض متعددة ، على سبيل المثال فقر الدم والإنتان.
للبدء في استخدام جهاز lancing بنقرة واحدة لوخز إصبع المتبرع بالدم الإيجابي عامل ريسوس، وجمع 10 ميكرولتر من الدم في ملليلتر واحد من DPBS. إضافة ميكرولتر واحد من صبغة الفلورسنت في تعليق ملليلتر واحد من الخلايا الإيجابية عامل ريسوس لتلطخ الفلورسنت غشاء البلازما واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. بيليه الخلايا عن طريق الغزل في 5، 600 مرة G لمدة 15 ثانية وغسل بيليه ثلاث مرات باستخدام ملليلتر واحد من DPBS.
إعادة إنفاق بيليه في ملليلتر واحد من HBSS مع الكالسيوم والمغنيسيوم. استخدام جهاز lancing بنقرة واحدة وخز إصبع عامل ريسوس المتبرع بالدم السلبية وجمع اثنين من ميكرولتر من الدم. لإعداد الأنبوب التجريبي الذي يحتوي على حبات فقط، أضف 174 ميكرولتر من HBSS مع الكالسيوم والمغنيسيوم، وميكرونيتر واحد من حبات التحكم IgG، وميكرويلتر واحد من الخرز الثقيل مع كثافة 1.2 غرام لكل ملليلتر، و 24 ميكرولتر من 500 ملليمولار جادولينيوم.
لإعداد أنبوب التحكم التجريبي الذي يحتوي على IgG ، أضف 172 ميكرولتر من HBSS مع الكالسيوم والمغنيسيوم ، وميكرويتر واحد من حبات التحكم IgG ، وميكرويتر واحد من الخرز الثقيل ، وميكرونيتر واحد من الدم السلبي عامل ريسوس ، وميكروليت واحد من عامل ريسوس الملون تعليق الدم الإيجابي ، و 24 ميكرولتر من 500 ملليمولار gadolinium. لإعداد عينة أنبوب تجريبي، إضافة 172 ميكرولتر من HBSS مع الكالسيوم والمغنيسيوم، ميكرولتر واحد من الخرز المغلفة المضادة للRhD، ميكرولتر واحد من الخرز الثقيل، ميكرولتر واحد من الدم السلبي عامل ريسوس، ميكرولتر واحد من عامل ريسوس الملون تعليق الدم الإيجابي، و 24 ميكرولتر من 500 ملليمولار gadolinium. إعداد جهاز الارتفاع المغناطيسي.
وتحميل 50 ميكرولتر من العينة في أنبوب الشعرية حتى يتم تعبئة الأنبوب. ختم نهايات الأنبوب الشعري مع تسرب الشعرية ضمان عدم وجود فقاعات. ضع الأنبوب الشعري في حامل الشعرية بين المغناطيس العلوي والسفلي، واضبط المرحلة وركز على المشاهدة المثلى.
انتظر ما يقرب من خمس إلى 20 دقيقة للخلايا والخرز ليستقر في وضع التوازن المغناطيسي. باستخدام هذا البروتوكول، تم فصل خلايا الدم اعتمادا على ارتفاع الارتفاع باستخدام جهاز الارتفاع المغناطيسي. واستخدمت الخرز منخفضة وعالية الكثافة لتوفير ارتفاعات الكثافة ومراجع الحجم.
كانت الخلايا متعددة الأشكال ترتفع فوق خلايا الدم الحمراء بتركيز أيونات الغادولينيوم 21 ملليمولار. كانت خلايا الدم القديمة ترتفع في تركيز أيونات الغادولينيوم 60 ملليمولار. تم فصل خلايا الدم الحمراء والخلايا متعددة الأشكال والخلايا الليمفاوية في تركيز أيونات gadolinium 40 ملليمولار استنادا إلى كثافاتها الجوهرية.
تم الكشف عن مستضد عامل ريسوس على خلايا الدم الحمراء باستخدام IgG والأجسام المضادة لل RhD المغلفة بالخرز. لم يتم إنشاء مجمعات الخلايا الحمراء حبة في عينة التحكم IgG، ولكن تم الكشف عن خلايا الدم الحمراء الملون فلوريا التي استولت عليها الخرز عامل ريسوس إيجابية. ربط المضادة لRhB إلى الخلايا الإيجابية عامل ريسوس خلق مجمع خلايا حبة في المركز في كثافة متقطعة من الخرز غير منضم وخلايا الدم الحمراء السلبية.
وعلاوة على ذلك، تم تأكيد التكوين المعقد من خلال مراقبة الفلورسينس المنبعث. مجمعات حبة B التي تشكلت بين الخرز عالية ومنخفضة الكثافة المغلفة بالأجسام المضادة لCR1 و CD47 تشير إلى وجود الحويصلات المشتقة من خلايا الدم الحمراء خارج الخلية. وضع حد أقصى للشعيرات الدموية دون إدخال فقاعات هو الخطوة الأكثر تحديا ويتطلب الممارسة.
يمكن أن توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة لأمراض الدم ، وتركز بشكل خاص على أمراض خلايا الدم الحمراء.
