نهج الزرع الرجعي لوضع قسطرة غسيل الكلى البريتوني في الفئران

تعاني البروتوكولات السابقة لنماذج الفئران لغسيل الكلى البريتوني من قيود تحول دون استخدامها على المدى الطويل. يتم تناول هذه القيود ، مثل لف القسطرة والإزاحة ، في هذه الدراسة. تمنع هذه التقنية خلل قسطرة PD لأسباب ميكانيكية ، مما يسمح باستخدامها لفترة أطول لدراسة الأمراض ، مثل التليف البريتوني.

ستوفر هذه التقنية نموذجا أفضل للفأر لفحص التسبب الجزيئي والعلاجات الجديدة للتليف البريتوني. أحد القيود الرئيسية لمرض باركنسون لدى البشر. PD هو الدعامة الأساسية للعلاج بالبدائل الكلوية في مرضى الأطفال الذين يعانون من ESKD.

سيوفر هذا النموذج المحسن سرير اختبار أفضل للتحقيق في جميع المشكلات المتعلقة بمرض باركنسون لدى البشر. جيل نموذج حيواني لديه منحنى التعلم. سيساعد هذا الفيديو خطوة بخطوة الفرد في تنفيذ هذه التقنية لإنشاء نموذج دائم لغسيل الكلى البريتوني بنجاح.

للبدء ، ضع ماوس C57 الأسود / 6J المخدر بالكامل من ثمانية إلى 12 أسبوعا في وضع جانبي أيسر. بعد حلق الفأر كما هو محدد في المخطوطة ، قم بتطهير المنطقة الجراحية عن طريق تعريض الجناح الأيمن للماوس لبطانية التدفئة. ثم ضع الستارة الجراحية المعقمة فوق الماوس.

قم بتعيين جيب منفذ الوصول سنتيمترا واحدا فوق ذيل الماوس. امسك جزء التثبيت بالسبابة غير المهيمنة وإصبع الإبهام فوق المنطقة المخصصة بالقرب من الذيل. ضع القسطرة فوق الجلد ، وقم بتقدير مكان إدخال أنبوب القسطرة داخل تجويف البطن.

ثم حدد المكان المخصص لإدخال الأنبوب ، مع احترام الحد الأدنى من الانحناء للأنبوب بالقرب من خط الوسط الأمامي. قم بثقب ثقب جانبي فوق إطار قسم الخزان باستخدام علامة أذن الماوس. قم بعمل شق أفقي بعرض سنتيمتر واحد من الجلد على ارتفاع سنتيمتر واحد فوق الذيل.

ثم قم بتشريح المستوى تحت الجلد بصراحة من الطبقة العضلية الأساسية لعمل كيس لوضع القسطرة لضمان وجود منفذ التثبيت بحرية في جيب المنفذ المثالي. بعد خياطة 3-0 من الفتحة الجانبية المخصصة. قم بإصلاح منفذ الوصول إلى السرير العضلي عن طريق شد الخيط الذي تم تمريره ، مع الحفاظ على مسار الأنبوب cephalad.

قم بعمل شق بسنتيمتر واحد فوق المنطقة المحددة رسميا بالقرب من خط الوسط. ضع خيطا محفظيا فضفاضا مع خياطة مستديرة قابلة للامتصاص 4-0 حول عضلة جدار البطن المقطوعة. قم بعمل شق بسنتيمتر واحد فوق الطبقة العضلية بالقرب من خط الوسط الأيمن وقم بتمرير اللباد القريب للقسطرة داخل الشق.

مرر أنبوب القسطرة عبر القناة المعدة. شد خياطة خيط المحفظة المحضرة حول الأنبوب ، مع الحفاظ على اللباد الثاني خارج خيط المحفظة فوق الطبقة العضلية ، وأغلق الجلد بخيوط قابلة للامتصاص 3-0. تأكد من أن القسطرة الموضوعة تعمل.

تحقق من الوظيفة باستخدام حقنة ملليلتر واحد متصلة بإبرة هوبر المحددة للمنفذ. حقن محلول ملحي عادي في منفذ التثبيت. بعد التأكد من التدفق السلس مع عدم التسامح مطلقا مع المقاومة ، أغلق شقوق الجلد حول خزان المنفذ بخيوط قابلة للامتصاص 3-0.

أدخل المنفذ بإبرة هوبر وحقن 100 ميكرولتر من المحلول الملحي العادي في المنفذ لتأكيد مسار براءة الاختراع. ثم حقن 200 ميكرولتر من عديد السكاريد الدهني ، تليها 100 ميكرولتر من المياه المالحة للري الأنبوبي وتأكد من عدم وجود مقاومة. بعد سبعة أيام من حقن LPS وأسبوعين من زرع القسطرة ، خطط للخزعة البريتونية.

بعد التأكد من التخدير الناجح ، قم بعمل شق في خط الوسط من المثانة إلى شبه الخنجري. ثم perfuse الطائرة تحت اللفافة مع PBS الباردة. تأكد من تشريح الطائرة بالكامل دون الإخلال بسلامة الصفاق.

أظهر تحليل المقاطع الملطخة بالهيماتوكسيلين والإيوزين زيادة كبيرة في المصفوفة خارج الخلية ، أو ECM ، في الفضاء تحت الصفاق. كان متوسط ECM في الفضاء تحت الصفاقي للفئران الضابطة نصف ذلك في الفئران المعرضة LPS. يكتشف تلطيخ Trichrome من Masson التليف ، ويتم قياسه على أنه كثافة شدة طبيعية لمساحة السطح.

تم تحليل الأوعية الدموية المتغيرة وتوسيع الفضاء تحت الصفاق باستخدام علامة الخلايا البطانية CD31 ، وقياسها ككثافة متكاملة في صور المجال عالي الطاقة المختارة عشوائيا. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، أظهرت الفئران التي يسببها LPS زيادة بمقدار ثلاثة أضعاف في التليف تحت الصفاق ، وزيادة ما يقرب من ثمانية إلى تسعة أضعاف في الأوعية الدموية ، وزيادة مضاعفة في الفضاء تحت الصفاق ، تم وضع علامة عليها على أنها SP. ضع القسطرة فوق الجلد وحدد نقطة إدخال القسطرة ، مع تجنب ثني الأنبوب.

يجب أن يكون الإدخال بالقرب من خط الوسط الداخلي. إن توفير طريقة وضع قسطرة الفئران PD الأكثر متانة سيسمح للباحثين بتصميم وتنفيذ تجارب طويلة المدى لاستكشاف واستهداف فشل الغشاء البريتوني.