Yüzey teması yerine böcek üzerine doğrudan insektisit uygulayarak, insektisit maruziyetinde minimum varyasyon vardır ve bu, sivrisinek popülasyonlarının duyarlılık profilini daha doğru bir şekilde ölçmemizi sağlar. Bu tekniğin temel avantajı, ölümcül konsantrasyonlardan ziyade bir insektisitin kütle-görecelileştirilmiş ölümcül dozlarını hesaplamamıza izin vermesidir, bu da direnç oranı karşılaştırmalarını büyük ölçüde geliştirir. İnsektisitleri düzgün bir şekilde saklamaya dikkat edin, aletlerinizi kirletmekten kaçının ve şırınga parçalarının iyi durumda olduğundan emin olun.
Bu, tutarlı sonuçlar elde etmenize yardımcı olacaktır. Başlamak için, gerekli insektisit çözeltilerini dondurucudan çıkarın. Çözeltiyi hemen vorteksleyin veya beş kez ters çevirin ve kullanmadan önce insektisitlerin oda sıcaklığına ısınmasına izin vermek için oda sıcaklığında ışığa dayanıklı bir kaba koyun.
Her biri 0,5 mililitre aseton içeren beş mikrosantrifüj tüpü yerleştirin. Şırınga namlusunu ilk tüpten asetonla tamamen doldurun. Daha sonra pistonu hızlı bir şekilde aşağı iterek bir atık kabına atın ve aynı aseton aliquot'tan toplam beş aseton yıkamasını tamamlamak için dört kez daha tekrarlayın.
Ardından, şırınga varilini tamamen havayla doldurun ve havayı ve potansiyel aseton kalıntılarını atık kabına atın. Üç yıkamayı hava ile tamamlamak için iki kez daha tekrarlayın. Şırınga pistonu ile iğnenin üstü arasında, pistonu namluya yaklaşık beş milimetre yukarı çekerek namlu içinde bir hava cebi oluşturun.
Plastik tutma bardaklarını kör mortalite değerlendirmesi için rastgele kimlikle etiketleyin. Solumadan emme ile çalışan bir aspiratör kullanarak, istenen sayıda üç ila beş günlük yetişkin sivrisinekleri aspire edin. Aspiratörün ucunu, ucun etrafına pamukla sarılmış olarak tüpe yerleştirin.
Yavaşça nefes verin ve sivrisinekleri konik bir tüpe aktarmak için aspiratöre dokunun. Aspiratör ucu çıkarıldığında tüpü takmak için pamuğu kullanın ve ardından kapakla kapatın. Tüplerdeki sivrisinekleri, dört santigrat derecede en az 10 dakika yerleştirerek veya bir buz tepsisinde buzun altına gömerek kısaca yıkın.
Devrilen sivrisinekleri böcek taşıma çadırına aktarın. Sivrisinekleri buzun üzerine yerleştirilmiş plastik bir tepsiye dikkatlice bahşiş verin ve her birinin altındaki serin tepsiye dokunduğundan ve devrilmiş kalmasını sağlamak için bir seferde yaklaşık 50 sivrisinek dökün. Sivrisinekleri forsepsli bacaklardan veya kanatlardan nazikçe toplayarak cinsiyete göre sıralayın, ardından her cinsiyeti ayrı bir tutma kabına yerleştirin ve istenen sayıya ulaşıldığında durun.
Sıralama sırasında, yaralanan veya ekstra büyük veya küçük olan sivrisinekleri çıkarın. Sivrisinek kabının ağırlığını kaydetmek için, teraziye kapak olarak Petri kabı olan boş bir bardak yerleştirin ve teraziyi darmadağın edin. Sivrisinekleri kabın içine dökün ve kapağı üstüne yerleştirin.
Kabı teraziye yerleştirin ve sivrisinek sayısıyla birlikte son ağırlığı kaydedin. Numunenin tüm bardakları tartılana kadar hareketsiz tutmak için numune kabını derhal buzun üzerine yerleştirin. Hazırlanan sivrisinekleri, rastgele kimliklerle etiketlenmiş, buz üzerine yerleştirilmiş beş ila 10 ayrı kaba bölün.
Bardak başına 20 ila 25 sivrisinek elde etmek için cımbız ve el tipi bir tezgah kullanın. Meyve sineklerini sıralamak için, sinekleri yedi saniye boyunca karbondioksit kullanarak anestezi yapın. Sinekleri tezgah kağıdına sarılmış bir buz torbasına dökün.
