פרוטוקול זה משמעותי מכיוון שאנו מפתחים מודל רלוונטי מבחינה קלינית של פגיעה מוחית והידרוצפלוס המושרה על ידי IVH, תוך שימוש בהזרקת המוגלובין לחדרים, המאפשרת כימות מאוחר יותר של נפחי החדרים ביישום, לבדיקת אסטרטגיות טיפוליות חדשות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת ללמוד את הפתולוגיה של IVH כי הוא מתווך במיוחד על ידי המוגלובין ברזל מסלול דם מוצרים התמוטטות. טכניקה זו היא גם קלה לשימוש צדדי.
ההשלכות של טכניקה זו מתרחבות לקראת פיתוח טיפולים להידרוצפלוס פוסט-דימומי, שכן היא מאפשרת הבנה נוספת של פתופיזיולוגיה של IVH והערכת אסטרטגיות טיפול רלוונטיות מבחינה קלינית למניעת sequela נוירולוגית בעקבות IVH. מי שתדגים את ההליך תהיה סרותי רמאגירי, פוסט-דוקטורנטית עמיתה מהמעבדה באוסטרליה. כדי להתחיל למקם את החולדה המורדמת נוטה במנגנון הסטריאוטקטי עם האף שלה ממוקם במתאם ההרדמה.
לאחר מכן אבטחו את הראש על ידי הידוק מוטות האוזניים שאינם נקרעים על הבשר השמיעתי החיצוני. כדי לנקות את הראש, יש לגעת תחילה באפליקטור סטרילי מכותנה ספוג בטאדין במרכז הראש ולנוע החוצה כדי לפזר את הבטאדין במעגלים. לאחר מכן חזור על התהליך עם המוליך ספוג 70% אתנול.
לאחר מכן, באמצעות אזמל, לבצע חתך של 0.3 ס"מ אנכית לאורך מרכז הראש כדי לחשוף את bregma של הגולגולת. לאחר מכן ייבשו את האזור באמצעות מוליך כותנה. כדי להגדיר את המזרק הסטריאוטקטי, צייר את תמיסת ההמוגלובין שהוכנה בעבר לתוך מזרק 0.3 או 0.5 מיליליטר, והניח את המזרק במערכת המזרקים הסטריאוטקטית.
לאחר מכן, הפעל את ממשק המזרק הסטריאוטקטי ולחץ על כפתור התצורה כדי להזין את עוצמת ההזרקה ואת הגדרות הקצב. לחץ על נפח, ולהגדיר את נפח על 20, 000 ננוליטר. לאחר מכן לחץ על קצב עירוי, וקבע את הקצב על 8, 000 ננוליטר לדקה.
לחץ על כפתור איפוס המיקום כדי לצאת מהתצורה. שטפו את קצה המחט על ידי לחיצה על כפתור ההחדרה עד שיופיע חרוז קטן של המוגלובין בקצה המחט, ואז השתמשו באפליקטור עם קצה כותנה כדי להסיר בעדינות את החרוז. כדי להתחיל את הזרקת החיה, הגדר את הברגמה כאפס על מערכת ההזרקה הסטריאוטקטית על ידי התאמת המיקומים הבינוניים והאנטרופוסטריים של המזרק.
לאחר מכן הורידו את מחט המזרק כדי לגעת בגולגולת בברגמה בעדינות. לאחר זיהוי הקואורדינטות המועדפות, הרם את מחט המזרק סנטימטר אחד מעל הגולגולת כדי לנקות את הקרקפת. הגדר את הקואורדינטות הבינוניות והאנטרופוסטריות.
לאחר מכן הורידו את המזרק כדי שהמחט תיגע בעדינות בגולגולת וקבעו את הקואורדינטות הגבי במשך 30 שניות. לאחר הגדרת הקואורדינטות, התחל בהזרקה על ידי לחיצה על כפתור ההפעלה בממשק המזרק הסטריאוטקטי. לאחר סיום ההזרקה, השאירו את המחט במקומה למשך שתי דקות כדי למזער את הזרימה האחורית של הפתרון.
לאחר מכן, למשוך לאט את המזרק לאורך הקואורדינטות dorsoventral במשך שתי דקות, עד קצה המחט הוא שני סנטימטרים מעל הקרקפת. לאחר מכן סובב את זרוע המזרק הסטריאוטקטית הרחק מהשדה האופרטיבי וסגור את הקרקפת עם תפר מונופילמנט 6-O. עבור MRI, בצע הדמיה משוקללת T2 על-ידי בחירת רצף הד ספין מהיר משוקלל T2.
לאחר הגדרת הפרמטרים של MRI כמתואר בטקסט, לחץ על הלחצן המשך כדי להתחיל את הרצף. לעיבוד תמונה ולניתוח נפח המוח, פתח את הנתונים המשוקללים המקוריים של T2 בתוכנת הסגמנטציה. לתיחום ידני של החדרים הצדדיים, לחצו על מצב מברשת הצבע ובחרו את סגנון המברשת המרובעת, ולאחר מכן התאימו את גודל המברשת לאחד.
לאחר מכן, לחץ על מפקח הפריסה, בחר תצוגה צירית ולחץ על שנה גודל כדי להתאים. לאחר מכן הנח את הסמן על התמונה ועקוב ומלא את חלל החדר לרוחב. לבסוף, לחץ על פילוח בסרגל הכלים, ואחריו נפח וסטטיסטיקה כדי להציג את אמצעי האחסון המפולחים.
בעלי חיים שעברו הזרקת המוגלובין פיתחו חדריות מתונה כאשר הוערכו באמצעות MRI. עם חדרים רוחביים גדולים משמעותית ב 24 שעות, ו 72 שעות לאחר הזרקת המוגלובין, בהשוואה לבעלי חיים מוזרקים ACSF. למרות שההבדל בנפח החדרים הלטרליים בין שתי קבוצות החולדות לא היה משמעותי לאחר 38 ימים, סריקות MRI הראו כי 44% מהחולדות שקיבלו המוגלובין עדיין סבלו מחדר לא פתור.
יתר על כן, בהשוואה ל- ACSF, הזרקת המוגלובין הביאה לירידה משמעותית בנפח החומר הלבן לאחר 38 ימים. המוגלובין גם קידם תגובה דלקתית in vivo כפי שניתן לראות מהרמה הגבוהה משמעותית של גורם נמק הגידול הציטוקיני הפרו-דלקתי אלפא לאחר הזרקת המוגלובין, אך לא מלוחים או דם שלם. יתר על כן, צביעה אימונוהיסטוכימית של החלבון החומצי גליאל פיברילר גילתה הפעלה גבוהה יותר באופן משמעותי של אסטרוציטים לאחר הזרקת המוגלובין, מאשר לאחר הזרקת ACSF.
הדבר החשוב ביותר שיש לזכור כאשר מנסים הליך זה הוא להגדיר את קואורדינטות ההזרקה הנכונות כדי להבטיח את העברת המוגלובין לתוך החדרים לרוחב. לאחר הליך זה, ניתן להעביר עוקבי CSF למרחב CSF כדי להעריך שינויים במחזור CSF, ודפוסי efflux בעקבות IVH. שיטה נוספת זו מטפלת באופן שבו זרימת CSF משתנה ב- IVH PHH.
