ضخ الغدة الباروتية الرجعية من خلال قناة ستينسن في الرئيسيات غير البشرية لتسليم الجينات المتجهة

هذا البروتوكول مهم لأنه يوضح إجراء ضخ الغدة اللعابية الرجعية بالتفصيل. يمكن استخدام الإجراء لمجموعة متنوعة من الأسباب الطبية، مثل الضمور المناعي الموجه أو العلاج الجيني. هذه التقنية سهلة التعلم والتكاثر.

وقد تمكن المؤلفون من إجراء هذا الإجراء بنجاح في مناسبات متعددة على الرغم من عدم كونهم جراحين فمويين، أو وجود أي خلفية من هذا القبيل. بعد تخدير استخدام الأسنان loupes للتكبير وتحديد الحليمة السباتية أو فتح قناة ستينسون على الخد الخلفي المجاورة للضرس الثاني العلوي. توسيع بلطف الحليمة السباتية عن طريق وضع نقطة من موسع مخروطي في وسط أو فتح الحليمة وتدوير المتوسع ذهابا وإيابا لمدة 20 إلى 30 ثانية تقريبا.

بعد ذلك ، باستخدام ملاقط عقد نهاية ملحوظ من أنبوب البولي ايثيلين تعلق على حقنة تحتوي على حقنة في حوالي 0.5 سم من نهاية البعيدة وإدراج بلطف غيض من الأنبوب في الحليمة المتوسعة. تقدم بلطف أنبوب من قبل حركات دوارة صغيرة لمساعدة الأنابيب الشريحة، تليها إعادة ضبط ملاقط 0.5 سم قريبة من قبضة السابقة. كرر هذه العملية حتى تصل علامة سنتيمترين إلى الحليمة الباروتية.

بعد ذلك ، لختم الحليمة السباتية وتقليل انسكاب السائل مرة أخرى في تجويف الفم ، ضع سيانواكريلات على الخد حول الحليمة وعلى الأنبوب المدرج. بمجرد أن يجف السيانواكريلات ، قم بحقن الضخ ببطء على مدى خمس دقائق بمعدل 100 ميكرولتر في الدقيقة. بعد اكتمال التسريب ، اترك الأنبوب في مكانه لمدة خمس دقائق على الأقل ، وبالتالي الحفاظ على القناة مغلقة والسماح للغرس بالبقاء في الغدة السباتية.

وأخيرا، قم بإزالة الأنبوب باستخدام الجر اللطيف وسيسحب السيانواكريلات مجانا باستخدام الأنبوب. أظهر التنظير الفلوري باستخدام ضخ التباين الراديوي تفريع المحلول من خلال قناة ستينسون وإلى الغدة السباتية. كشفت المناعة كما كشف التحليل الكيميائي للغدة الباروتية تلطيخ إيجابي لEGFP في كل من الخلايا القناة والأسينار مما يشير إلى نجاح التحويل والنسخ في كلا النوعين من الخلايا.

التحدي الرئيسي في هذا الإجراء هو على الأرجح إدخال أنبوب البولي إيثيلين في الحليمة ، والذي يجب القيام به بلطف وببطء شديد.