هذا البروتوكول مهم لأنه يمكن استخدامه لإنشاء xenografts العضلات الهيكل العظمي البشري، والتي يمكن استخدامها لنموذج أمراض العضلات وإجراء الاختبارات العلاجية قبل الفحص. هذا النموذج xenograft يسمح للباحثين لدراسة العضلات البشرية في الجسم الحي لفهم أفضل بيولوجيا خلايا العضلات البشرية وتطوير نماذج جديدة لأمراض العضلات النادرة أو المكتسبة. بعد الحصول على خزعة العضلات البشرية، ضع العينة في طبق بيتري 100 في 15 ملليمتر يحتوي على العضلات المتوسطة، واستخدم مجهر ستيريو ومقص جراحي لإزالة أي فزاعة متبقية أو أنسجة دهنية.
تشريح خزعة العضلات إلى ما يقرب من سبعة في ثلاثة في ثلاثة- قطعة ملليمتر، مع الحرص على أن يتم ترتيب الألياف طوليا داخل العينة. بعد ذلك، نقل طبق بيتري التي تحتوي على العضلات تشريح على الجليد، ووضع الاصطناعية، والخياطة غير قابلة للامتصاص في طبق بيتري 100 في 15 ملليمتر من الإيثانول 70٪. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القدم في ثمانية إلى 12 أسبوعًا من العمر ، ماوس NOD-Rag-gamma المُجرّد ، ضع مرهمًا على عيون الحيوان المناعي ، واستخدم أداة تشذيب لإزالة الشعر المُبالغ في الزعامة الأمامية من الكاحل إلى الركبة.
ثم، تطبيق كريم إزالة الشعر على الجلد المكشوف لمدة دقيقة واحدة قبل تطهير موقع الجراحة مع محلول بوديوني اليود والإيثانول 70٪. لالرقاق الأنسجة البشرية، الشريط الأول أسفل ساق الماوس، وجعل شق مستقيم على الأمامي tibialis التي تنشأ في الأوتار القاصي وإنهاء تحت الركبة. استخدم تشريحًا حادًا لفصل الجلد عن أنسجة العضلات ، واستخدم المقص لإجراء شق أقل من 0.5 ملليمتر من خلال ظهارة العضلات الأمامية للثنية ، بدءًا من الوتر وانتهاءً بالركبة.
بعد قطع وتر القزحية من الأمامي tibialis، فهم وتر مع ملقط قزحية العين، وسحب العضلات حتى نحو الركبة. المقبل، وقطع وتر القاصي من الاكستينور لونجوس، وسحب الاكسونتوروم extensorum longus حتى نحو الركبة. مرة واحدة في وتر قريب من العضلات لونجوس peroneus مرئية، وإزالة المزيلة digitorum لونجوس وتيبيليس الأمامي مع مقص.
استخدام مسح الجراحية الرطب مع برنامج تلفزيوني لتطبيق ضغط طفيف حتى يتم تحقيق hemostasis، والخيط خياطة من خلال وتر لونجوس peroneus القريبة، وترك ما يقرب من 1.5 بوصة قطعة من الخيط على جانبي الوتر. جعل النصف الأول من عقدة مربعة جراحية من يدين دون تشديد لتشكيل دائرة، ووضع xenograft في الدائرة، وتشديد حلقة لتأمين الأنسجة الكسب غير المشروع. استكمال النصف الآخر من عقدة مربع لخياطة xenograft إلى وتر قريب من لونجوس peroneus، والخيط من خلال وتر لونجوس peroneus لتكرار تقنية عقدة مربع في وتر القاصي.
عندما تم تأمين طرفي الكسب غير المشروع ، اسحب الجلد فوق العضلات xenografted ، وختم الشق مع الغراء الجراحي ، ووضع اثنين إلى ثلاثة المواد الغذائية الجراحية على الغراء. ثم ضع الفأرة في قفص نظيف على وسادة ساخنة مع مراقبة حتى إعادة شغل كامل. بعد أربعة إلى ستة أشهر من الجراحة، ضع كوباً مغطى يحتوي على 200 ملليلتر من 2 ميثيلبوتان في صندوق من الجليد الجاف لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل حصاد زينوغرات.
عندما يكون 2-الميثيلبوتان قد بردت, تأكيد عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القدم, وإزالة الشعر الإفراط في التسيبليس الأمامي من الكاحل إلى الركبة مع التشذيب وكريم مزيل. وينبغي أن يلاحظ الغرز عقد xenograft في مكان من خلال الجلد. تأمين الساق مع الشريط، واستخدام مقص والقزحية ملقط لفتح الجلد على xenograft حتى يتم الكشف عن كل من الغرز.
استخدام مشرط لقطع بين xenograft و الساق لتحرير جانب واحد من xenograft قبل قطع بين العضلات لونجوس peroneus والعضلات المعدة. قطع تحت خياطة القاصي ومن خلال وتر القزح من لونجوس peroneus، واستخدام ملقط قزحية لفهم وصرف خياطة نحو الركبة أثناء استخدام مقص لقطع xenograft بعيدا عن الأنسجة العضلية الكامنة. ثم، استخدام مقص لقطع فوق خياطة قريبة لإزالة xenograft و peroneus لونجوس، ووضع العينة المحصودة على قطعة صغيرة من الورق المقوى.
دبوس الأنسجة أقرب إلى الغرز ممكن في حين تمتد بلطف العضلات لضمان أن الاتجاه الألياف سيتم الحفاظ عليها أثناء عملية تجميد المفاجئة. عندما تكون الدبابيس في مكان آمن، حرك العضلات حتى دبابيس حتى الأنسجة تقع فقط فوق الورق المقوى، ومفاجئة تجميد xenograft في ما قبل تبريد 2-ميثيلبوتان للتخزين ناقص 80 درجة مئوية. Xenograft ناجحة يدل على تجديد قوي من myofibers الإنسان كما تم تحديدها مع الأجسام المضادة البشرية الخاصة.
الايوسين الجنينية الإيجابية تلطيخ داخل نسبة من myofibers يشير إلى أن عملية التجديد لا تزال مستمرة. في المقابل، قد يؤدي ضعف التقنية الجراحية أو عينة غير كافية إلى تجديد ضعيف للألياف العضلية. Xenografts التي أجريت من مريض تشخيص اعتلال عضلي التهابي مجهول السبب عرض أعداد معتدلة من myofibers الإنسان المجددة في مجموعات أربعة وستة أشهر، والميوسين الجنينية تلطيخ لا تزال مستمرة في ستة أشهر.
الخلايا الالتهابية موجودة أيضا داخل xenograft، كما لوحظ من قبل H وE تلطيخ. أحجام myofiber الفردية متشابهة بين أربعة وستة أشهر في اعتلال عضلي التهابي مجهول السبب xenografts. ألياف نادرة تظهر منطقة مقطعية أكبر من 3,500 ميكرومتر مربع لوحظت داخل xenografts ولكن ليس في الخزعات اعتلال عضلي مجهول السبب, مشيرا إلى أن بعض myofibers في xenografts يمكن أن تتجدد إلى منطقة مقطعية مماثلة في الحجم إلى myofibers صحية.
أهم أجزاء هذا الإجراء هي تحديد جميع الأوتار في الكاحل بعد إجراء الشق الأولي وقطع بنجاح من خلال epimysium. يمكن تقييم الكفاءة الوظيفية للxenografts عن طريق عزل الأنزيمية myofibers واحد واختبار عابري الكالسيوم أو عن طريق إجراء القياسات القسري أثار بعد التحفيز الكهربائي.
