Diese Technik ermöglicht die Trennung verschiedener Zelltypen und Zellen, die verschiedene Prozesse durchlaufen, die ausschließlich auf der Dichte basieren, mit wenig bis gar keiner Manipulation in kurzer Zeit. Die Hauptvorteile dieser Methode sind, dass sie minimalinvasiv ist, kleine Volumina erfordert, schnelle Ergebnisse liefert, nicht von klassischen Auslesungen abhängt und kein Fachpersonal erforderlich ist. Diese Technik kann zur Erkennung mehrerer Krankheiten, zum Beispiel Anämie und Sepsis, angewendet werden.
Um zu beginnen, verwenden Sie das Ein-Klick-Stechgerät, um den Finger des Rhesusfaktor-positiven Blutspenders zu stechen, und sammeln Sie 10 Mikroliter Blut in einem Milliliter DPBS. Fügen Sie einen Mikroliter Fluoreszenzfarbstoff in einer Milliliter-Suspension der Rhesusfaktor-positiven Zellen hinzu, um die Plasmamembran fluoreszierend zu färben und bei 37 Grad Celsius für 15 Minuten zu inkubieren. Pelletieren Sie die Zellen, indem Sie sich 15 Sekunden lang mit 5,600 mal G drehen und waschen Sie das Pellet dreimal mit einem Milliliter DPBS.
Resuspendieren Sie das Pellet in einem Milliliter HBSS mit Calcium und Magnesium. Verwenden Sie das Ein-Klick-Stechhilfegerät, um den Finger des Rhesusfaktor-negativen Blutspenders zu stechen und zwei Mikroliter Blut zu sammeln. Zur Herstellung des Versuchsröhrchens, das nur Perlen enthält, werden 174 Mikroliter HBSS mit Calcium und Magnesium, ein Mikroliter IgG-Kontrollperlen, ein Mikroliter schwere Perlen mit einer Dichte von 1,2 Gramm pro Milliliter und 24 Mikroliter 500 Millimolar Gadolinium zugegeben.
Zur Herstellung des experimentellen Kontrollröhrchens, das IgG enthält, werden 172 Mikroliter HBSS mit Calcium und Magnesium, ein Mikroliter IgG-Kontrollperlen, ein Mikroliter schwere Perlen, ein Mikroliter Rhesusfaktor-negatives Blut, ein Mikroliter gefärbte Rhesusfaktor-positive Blutsuspension und 24 Mikroliter 500 Millimolar Gadolinium zugegeben. Zur Vorbereitung des Probenversuchsröhrchens werden 172 Mikroliter HBSS mit Calcium und Magnesium, ein Mikroliter Anti-RhD-beschichtete Kügelchen, ein Mikroliter schwere Perlen, ein Mikroliter Rhesusfaktor-negatives Blut, ein Mikroliter gefärbte Rhesusfaktor-positive Blutsuspension und 24 Mikroliter 500 Millimolar Gadolinium zugegeben. Richten Sie die Magnetschwebevorrichtung ein.
Und laden Sie 50 Mikroliter der Probe in ein Kapillarrohr, bis das Röhrchen gefüllt ist. Versiegeln Sie die Enden des Kapillarrohrs mit einer Kapillarversiegelung, um sicherzustellen, dass keine Blasen vorhanden sind. Legen Sie das Kapillarrohr in den Kapillarhalter zwischen den oberen und unteren Magneten, stellen Sie die Bühne und den Fokus für eine optimale Betrachtung ein.
Warten Sie etwa fünf bis 20 Minuten, bis sich die Zellen und Kügelchen an ihrer magnetischen Gleichgewichtsposition niedergelassen haben. Mit diesem Protokoll wurden die Blutzellen in Abhängigkeit von der Levitationshöhe mit hilfe der Magnetschwebevorrichtung getrennt. Perlen mit niedriger und hoher Dichte wurden verwendet, um Dichteschwebehöhen und Größenreferenzen bereitzustellen.
Die polymorphkernigen Zellen schwebten über den roten Blutkörperchen bei einer Gadolinium-Ionenkonzentration von 21 Millimolaren. Alte Blutzellen schwebten bei einer Gadolinium-Ionenkonzentration von 60 Millimolaren. Die roten Blutkörperchen, polymorphkernigen Zellen und Lymphozyten wurden bei einer Gadolinium-Ionenkonzentration von 40 Millimol basierend auf ihren intrinsischen Dichten getrennt.
Das Rhesusfaktor-Antigen wurde auf den roten Blutkörperchen mit IgG und Anti-RhD-Antikörper-beschichteten Kügelchen nachgewiesen. Die Perlenkomplexe der roten Blutkörperchen wurden nicht in der IgG-Kontrollprobe erzeugt, aber die fluoreszierend gefärbten roten Blutkörperchen, die von den Rhesusfaktor-positiven Kügelchen eingefangen wurden, wurden nachgewiesen. Die Bindung des Anti-RhB an die Rhesusfaktor-positiven Zellen erzeugte einen Kügelchenzellkomplex im Zentrum bei intermittierender Dichte der ungebundenen Kügelchen und der negativen roten Blutkörperchen.
Weiterhin wurde die komplexe Bildung durch Beobachtung der emittierten Fluoreszenz bestätigt. Die B-Perlenkomplexe, die zwischen den mit den Antikörpern für CR1 und CD47 beschichteten Perlen mit hoher und niedriger Dichte gebildet werden, weisen auf das Vorhandensein von extrazellulären Vesikeln aus roten Blutkörperchen hin. Die Kapillare zu verschließen, ohne Blasen einzuführen, ist der schwierigste Schritt und erfordert Übung.
Diese Methode könnte Einblicke in die Hämatologie liefern, insbesondere für Erkrankungen der roten Blutkörperchen.
