وأيد هذا العمل من خلال توصيف NSF المنح RUI MCB - 0950372 الجزيئية يحق للعنكبوت الأرملة السوداء الحرائر.

1. التخدير العنكبوت والعزلة من البطن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل العنكبوت من وعاء زجاجي داخل صندوق من الورق المقوى مبطنة بالبلاستيك (الشكل 1A). نحن عادة جمع العناكب من المرائب ، الحطب أو الشجيرات وإيوائهم في مختبر في وعاء زجاجي. لأن العنكبوت لا يمكن أن يتسلق بطانة من البلاستيك ، فإنه يوفر وسيلة فعالة لنقل العنكبوت من وعاء زجاجي أو القهوة يمكن في قارورة صغيرة لأغراض التخدير. أثناء التعامل مع العنكبوت في هذه النقطة ، يجب أن تكون على ارتداء اثنين من أزواج من القفازات المطاطية أو قفازات البستنة لأغراض السلامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حين أن العنكبوت في المربع مبطنة بالبلاستيك ، والنهج العنكبوت من المؤخر ، والسماح للعنكبوت الشريحة في قنينة بلاستيكية الثقافة. بعد عنكبوت يدخل القارورة ، ومكان على الفور المكونات عبر أعلى (1B الشكل). ونحن نوصي باستخدام قارورة أن ما يقرب من 101.6 ملم × 31.75 ملم (الطول × D). هذا يقلل من كمية غاز ثاني أكسيد الكربون اللازمة لخطوة التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير العنكبوت من خلال إدخال غاز ثاني أكسيد الكربون في 50-10 جنيه لكل بوصة مربعة لمدة 10 دقيقة (الشكل 1C). وهذه الكمية من الغاز تدق فقط من أصل نحو العنكبوت 5 دقائق ، وذلك بعد التخدير يجب الشروع فورا في خطوات 1،4-1،5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان العنكبوت تخدير في طبق تشريح الصغيرة واستخدام ملقط لوضع ما يصل العنكبوت الجانب الظهري (الساعة الرملية الحمراء أسفل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقطع عنيقة (القصبة الضيقة التي تربط cephalothorax والبطن) للافراج عن بطنه من بقية العنكبوت (1D الشكل). cephalothorax تخزين في الثلاجة ليلة في صحن بتري وبعد تجاهل المجمدة في اليوم التالي. كن حذرا عند نقل cephalothorax مثل الأنياب للعنكبوت موجودة على هذا الجزء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط البطن للمواد Sylgard في صحن صغير به تشريح الحشرات دبوس واحد. إدراج دبوس الحشرات من خلال ثقب مصنوعة من قطع ساق (الشكل 1E). ويمكن بسهولة أن يكون هذا على النحو المحدد في الموقع حيث السائل يخرج من لقطة للساق. تأكد من مغزال (الطرف المقابل من ساق) هو التوجه نحو القاع (أقرب إليك). </li></ol> 2. إزالة الهيكل الخارجي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق الأولى من خلال الهيكل الخارجي باستخدام زوج من microscissors ، بدءا من ثقب في لقطة ساق. قطع أفقيا حتى يتم الوصول إلى الجانب الظهري على كلا الجانبين (الشكل 1F). باستخدام زوج من الملقط ، قشر يعود الجزء الأمامي الهيكل الخارجي وادخال دبوس الثانية في هذا الموقع. بعد إدخال رقم التعريف الشخصي PIN الثاني ، بدوره علبة تشريح caudally (90 درجة زاوية) من التخفيضات الجانبي الأولي ويستمر القطع حتى يتم الوصول إلى المغازل (الشكل 1G). وسوف يكون هذا شق عمودي أو عمودي لقطع الجانبي الأولي. لا قطع طريق المغازل عندما يتم إجراء شق عمودي (النسبية الخلفي لالرملية ولها مظهر التعميم). وفشل لادخال دبوس second النتيجة في البطن الغزل عندما يتم تنفيذ الشقوق الرأسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغرق في تشريح البطن حل العازلة (كلوريد الصوديوم 0.1 M ، السيترات الصوديوم 0.015 M ، 0.1 ٪ ثنائي إثيل Pyrocarbonate). