من خلال تطبيق المبيدات الحشرية مباشرة على الحشرة بدلا من التلامس السطحي ، هناك اختلاف ضئيل في التعرض للمبيدات الحشرية ، وهذا يسمح لنا بقياس ملف تعريف قابلية مجموعات البعوض بشكل أكثر دقة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح لنا بحساب الجرعات القاتلة النسبية للكتلة من مبيد حشري بدلا من التركيزات القاتلة ، مما يحسن بشكل كبير من مقارنات نسبة المقاومة. كن حريصا على تخزين المبيدات الحشرية بشكل صحيح ، وتجنب تلويث أدواتك ، وتأكد من أن أجزاء المحاقن في حالة جيدة.
سيساعدك هذا على الحصول على نتائج متسقة. للبدء ، قم بإزالة محاليل المبيدات الحشرية اللازمة من الثلاجة. قم بتدوير المحلول على الفور أو عكسه خمس مرات ، وضعه في حاوية مقاومة للضوء في درجة حرارة الغرفة للسماح للمبيدات الحشرية بالدفء إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
حدد خمسة أنابيب لأجهزة الطرد المركزي الدقيقة مع 0.5 ملليلتر من الأسيتون لكل منها. املأ برميل المحقنة بالكامل بالأسيتون من الأنبوب الأول. ثم اطرد الأسيتون إلى حاوية نفايات عن طريق الضغط بسرعة على المكبس ، وكرر أربع مرات أخرى لإكمال ما مجموعه خمس غسلات أسيتون من نفس أليكوت الأسيتون.
ثم املأ برميل المحقنة بالكامل بالهواء ، واطرد الهواء وبقايا الأسيتون المحتملة في حاوية النفايات. كرر مرتين أخريين لإكمال ثلاث غسلات بالهواء. قم بإنشاء جيب هوائي داخل البرميل بين مكبس المحقنة والجزء العلوي من الإبرة عن طريق سحب المكبس حوالي خمسة ملليمترات داخل البرميل.
قم بتسمية أكواب الحيازة البلاستيكية بمعرف عشوائي لتقييم وفيات المكفوفين. باستخدام شفاط مدعوم بالشفط من الاستنشاق ، استنشق العدد المطلوب من البعوض البالغ من العمر ثلاثة إلى خمسة أيام. ضع طرف الشاحن في الأنبوب مع القطن الملفوف حول الطرف.
الزفير بلطف ، واضغط على الشافط لنقل البعوض إلى أنبوب مخروطي. استخدم القطن لتوصيل الأنبوب عند إزالة طرف الشافطة، ثم قم بتغطيته بالغطاء. قم بإسقاط البعوض لفترة وجيزة في الأنابيب عن طريق وضعها لمدة لا تقل عن 10 دقائق عند أربع درجات مئوية أو دفنها تحت الجليد في صينية ثلج.
نقل البعوض المحطم إلى خيمة مناولة الحشرات. قم بقلب البعوض بعناية على صينية بلاستيكية موضوعة على الجليد ، وصب حوالي 50 بعوضة في المرة الواحدة لضمان لمس كل منها للصينية الباردة تحتها وبقائها محطمة. فرز البعوض حسب الجنس عن طريق التقاطه بلطف من الساقين أو الأجنحة باستخدام الملقط ، يليه وضع كل جنس في كوب عقد منفصل ، والتوقف عند الوصول إلى الرقم المطلوب.
أثناء الفرز ، قم بإزالة أي بعوض مصاب أو كبير أو صغير جدا. لتسجيل وزن كوب البعوض ، ضع كوبا فارغا مع طبق بتري كغطاء على الميزان ، وقم بتقطيع الميزان. صب البعوض في الحاوية ، ووضع الغطاء في الأعلى.
ضع الحاوية على الميزان ، وسجل الوزن النهائي ، إلى جانب عدد البعوض. ضع كوب العينات على الفور مرة أخرى على الجليد لإبقائها مشلولة حتى يتم وزن جميع أكواب العينة. قسم البعوض المحضر إلى خمسة إلى 10 أكواب منفصلة موضوعة على الجليد ، مع وضع ملصقات عليها هويات عشوائية.
استخدم ملاقط ومنضدة محمولة لتحقيق 20 إلى 25 بعوضة لكل كوب. لفرز ذباب الفاكهة ، قم بتخدير الذباب باستخدام ثاني أكسيد الكربون لمدة سبع ثوان. صب الذباب على كيس ثلج ملفوف بورق مقعد.
باستخدام فرشاة طلاء ذات رؤوس دقيقة ، افصل وعد الذكور والإناث. استخدم فرشاة الطلاء لالتقاط الذباب المختار بلطف ، ووضعه في زجاجة مرق نظيفة وفارغة. بعد اختيار عدد متساو من ذباب الفاكهة من الذكور والإناث ، قم بتسمية زجاجات المخزون باسم السلالة وإجمالي ذبابة الفاكهة.
