Esta técnica permite a separação de vários tipos celulares e células submetidas a vários processos baseados apenas na densidade com pouca ou nenhuma manipulação em um curto período de tempo. As principais vantagens deste método são que ele, como minimamente invasivo, requer pequenos volumes, proporciona resultados rápidos, não depende de leituras clássicas, e pessoal especializado não é necessário. Essa técnica pode ser aplicada para detectar múltiplas doenças, como anemia e sepse.
Para começar a usar o dispositivo de lancing de um clique para picar o dedo do fator rhesus doador positivo de sangue, e coletar 10 microliters de sangue em um mililitro de DPBS. Adicione um microliter de corante fluorescente em uma suspensão mililitro das células positivas do fator resus para manchar fluorescentemente a membrana plasmática e incubar a 37 graus Celsius por 15 minutos. Pelota as células girando a 5.600 vezes G durante 15 segundos e lave a pelota três vezes usando um mililitro de DPBS.
Resuspende a pelota em um mililitro de HBSS com cálcio e magnésio. Use o dispositivo de um clique para picar o dedo do fator rhesus negativo doador de sangue e coletar dois microliters de sangue. Para preparar o tubo experimental contendo apenas contas, adicione 174 microliters de HBSS com cálcio e magnésio, um microliter de contas de controle IgG, um microliter de contas pesadas com densidade de 1,2 grama por mililitro, e 24 microliters de 500 milmolares de gadolínio.
Para preparar o tubo de controle experimental contendo IgG, adicione 172 microliters de HBSS com cálcio e magnésio, um microliter de contas de controle IgG, um microlitr de contas pesadas, um microliter de sangue negativo fator rhesus, um microlitr de resus fator positivo suspensão sanguínea, e 24 microlitadores de 500 mililitros de gadolinium. Para preparar o tubo experimental da amostra, adicione 172 microliters de HBSS com cálcio e magnésio, um microliter de contas revestidas anti-RhD, um microlitr de contas pesadas, um microliter de sangue negativo do fator resus, um microliter de fator resus manchado de suspensão positiva do sangue, e 24 microliters de 500 mililitros de gadolar de 500 mililitros. Configure o dispositivo de levitação magnética.
E carregue 50 microliters da amostra em um tubo capilar até que o tubo esteja cheio. Sele as extremidades do tubo capilar com um selante capilar garantindo que não haja bolhas. Coloque o tubo capilar no suporte capilar entre os ímãs superior e inferior, ajuste o estágio e o foco para uma visualização ideal.
Aguarde aproximadamente de 5 a 20 minutos para que as células e contas se instalem em sua posição de equilíbrio magnético. Usando este protocolo, as células sanguíneas foram separadas dependendo da altura da levitação usando o dispositivo de levitação magnética. Contas de baixa e alta densidade foram usadas para fornecer alturas de levitação de densidade e referências de tamanho.
As células polimorfonucleares estavam levitando acima dos glóbulos vermelhos em 21 milimônios concentração de íons de gadolinium. Células sanguíneas antigas estavam levitando em 60 milimolars de concentração de íons de gadolinium. Os glóbulos vermelhos, as células polimorfonucleares e os linfócitos foram separados a 40 milimilas de concentração de íons gadolínio com base em suas densidades intrínsecas.
O antígeno do fator rhesus foi detectado nos glóbulos vermelhos usando contas revestidas de anticorpos IgG e anti-RhD. Os complexos de células vermelhas não foram gerados na amostra de controle de IgG, mas foram detectados os glóbulos vermelhos fluorescentes capturados pelas contas positivas do fator rhesus. A ligação do anti-RhB às células positivas do fator rhesus criou um complexo de células de contas no centro em densidade intermitente das contas não ligadas e dos glóbulos vermelhos negativos.
Além disso, a formação complexa foi confirmada observando a fluorescência emitida. Os complexos de contas B formados entre as contas de alta e baixa densidade revestidas com os anticorpos para CR1 e CD47 indicam a presença de vesículas extracelulares derivadas de glóbulos do sangue vermelho. Cobrir o capilar sem introduzir bolhas é o passo mais desafiador e requer prática.
Esse método poderia fornecer insights para a hematologia, especialmente focado em doenças de glóbulos vermelhos.
