هذا البروتوكول مهم لأننا نطور نموذجا ذا صلة سريريا لإصابة الدماغ الناتجة عن IVH واستسقاء الرأس ، باستخدام حقن الهيموجلوبين في البطينين ، مما يسمح بالقياس الكمي اللاحق لأحجام البطين في التطبيق ، لاختبار استراتيجيات علاجية جديدة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بدراسة أمراض IVH التي يتم التوسط فيها على وجه التحديد بواسطة منتجات انهيار الدم في مسار الهيموغلوبين والحديد. هذه التقنية هي أيضا سهلة الاستخدام ومتعددة الاستخدامات.
تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو تطوير علاجات لاستسقاء الرأس بعد النزف ، لأنها تسمح بمزيد من الفهم للفيزيولوجيا المرضية IVH وتقييم استراتيجيات العلاج ذات الصلة سريريا للوقاية من العواقب العصبية بعد IVH. سيوضح الإجراء سروثي راماجيري ، مشارك ما بعد الدكتوراه من مختبر أستراليا. للبدء ، ضع الفئران المخدرة المعرضة في الجهاز التجسيمي مع وضع أنفها في محول التخدير.
ثم قم بتأمين الرأس عن طريق شد قضبان الأذن غير الممزقة على الصماخ السمعي الخارجي. لتنظيف الرأس ، المس أولا قضيبا معقما برأس قطني منقوع في Betadine في وسط الرأس وتحرك للخارج لنشر Betadine في دوائر. ثم كرر العملية باستخدام قضيب منقوع في 70٪ إيثانول.
بعد ذلك ، باستخدام مشرط ، قم بعمل شق 0.3 سم عموديا أسفل مركز الرأس لفضح بريجما الجمجمة. ثم جفف المنطقة باستخدام قضيب ذو رأس قطني. لإعداد حاقن التجسيم ، ارسم محلول الهيموغلوبين المعد مسبقا في حقنة 0.3 أو 0.5 ملليلتر ، وضع المحقنة في نظام حاقن التجسيم.
بعد ذلك ، قم بتشغيل واجهة حاقن التجسيم ، وانقر على زر التكوين لإدخال حجم الحقن ، وإعدادات المعدل. انقر فوق مستوى الصوت ، واضبط مستوى الصوت على 20،000 نانولتر. ثم انقر فوق معدل التسريب ، واضبط المعدل على 8،000 نانولتر في الدقيقة.
انقر فوق زر موضع إعادة التعيين للخروج من التكوين. اغسل طرف الإبرة بالنقر فوق زر التسريب حتى تظهر حبة صغيرة من الهيموجلوبين عند طرف الإبرة ، ثم استخدم قضيبا قطنيا لإزالة الخرزة برفق. لبدء حقن الحيوانات ، اضبط البريغما على أنه صفر على نظام الحقن التجسيمي عن طريق ضبط المواضع المتوسطة والأمامية الخلفية للمحقنة.
ثم اخفض إبرة المحقنة لتلمس الجمجمة في البريغما برفق. بعد تحديد إحداثيات الاختيار ، ارفع إبرة المحقنة سنتيمترا واحدا فوق الجمجمة لتنظيف فروة الرأس. اضبط الإحداثيات المتوسطة والأمامية الخلفية.
ثم اخفض المحقنة حتى تلمس الإبرة الجمجمة برفق واضبط الإحداثيات الظهرية البطنية على مدار 30 ثانية. بمجرد تعيين الإحداثيات ، ابدأ الحقن بالنقر فوق زر التشغيل على واجهة حاقن التجسيم. بعد الانتهاء من الحقن ، اترك الإبرة في مكانها لمدة دقيقتين لتقليل التدفق العكسي للمحلول.
بعد ذلك ، اسحب المحقنة ببطء على طول الإحداثي الظهري البطني على مدار دقيقتين ، حتى يصبح طرف الإبرة أعلى من سنتيمترين فوق فروة الرأس. ثم قم بتدوير ذراع حاقن التجسيم بعيدا عن مجال الجراحة وأغلق فروة الرأس بخياطة حيدة 6-O. بالنسبة للتصوير بالرنين المغناطيسي ، قم بإجراء التصوير المرجح T2 عن طريق تحديد تسلسل صدى الدوران السريع المرجح T2.
بعد تعيين معلمات التصوير بالرنين المغناطيسي كما هو موضح في النص ، انقر فوق الزر "متابعة" لبدء التسلسل. لمعالجة الصور وتحليل حجم الدماغ ، افتح البيانات المرجحة T2 الأصلية في برنامج التجزئة. لتحديد البطينين الجانبيين يدويا ، انقر فوق وضع فرشاة الرسم وحدد نمط الفرشاة المربع ، ثم اضبط حجم الفرشاة على واحد.
بعد ذلك ، انقر فوق مفتش التخطيط ، وحدد العرض المحوري وانقر فوق التكبير / التصغير لتناسب. ثم ضع المؤشر على الصورة وتتبع واملأ مساحة البطين الجانبي. أخيرا ، انقر فوق التجزئة في شريط الأدوات ، متبوعا بالحجم والإحصائيات لعرض وحدات التخزين المجزأة.
الحيوانات التي خضعت لحقن الهيموغلوبين طورت تضخم البطين المعتدل عند تقييمها عن طريق التصوير بالرنين المغناطيسي. مع البطينين الجانبيين أكبر بكثير في 24 ساعة ، و 72 ساعة بعد حقن الهيموغلوبين ، مقارنة بالحيوانات المحقونة ACSF. على الرغم من أن الفرق في حجم البطين الجانبي بين مجموعتي الفئران لم يكن كبيرا بعد 38 يوما ، إلا أن فحوصات التصوير بالرنين المغناطيسي أظهرت أن 44٪ من الفئران التي تتلقى الهيموجلوبين لا تزال تعاني من تضخم البطين الذي لم يتم حله.
علاوة على ذلك ، بالمقارنة مع ACSF ، أدى حقن الهيموجلوبين إلى انخفاض كبير في حجم المادة البيضاء بعد 38 يوما. عزز الهيموجلوبين أيضا استجابة التهابية في الجسم الحي كما يتضح من المستوى الأعلى بشكل ملحوظ لعامل نخر ورم السيتوكين المؤيد للالتهابات ألفا بعد حقن الهيموجلوبين ، ولكن ليس المحلول الملحي أو الدم الكامل. علاوة على ذلك ، كشف التلوين الكيميائي المناعي للبروتين الحمضي الليفي الدبقي عن تنشيط أعلى بكثير للخلايا النجمية بعد حقن الهيموجلوبين ، مقارنة بحقن ACSF.
أهم شيء يجب تذكره عند محاولة هذا الإجراء هو تعيين إحداثيات الحقن الصحيحة لضمان توصيل الهيموجلوبين إلى البطينين الجانبيين. باتباع هذا الإجراء ، يمكن تسليم متتبعات CSF إلى مساحة CSF لتقييم التغيرات في دوران CSF ، وأنماط التدفق بعد IVH. تتناول هذه الطريقة الإضافية كيفية تغيير تدفق السائل الدماغي الشوكي في IVH PHH.
