طريقة بصرية حساسة للكشف عن البكتيريا المنتجة لكبريتيد الهيدروجين

يمكن للبكتيريا المنتجة لكبريتيد الهيدروجين استخدام الأحماض الأمينية والبروتينات المحتوية على الكبريت لإنتاج كبريتيد الهيدروجين. هنا ، أنشأنا طريقة حساسة وبسيطة للكشف عن كبريتيد الهيدروجين في البكتيريا. هذه الطريقة هي نسخة معدلة من ترسيب كبريتيد البزموت الذي استخدم 96 لوحة معايرة شفافة جيدا.

تم دمج ثقافة البكتيريا مع محلول البزموت الذي يحتوي على L-cysteine واستزرعت لمدة 20 دقيقة ، وفي النهاية لوحظ راسب أسود. سيتم توضيح الإجراءات من قبل Wei Zhu ، مساعد باحث من مختبرنا. ابدأ بنقل المستعمرات البكتيرية من صفيحة أجار لوريا بيرتاني أو LB إلى 100 ملليلتر من وسط LB ، واستزراعها عند 37 درجة مئوية لمدة 12 إلى 16 ساعة حتى يصل تركيز البكتيريا إلى حوالي مليار خلية لكل ملليلتر.

نقل مستعمرة بكتيرية واحدة من Fusobacterium nucleatum و Proteus vulgaris من مرق الصويا Trypticase أو ألواح أجار TSB إلى 100 ملليلتر من وسط TSB ، وزرعها عند 37 درجة مئوية لاهوائيا لمدة 24 ساعة حتى يصبح تركيز البكتيريا حوالي 1 مليار خلية لكل ملليلتر. امزج 100 ميكرولتر من المستنبتة البكتيرية مع 100 ميكرولتر من محلول البزموت المحضر حديثا في ألواح العيار الدقيقة المكونة من 96 بئرا ، واستزرع لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية. لكل سلالة بكتيرية ، قم بإجراء التحليل في ثلاث نسخ.

بعد 20 دقيقة ، تحقق من تغيير اللون. إذا تغير لون المحلول من الأصفر الفاتح إلى الأسود ، فهذا يشير إلى أن البكتيريا قادرة على إنتاج كبريتيد الهيدروجين أو H2S. كرر هذا القياس ثلاث مرات.

تحديد حساسية الطريقة باستخدام تركيزات مختلفة من هيدرو كبريتيد الصوديوم الممزوج بمحلول كبريتيد البزموت. وأخيرا، أوجد وجود أيونات ثنائي الكبريتيد وأيونات الكبريتيد من خلال ملاحظة تكوين راسب كبريتيد البزموت الأسود. سجل لون الآبار باستخدام مقياس مرئي من عدم إنتاج اللون إلى إنتاج اللون الأسود الداكن.

تم فحص أداء اختبار كبريتيد الهيدروجين باستخدام مزارع نقية من سلالات بكتيرية مختارة. أشارت النتائج إلى أن السالمونيلا نظيرة التيفية B ، Fusobacterium nucleatum ، Enterococcus faecalis ، Pseudomonas aeruginosa ، و Proteus vulgaris يمكن أن تنتج كبريتيد الهيدروجين مع راسب كبريتيد البزموت الأسود. في حين أن السالمونيلا نظيرة التيفية A والمكورات العنقودية الذهبية و Aeromonas hydrophila و Klebsiella pneumoniae فشلت في إظهار أي ترسب أسود.

الميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي أنها سهلة التكرار ولا تتطلب معدات متخصصة.