마우스의 복막 투석 카테터 배치를 위한 역행 이식 접근법

복막 투석의 마우스 모델에 대한 이전 프로토콜은 장기간 사용을 배제하는 한계가 있습니다. 카테터 코일링 및 이탈과 같은 이러한 제한 사항은 이 연구에서 다룹니다. 이 기술은 기계적 이유로 PD 카테터 오작동을 방지하여 복막 섬유증과 같은 병리를 연구하는 데 더 오랜 시간 동안 사용할 수 있습니다.

이 기술은 복막 섬유증의 분자 병인 및 새로운 치료법을 조사하기 위한 더 나은 마우스 모델을 제공할 것이다. 인간에서 PD의 주요 한계. PD는 ESKD 소아 환자에서 신장 대체 요법의 주류입니다.

이 최적화된 모델은 인간의 PD와 관련된 모든 문제를 조사할 수 있는 더 나은 테스트 베드를 제공합니다. 동물 모델의 생성에는 학습 곡선이 있습니다. 이 단계별 비디오는 개인이 복막 투석을 위한 내구성 있는 모델을 성공적으로 생성하기 위해 이 기술을 구현하는 데 도움이 됩니다.

시작하기 위해 완전히 마취된 8 내지 12주령의 C57 black/6J 마우스를 좌측 측면 위치에 둔다. 원고에 명시된대로 마우스를 면도 한 후 마우스의 오른쪽 측면을 가열 담요에 노출시켜 수술 부위를 소독하십시오. 그런 다음 멸균 수술용 드레이프를 마우스 위에 놓습니다.

액세스 포트 포켓을 마우스 꼬리 위 1cm 위에 할당합니다. 꼬리 근처의 지정된 영역 위에 비 지배적 인 색인과 엄지 손가락으로 설치 세그먼트를 잡습니다. 카테터를 피부 위에 놓고 복강 내에서 카테터의 튜브 삽입 위치를 추정합니다.

그런 다음 전방 정중선 근처에서 튜브의 최소 굽힘을 존중하여 튜브 삽입을 위해 지정된 위치를 표시하십시오. 마우스 귀 태거로 저장소 섹션의 프레임 위에 측면 구멍을 뚫습니다. 꼬리 위 1cm 너비의 수평 1cm 피부 절개를하십시오.

그런 다음 밑에있는 근육층에서 피하 평면을 무뚝뚝하게 해부하여 설치 포트가 이상적인 포트 포켓에 자유롭게 상주하도록 카테터 배치를위한 파우치를 만듭니다. 맞춤형 측면 구멍에서 3-0 봉합사를 지나갑니다. 통과 된 봉합사를 조여 접근 포트를 근육 침대에 고정하고 튜브 코스 cephalad를 유지하십시오.

정중선 근처의 공식적으로 표시된 부위에 1cm 절개를하십시오. 절개된 복벽 근육 주위에 4-0 원형 흡수성 봉합사가 있는 느슨한 지갑 끈 봉합사를 놓습니다. 오른쪽 정중선에 가까운 근육층을 1cm 절개하고 절개 부위 내부의 카테터의 근위 펠트를 통과시킵니다.

카테터 튜브를 준비된 관에 통과시킵니다. 준비된 지갑 끈 봉합사를 튜브 주위에 조이고 두 번째 펠트를 지갑 끈 바깥쪽에 근육층 위로 유지하고 3-0 흡수성 봉합사로 피부를 닫습니다. 배치된 카테터가 작동하는지 확인하십시오.

포트의 특정 Huber 바늘에 부착 된 1 밀리리터 주사기로 기능을 확인하십시오. 설치 포트에 생리 식염수를 주입하십시오. 저항에 대한 제로 내성으로 부드러운 흐름을 확인한 후 3-0 흡수성 봉합사로 포트 저장소 주변의 피부 절개를 닫습니다.

Huber 바늘로 포트에 들어가 100 마이크로 리터의 일반 식염수를 포트에 주입하여 특허 과정을 확인합니다. 그런 다음 200 마이크로 리터의 지질 다당류를 주입 한 다음 튜브 관개 용 식염수 100 마이크로 리터를 주입하고 저항이 없는지 확인하십시오. 7 일간의 LPS 주사와 2 주간의 카테터 이식 후 복막 생검을 계획하십시오.

성공적인 마취를 확인한 후 방광에서 sub xiphoid까지 정중선 피부 절개를하십시오. 그런 다음 차가운 PBS로 근막 하 평면을 관류하십시오. 복막의 완전성을 방해하지 않고 비행기가 완전히 해부되었는지 확인하십시오.

헤마톡실린 및 에오신 염색된 절편의 분석은 복강하 공간에서 세포외 기질 또는 ECM의 실질적인 증가를 보여주었다. 대조군 마우스의 복막하 공간에서의 평균 ECM은 LPS 노출 마우스에서의 ECM의 절반이었다. Masson의 Trichrome 염색은 표면적으로 정규화 된 강도 밀도로 측정 된 섬유증을 감지합니다.

복막 하 공간의 변경된 혈관성 및 확대는 내피 세포 마커 CD31을 사용하여 분석되었으며 무작위로 선택된 고출력 필드 이미지에서 통합 밀도로 측정되었습니다. 대조군과 비교하여, LPS 유도 마우스는 복강 하 섬유증에서 3 배 증가, 혈관의 약 8 내지 9 배 증가, SP로 표시된 복강 하 공간의 2 배 증가가 관찰되었다. 카테터를 피부 위에 놓고 튜브가 구부러지지 않도록 카테터 삽입 지점을 표시하십시오.

삽입은 내부 정중선 근처에 있어야합니다. 보다 내구성있는 뮤린 PD 카테터 배치 방법을 제공하면 연구원이 복막막 파괴를 조사하고 표적화하기위한 장기 실험을 설계하고 실행할 수 있습니다.