نحدد التقنيات اللازمة لنموذج زرع الجلد xenograft البشري ، وهو أداة مهمة للتلاعب بالمسارات المناعية وغير المناعية في الأنسجة البشرية في الجسم الحي. تلخص هذه التقنية فسيولوجيا الجلد البشري بشكل أفضل من الطرق المختبرية ، مما يسمح بالتلاعب التجريبي قبل السريري في الجسم الحي. يمكن استخدام عمليات زرع الجلد Xenograft للاختبار قبل السريري للمركبات التي تستهدف التهاب الجلد البشري في الجسم الحي.
يمكن أن يكون تضميد الفئران أمرا صعبا بشكل خاص ، لذلك ننصح بممارسة عملية الضمادات على الفئران المخدرة السليمة قبل إجراء العمليات الجراحية. للبدء ، استعد لجلد عينة جلد الإنسان في غطاء زراعة الأنسجة المعقم بالضغط السلبي على لوح تشريح معقم. ضع عينة الجلد بحيث يكون جانب البشرة لأعلى على لوحة التشريح وامسح البشرة بوسادة تحضير كحول معقمة متبوعة ببرنامج تلفزيوني.
الآن استخدم دبوس تشريح T مقاس 1.5 بوصة لإصلاح الحافة الأقرب للجلد. ثم جلدي عينة الجلد بسمك 400 ميكرومتر وتطبيق ضغط ثابت أثناء القطع للأمام بزاوية 30 إلى 45 درجة. ضع شاشا معقما منقوعا في PBS معقم في قاع طبق بتري وضع الجلد مع جانب البشرة لأعلى على الشاش الرطب.
قم بإغلاق وتغطية حواف اللوحة بغشاء مانع للتسرب شبه شفاف لضمان عدم تلوث العينة وتخزين العينة عند أربع درجات مئوية قبل التطعيم. قم بإعداد الأدوات المعقمة والمحطة الجراحية للتطعيم واستخدم المناشف الورقية المعقمة كأسطح معقمة لوضع الأدوات والماوس. بعد تحريض التخدير ، انقل الماوس إلى وسادة تدفئة أو مصدر حرارة آخر وقم بإدارة مرهم العيون عن طريق وضع قطرة صغيرة من المرهم على العين بإصبع قفاز.
قرصة الجلد وحقن المسكنات تحت الجلد بزاوية موازية للجسم. بعد رفع الماوس من الذيل ، فضح البطن وحقن 100 ميكروغرام لكل 100 ميكرولتر من مضاد Gr1 داخل الصفاق بزاوية 30 درجة باستخدام حقنة الأنسولين ملليلتر واحد. ثم استخدم كليبرز كهربائي آمن للحيوانات لحلق الأجزاء الوسطى والعلوية من الجانب الظهري للماوس.
بعد إزالة جميع الشعر ، ضع كمية وفيرة من مرهم إزالة الشعر على الجلد المحلوق. انتظر لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة ، ثم امسح مرهم إزالة الشعر تماما بمنشفة ورقية و PBS. بعد نقل الماوس إلى المحطة الجراحية ، قم بتعقيم المنطقة الجراحية ووضع غلاف بلاستيكي معقم فوق الماوس.
قطع نافذة في البلاستيك أكبر قليلا من حجم المنطقة المراد تطعيمها. ثبت جلد المتبرع بإحكام في مكانه باستخدام الملقط الخلفي وقطع جزء مستطيل الشكل 10 × 10 ملليمتر من جلد المتبرع ليتم تطعيمه جنبا إلى جنب مع الملقط بمشرط. اسحب الجلد بعيدا عن الجسم لتجنب القطع بعمق في اللفافة.
لإنشاء سرير كسب غير مشروع ، قم بقص منطقة مستطيلة من جلد الفأر تتوافق مع حجم قطعة جلد المتبرع. ثم ضع قطعة جلد المتبرع بحيث يكون جانب البشرة لأعلى على سرير الكسب غير المشروع المجهز. باستخدام الجزء الخلفي من الملقط ، تعامل مع الجلد الذي ينزلق ذهابا وإيابا حتى يصبح جلد المتبرع مسطحا تماما على سرير الكسب غير المشروع.
أضف قطرات لاصقة أنسجة الغراء الجراحي حيث يلتقي جلد المتبرع بجلد الفأر وأمسك جلد الفأر والمتبرع معا بالملقط لمدة ثانية إلى ثانيتين حتى يلتصق الغراء بالأنسجة. أغلق حافة الكسب غير المشروع تماما واترك الغراء يجف تماما. بعد ذلك ، قم بقطع شاش الفازلين الكبير بما يكفي لتغطية منطقة الكسب غير المشروع بالكامل.
قم بتغطية الكسب غير المشروع بشاش الفازلين واضغط برفق على الشاش على الجلد باستخدام الملقط. قم بقص شريط من ضمادة فيلم شفاف بالطول بحيث يكون العرض كبيرا بما يكفي لتغطية جرح الماوس. اضغط بقوة على ضمادة الفيلم الشفاف مع الجانب اللاصق لأسفل فوق الشاش.
لف الماوس بسرعة للف الضمادة بالكامل حول الجذع ، وتأكد من ملاءمتها بإحكام دون إعاقة التنفس وأن جميع الأطراف حرة للحركة. بعد وضع الماوس في قفص الاسترداد ، راقبه حتى يصبح في حالة تأهب ويتحرك. توفير مصدر حرارة على جزء من القفص لمدة 15 دقيقة على الأقل بعد الشفاء.
أظهر تحليل الطعوم بعد 10 إلى 21 يوما من الزرع أن الكسب غير المشروع ظل ملتصقا حول الحواف حيث يلتقي جلد المتبرع بجلد الفأر وظل الكسب غير المشروع أكثر سمكا وأكثر التهابا من جلد الإنسان السليم. كشف التحليل عن طريق قياس التدفق الخلوي عن الوجود المستمر للخلايا المناعية البشرية داخل معظم الطعوم ، لكن الأعداد تباينت بين الطعوم الأجنبية. حافظ الكسب غير المشروع الناجح على الخلايا المناعية البشرية.
ومع ذلك ، على الرغم من استمرار الالتزام وبقاء الأنسجة المانحة ، فإن الطعوم التي فشلت في الحفاظ على الخلايا المناعية البشرية تعتبر غير ناجحة. أظهر تحليل الهيماتوكسيلين وأقسام الكسب غير المشروع الملطخة بالهيماتوكسيلين والإيوزين بعد 35 يوما بشرة سليمة والأدمة خلوية معتدلة تتكون من خلايا ليفية بيضاوية ممتلئة الجسم مع سيتوبلازم مخلوي شاحب وخلايا ليمفاوية متناثرة. أظهر تحليل الكسب غير المشروع بعد 50 يوما نتائج مماثلة مع البشرة السليمة والأدمة التي تحتوي على الخلايا الليفية البيضاوية وترسب المصفوفة خارج الخلية المحسن قليلا.
تعتمد الطعوم الخارجية الجلدية الناجحة على التحضير المناسب لعينات الجلد ، وقمع الاستجابات المناعية للعدلات في الفئران عن طريق الإدارة المضادة ل Gr1 ، والالتزام بطرق جراحة القوارض المعقمة ، وضمادات آمنة للفئران. يسمح نموذج زراعة الجلد بطعم الطعم الأجنبي البشري للباحثين بدراسة الاستجابات المناعية البشرية في العضو السليم في الجسم الحي ، مما يوفر وسيلة جديدة للبحث الانتقالي.