تخدير زجاجة ذباب الفاكهة باستخدام ثاني أكسيد الكربون لمدة سبع ثوان. صب ذباب الفاكهة على ورق الوزن ، واستخدم الورق كقمع لإدخال الذباب في قارورة مشوهة تحمل علامة هوية عشوائية.بعد وضع غطاء طبق بتري فوق قارورة ذباب الفاكهة ، ضعه على الميزان. سجل الوزن المشترك وعدد العينات على ورقة النتيجة.
ضع قارورة ذباب الفاكهة على الفور في صينية من الثلج مع بقاء الغطاء في الأعلى لمنع الذباب من الهروب. قم بتحميل المحقنة بتركيز المبيدات الحشرية المناسب ، بدءا من الجرعة الأقل تركيزا والعمل نحو الجرعة الأكثر تركيزا مع كل مجموعة من الكائنات الحية. ضع العينات على ورق الوزن الموضوع فوق صينية على الجليد.
افصل العينات القريبة من بعضها البعض باستخدام فرشاة طلاء نظيفة خالية من المبيدات الحشرية أو قطعة قطن للسماح بسهولة الوصول إلى كل عينة للحصول على الجرعات. باستخدام المحقنة ، ضع قطرة واحدة من محلول المبيدات الحشرية على منطقة الصدر والبطن البطنية للبعوض والظهرية لذباب الفاكهة. صب العينات على الفور مرة أخرى في الكوب البلاستيكي الموسوم.
قم بتغطية الكوب بالمعاوضة وشريط مطاطي. لاحظ وجود عينة محدثة على الكأس في حالة قتل أي عينات أو تلفها أو هروبها في هذه العملية. ضع الكوب المكتمل في صينية تعليق.
بالنسبة للكوب الأول ، سجل الوقت الذي تكتمل فيه الجرعات. كرر الجرعات لكل كوب حتى يتم إعطاء جميع العينات بتركيزات المبيدات الحشرية المناسبة ، وسجل وقت الانتهاء عندما تم إعطاء جميع العينات. توفير محلول السكروز بنسبة 10٪ لكل كوب عن طريق كرة قطنية مبللة ، وتخزين البعوض وذباب الفاكهة في درجة الحرارة والرطوبة المطلوبة.
تسجيل وفيات العينات في 24 ساعة بعد بدء التعرض للمبيدات الحشرية. تصنيف البعوض على أنه على قيد الحياة إذا كان بإمكانه الطيران وحمل نفسه في وضع مستقيم وميت إذا كان غير متحرك أو ترنح ، كما هو موضح من قبل منظمة الصحة العالمية. اتبع نفس تقييم الوفيات لذباب الفاكهة.
بعد إجراء الفحص الحيوي ، تم الحصول على بيانات استجابة الجرعة التي تضم سلالتين هما النمط الجيني لروكفلر و IICC للذكور والإناث الزاعجة المصرية. كان متوسط الجرعة القاتلة النسبية الجماعية لروكفلر و IICC 0.008 و 0.336 نانوغرام لكل ملليغرام ، على التوالي. وكشفت النتائج عن عدم وجود اختلافات بين منحنيات استجابة الجرعة للإناث والذكور من البعوض داخل كل سلالة.
لذلك ، تم الجمع بين البيانات من كلا الجنسين لحساب متوسط قيم الجرعة المميتة. وبما أن فترات الثقة البالغة 95٪ لمتوسط الجرعة القاتلة لهاتين السلالتين لم تتداخل ، فقد اعتبرت هذه القيم مختلفة بشكل كبير. بالإضافة إلى ذلك ، عند حساب نسب المقاومة ، كانت سلالة IICC أكثر مقاومة بأكثر من 40 مرة من سلالة روكفلر الحساسة.
كما تم الحصول على بيانات الاستجابة للجرعة لذبابة الفاكهة ، ذبابة الفاكهة ، سلالة كانتون-S ، ووجد أن متوسط الجرعة القاتلة النسبية للكتلة هو 0.213 نانوغرام لكل ملليغرام. الاتساق أمر بالغ الأهمية ، خاصة عند تخزين المبيد الحشري وتطبيقه وتقييم الوفيات. أيضا ، توخي الحذر عند التعامل مع العينة لتجنب الضرر أو الموت الذي لا يسببه المبيد الحشري.
باستخدام هذه الطريقة ، يمكننا الآن تحديد المقاومة التقنية لمجموعات البعوض بدقة وكيف تؤثر الظروف البيئية على المقاومة أو كيف تتنبأ المقاومة التقنية بالمقاومة العملية.
