نحن نقدم بروتوكولا لإنشاء نزيف بونتين هائل في الفئران. هذا النموذج من السهل إنشاء، تكرار، وناجحة للغاية. ويمكن استخدام حقن المقطر من طريقة الفئران الذاتية لجعل نزيف في أي من مناطق الدماغ.
الناس الذين يرغبون في محاولة هذه التقنيات يجب أن تتعلم كيفية استخدام إطار ستيريوتاكسيك، وتكون على دراية التشريح بونتين. تبدأ بوضع الستائر الجراحية فوق الماوس. إجراء شق مع مشرط على طول خط الوسط ملحوظ.
استخدام مسحة القطن لإزالة أي دم محتمل. ثم ضع قطعة من ملقط على كل جانب من رفرف فروة الرأس لفضح الجمجمة. تراجع مسحة القطن في 0.9٪ المالحة وإزالة بلطف الأنسجة الضامة من عظم الجمجمة.
استخدم قلم علامة لوضع علامة على النقطة المركزية للبريغما كنقطة الأصل. إجراء عملية استئصال القحف باستخدام الحفر الجزئي، والمضي قدما بعناية. عند الانتهاء من إزالة الحفر الصغيرة من الإطار ستيريوتاكسيك.
ضع حقنة هاملتون 100 ميكرولتر في حامل الاستريوتاكسيك. قم بتشغيل مفتاح مضخة الحقن. انقر فوق زر الاستنشاق السريع.
ثم يستنشق محلول الهيبارين إلى 100 ميكرولتر واستنزافه تماما. تطبيق الكلورهيكسيدين و 75٪ فرك الكحول الجراحية إلى الحكاية كلها من الجذر إلى طرف ثلاث مرات على الأقل لتطهير الجلد، وتليين قرنية وتمدد الوريد الذيل لزيادة معدل نجاح الحقن. قم بإرفاق الوخز بالإبر بفروة الرأس بحقنة ملليلتر واحدة، ثم أدخل الوخز بالإبر بفروة الرأس في وريد ذيلي الجانبي على بعد ثلاثة سنتيمترات من طرف الذيل وأخذ 150 ميكرولتر من الدم.
إزالة الوخز بالإبر فروة الرأس من حقنة ملليلتر واحد ونقل الدم إلى أنبوب. العمل بسرعة لمنع تخثر الدم. تغيير القفازات الجراحية.
حدد وضع السحب. تعيين وحدة التخزين إلى 100 ميكرولتر وتعيين السرعة إلى 200 ميكرولتر في الدقيقة الواحدة. انقر على زر التشغيل، و يستنشق 100 ميكرولتر من الدم في حقنة هاملتون.
قم بالتبديل إلى وضع غرس وتعيين السرعة إلى ميكرولتر واحد في الدقيقة. تقدم الحقنة حتى يصل الطرف إلى 9.2 ملليمتر تحت سطح الدماغ وحقن أول 10 ميكرولترات من الدم. انقر على زر التشغيل.
أوقف الحقن واترك الحقنة في موضعها لمدة 20 دقيقة لمنع تدفق الدم إلى الفضاء تحت العنكبوتية. اسحب الحقنة حتى يصل الطرف إلى تسعة ملليمترات تحت سطح الدماغ ، ثم أعد الحقن بنفس سرعة ميكرولتر واحد في الدقيقة حتى يتم حقن الدم المتبقي تماما. اترك الحقنة في موضعها لمدة 10 دقائق لتجنب تدفق الدم الخلفي.
إزالة الحقنة من الدماغ ببطء. ثم استخدم أسمنت العظام لتغطية ثقب فغر القحف. عندما يجف الاسمنت خياطة الجرح مع خيوط خياطة البولي أميد صفر.
بعد خياطة ثلاث أو أربع غرز ربط 2 عقدة جراحية قياسية واحدة. مراقبة الفئران كل 15 دقيقة حتى يتعافى تماما من التخدير، ثم إعادته إلى القفص الأصلي مع وسادة التدفئة تحت. توفير وصول الفئران مجانا إلى الغذاء والماء.
تم استخدام ما مجموعه 25 حيوانا للسيطرة على 30 ميكرولتر، و 60 ميكرولتر، و 100 حقنة دم ميكرولتر. أجريت الاختبارات السلوكية في الأيام الأولى والثلاثة والسابعة وال14 بعد الجراحة. تسبب نزيف بونتين العجز العصبي مثل تقلص رد الفعل القرنية والدوران.
حقن 100 ميكرولتر من الدم تسبب أيضا في النهم. تم إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي بعد 24 ساعة من الجراحة. في مجموعات حقن الدم، تم الكشف عن نزيف كحافة نقص ضغط الدم مع ISO إلى الأساسية hyperintense قليلا في الجزء باسيلر من البرك.
زاد حجم النزيف مع حجم الحقن. تم التضحية بالجرذان في 24 ساعة و 14 يوما بعد الجراحة. و قسمان سميكان ملليمتران صنعا
تم الكشف عن نزيف المحيطة موقع الحقن وتوزيعها في قاعدة البرك. كان هناك وذمة طفيفة حول النزيف في مجموعة حقن الدم 100 ميكرولتر. تم التضحية ببعض الفئران بعد ثلاثة أيام من الجراحة وتم إجراء أقسام البارافين لتلطيخه.
وأظهرت النتائج أنه في مجموعات حقن الدم الخلايا الالتهابية المخصبة في منطقة النزف الفقرة الهيموغلوبين ظلت تحتوي على خلايا الدم الحمراء سليمة. عند محاولة هذا البروتوكول تأكد من تذكر موضع الحقن. يمكن استخدام هذه الطريقة للحث على حدوث نزيف في أي منطقة دماغية محددة.
