ベクター化遺伝子導入のための非ヒト霊長類におけるステンセンダクトによる逆行性耳下腺注入

このプロトコルは、唾液腺逆行注入の手順を詳細に示すため重要である。この手順は、ベクター化免疫予防や遺伝子治療などの様々な医学的理由で使用することができます。このテクニックは、簡単に学習し、再現できます。

著者らは、口腔外科医ではないにもかかわらず、そのような背景を持っていないにもかかわらず、何度もこの手順を正常に実行することができました。麻酔後、拡大のために歯科ループを使用し、上部第2臼歯に隣接する後頬の耳下蓋乳頭またはステンソンのダクトの開口部を特定する。円錐形のディレーターの点を中央に置くか、乳頭を開いて、約20〜30秒間、前後にディラタを回すことによって、耳蓋乳頭を穏やかに拡張します。

次に、遠位端から約0.5センチメートルで注射器を含むインフューズを含むインフューズを取り付けたポリエチレンチューブの印の端を保持するピンセットを使用し、チューブの先端を軽く拡張乳頭に挿入します。チューブがスライドするのを助けるために小さな回転運動によってチューブを穏やかに進め、続いてピンセットの0.5センチメートル近位を前のグリップに再調整します。2センチマークが耳下腺乳頭に達するまで、このプロセスを繰り返します。

次に、耳下腺乳頭を密封し、口腔内に戻るインフュージングのこぼれを減らし、乳頭の周りおよび挿入管の頬にシアノアクリルを塗布する。シアノクリレートが乾燥したら、1分間に100マイクロリットルの速度で5分間にわたって徐煙をゆっくりと注入します。注入が完了した後、チューブを少なくとも5分間所定の位置に残し、それによってダクトを密閉し、インフュージングが耳下腺に残るようにします。

最後に、穏やかな牽引力でチューブを取り外すと、シアノアクリルはチューブで自由に引っ張ります。無線コントラスト注入を用いた蛍光検査は、ステンソンのダクトを通って耳下腺に溶液の分岐を実証した。耳下腺の化学分析としての免疫は、両方の細胞タイプにおける正常な転移および転写を示す管および共生細胞の両方でEGFPの陽性染色を明らかにした。

この手順の主な課題は、おそらく非常に穏やかにゆっくりと行われるべき乳頭にポリエチレンチューブを導入することです。