Infusione retrograda della ghiandola parotide attraverso il dotto di Stensen in un primate non umano per la consegna di geni vettoriali

Questo protocollo è importante perché dimostra in dettaglio la procedura di infusione retrograda delle ghiandole salivari. La procedura può essere utilizzata per una serie di motivi medici, come l'immunoprofilassi vettoriale o la terapia genica. Questa tecnica è facile da imparare e riprodurre.

Gli autori sono riusciti a eseguire questa procedura con successo in più occasioni nonostante non fossero chirurghi orali, né avessero un tale background. Dopo l'anestesia utilizzare lenti dentali per l'ingrandimento e identificare la papilla parotide o l'apertura del dotto di Stenson sulla guancia posteriore adiacente al secondo molare superiore. Dilatare delicatamente la papilla parotide posizionando la punta di un dilatatore conico al centro o all'apertura della papilla e ruotare il dilatatore avanti e indietro per circa 20-30 secondi.

Successivamente, utilizzando una pinzetta tenere l'estremità marcata del tubo di polietilene attaccato alla siringa contenente infusato a circa 0,5 centimetri dall'estremità distale e inserire delicatamente la punta del tubo nella papilla dilatata. Far avanzare delicatamente il tubo con piccoli movimenti rotanti per aiutare i tubi a scivolare, seguiti da riregolazione delle pinzette di 0,5 centimetri prossimali alla presa precedente. Ripeti questo processo fino a quando il segno di due centimetri raggiunge la papilla parotide.

Successivamente, per sigillare la papilla parotide e ridurre la fuoriuscita dell'infusato nella cavità orale, applicare un cianoacrilato sulla guancia intorno alla papilla e sul tubo inserito. Una volta che il cianoacrilato si asciuga, iniettare lentamente l'infuso per cinque minuti ad una velocità di 100 microlitri al minuto. Al termine dell'infusione, lasciare il tubo in posizione per almeno cinque minuti, mantenendo così il condotto sigillato e permettendo all'infusato di rimanere nella ghiandola parotide.

Infine, rimuovere il tubo con una trazione delicata e il cianoacrilato tirerà libero con il tubo. La fluoroscopia mediante infusione di contrasto radio ha dimostrato la ramificazione della soluzione attraverso il dotto di Stenson e nella ghiandola parotide. Immuno come l'analisi chimica della ghiandola parotide ha rivelato una colorazione positiva per EGFP sia nelle cellule duttali che acino, indicando una trasduzione e una trascrizione di successo in entrambi i tipi di cellule.

La sfida principale in questa procedura è probabilmente l'introduzione del tubo di polietilene nella papilla, che dovrebbe essere fatto molto delicatamente e lentamente.