İnce uçlu bir boya fırçası kullanarak, erkekleri ve kadınları ayırın ve sayın. Seçilen sinekleri nazikçe almak için boya fırçasını kullanın ve temiz, boş bir stok şişesine yerleştirin. Eşit sayıda erkek ve dişi meyve sineği seçtikten sonra, stok şişelerini suş adı ve meyve sineği toplamı ile etiketleyin.
Meyve sinekleri şişesini yedi saniye boyunca karbondioksit kullanarak anestezi yapın. Meyve sineklerini tartım kağıdına dökün ve sinekleri rastgele bir kimlikle etiketlenmiş katranlı bir şişeye sokmak için kağıdı bir huni olarak kullanın.Petri kabı kapağını meyve sinekleri şişesinin üzerine yerleştirdikten sonra, teraziye yerleştirin. Toplam ağırlığı ve numune sayısını puan tablosuna kaydedin.
Sineklerin kaçmasını önlemek için hemen meyve sineklerinin şişesini, kapağı hala üstte olacak şekilde bir buz tepsisine yerleştirin. Şırıngayı en az konsantre dozdan başlayarak uygun insektisit konsantrasyonu ile yükleyin ve her organizma grubuyla en konsantre doza doğru çalışın. Numuneleri, buz üzerindeki bir tepsinin üzerine yerleştirilmiş tartım kağıdına aktarın.
Dozajlama için her bir numuneye kolay erişim sağlamak için temiz bir böcek ilacı içermeyen boya fırçası veya pamuklu çubuk kullanarak birbirine yakın olan örnekleri ayırın. Şırıngayı kullanarak, sivrisinekler için ventral toraks ve karın bölgesine ve meyve sinekleri için dorsuma bir damla insektisit çözeltisi uygulayın. Örnekleri hemen etiketli plastik kaba geri dökün.
Bardağı ağ ve lastik bantla örtün. Bu işlemde herhangi bir örneğin öldürülmesi, hasar görmesi veya kaçması durumunda kupadaki güncelleştirilmiş bir örnek sayımına dikkat edin. Tamamlanan bardağı bir tutma tepsisine yerleştirin.
İlk fincan için, dozajlamanın tamamlandığı zamanı kaydedin. Tüm örnekler uygun insektisit konsantrasyonları ile dozlanana kadar her fincan için dozajlamayı tekrarlayın ve tüm örneklerin dozlandığı bitiş zamanını kaydedin. Islak bir pamuk topu aracılığıyla her bardağa% 10 sakkaroz çözeltisi sağlayın ve sivrisinekleri ve meyve sineklerini istenen sıcaklık ve nemde saklayın.
İnsektisit maruziyetinin başlamasından 24 saat sonra örnek mortalitesini kaydedin. Sivrisinekleri, DSÖ tarafından tanımlandığı gibi, hareketsiz veya ataksiklerse uçabiliyorlarsa ve kendilerini dik ve ölü tutabiliyorlarsa canlı olarak sınıflandırın. Meyve sinekleri için aynı ölüm oranını izleyin.
Biyotahlil yapıldıktan sonra, erkek ve dişi Aedes aegypti için Rockefeller ve IICC genotipi olan iki suşu içeren doz yanıtı verileri elde edildi. Rockefeller ve IICC için kütle göreli medyan ölümcül doz, miligram başına sırasıyla 0.008 ve 0.336 nanogram idi. Sonuçlar, her bir suş içindeki dişi ve erkek sivrisineklerin doz yanıt eğrileri arasında hiçbir fark olmadığını ortaya koymuştur.
Bu nedenle, medyan ölümcül doz değerlerini hesaplamak için her iki cinsiyetten gelen veriler birleştirildi. Bu iki suşun medyan ölümcül dozu için% 95 güven aralıkları örtüşmediğinden, bu değerler anlamlı olarak farklı kabul edildi. Ek olarak, direnç oranları hesaplanırken, IICC suşu duyarlı Rockefeller suşundan 40 kat daha dirençliydi.
Meyve sineği, Drosophila melanogaster, Canton-S suşu için doz yanıtı verileri de elde edildi ve kütle-görecelileştirilmiş medyan ölümcül dozun miligram başına 0.213 nanogram olduğu bulundu. Tutarlılık, özellikle insektisitin depolanması ve uygulanması ve mortalitenin değerlendirilmesi sırasında kritik öneme sahiptir. Ayrıca, böcek ilacı tarafından indüklenmeyen zarar veya ölümden kaçınmak için numuneyi tutarken dikkatli olun.
Bu yöntemle, artık bir sivrisinek popülasyonunun teknik direncini ve çevresel koşulların direnci nasıl etkilediğini veya teknik direncin pratik direnci nasıl öngördüğünü doğru bir şekilde belirleyebiliriz.