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قشر الباقين ابتداء من الهيكل الخارجي مرة أخرى من شق الأولية الجانبية. عندما يتم الانتهاء من ذلك ، ينبغي أن الأنسجة الدهنية تكون مرئية بشكل واضح (الشكل 1H). </li></ol> 3. العزلة في الغدد المنتجة للحرير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ باستخدام الملقط إغاظة بعيدا طبقة الدهون (الشكل 1H). وسوف يكون من الدهون إلى ظهور اللون الأبيض المصفر. تستمر حتى تتم إزالة معظم الدهون والغدد الحريرية مرئية بوضوح. الغدة tubuliform يتكون من ثلاثة أزواج من أنابيب اسطوانية طويلة جدا التي هي وفرة في تجويف البطن. وأمبولي الشكل الكبرى ، التي وجدت في أزواج ، هو كبير أمبولة الهلال ، مع شكل ذيل طويل ملتف القاصي والداني أن القناة النقصان في العرض وهي تقترب المغازل العنكبوت. وأمبولي الشكل بسيطة هي مشابهة جدا في التشكل على أمبولي الشكل الرئيسي ، ولكنه أصغر بكثير. الغدة سوطي الشكل ، وتحدث أيضا في أزواج ، ومستديرة ، ومتعدد الفصيصات مع أسطوانية التعرج الذي يمتد أسفل القناة تجاه المغازل. الغدة الكلي (وجدت في أزواج) هو كبير جدا ، والغدة متعدد الفصيصات يحتوي على القناة المفرغة كبيرة جدا والتي لها علاقات واسعة ، فصوص غير منتظمة على ذلك. عنيبي الشكل الغدد تحدث بأعداد كبيرة وتشبه قصيرة ، والإسقاطات الأصابع الصغيرة. الغدة الكمثري هي أصغر غدة في البطن ، والعديد من ضغط وقنوات الاسطوانية التي تشبه المروحة مع العديد من القنوات الصغيرة المفرغة التي تمتد وصولا الى المغازل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نوصي إزالة الغدد في الترتيب التالي : tubuliform ، أمبولي الشكل الكبرى ، سوطي الشكل ، أمبولي الشكل طفيفة ، الكلي ، عنيبي الشكل ، ثم الكمثري (الشكل 2A - B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بداية مع tubuliform ، ندف هذه الغدد الخروج من بقية الالغدد ه -- يجب أن تكون جالسا على قمة الغدد الأخرى (الشكل 2A). هناك ثلاثة أزواج من الغدد tubuliform في عنكبوت واحد. السماح لهم تعويم حرة ولكنها تظل مرتبطة المغازل من خلال القنوات الخاصة بهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، ندف بعيدا الغدد أمبولي الشكل الرئيسية. هناك نوعان من الغدد أمبولي الشكل الرئيسية الموجودة في أحد العنكبوت. أثناء إجراء الفك ، تأكد من القنوات لا تزال تعلق على الغدد (الشكل 2A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تواصل ندف بقية الغدد بعيدا عن بعضها البعض ، والعمل بعناية لتجنب أي ثقب في الغدد ، وخصوصا الكلي والغدد سوطي الشكل. وينبغي أن يكون حرا في كل غدة عائمة على طول الطريق إلى نقطة الخروج في الهيكل الخارجي للالمغازل. كما تم العثور على هذه الغدد في أزواج. إزالة كل معسر الغدة بواسطة ملقط مع القناة وسحب بعناية حتى يبتعد عن نقطة الخروج. تم العثور على أمبولي الشكل الكبرى ، سوطي الشكل ، أمبولي الشكل طفيفة ، والغدد التجميعية في أزواج. الغدد عنيبي الشكل الكمثري وتحدث في العديد من أزواج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كل معسر الغدة بواسطة ملقط مع القناة وسحب بعناية حتى يبتعد عن نقطة الخروج من أسفل مغزال. نحن عادة تخزين الرطب في الغدد ، ومع ذلك ، فإننا لا تضيف عازلة إضافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما تتم إزالة الغدد ووضعها معقمة قبل المسمى أنابيب 1.5 مل microcentrifuge. وتظهر في الشكل الفردية الغدد 3A - G. إبقاء هذه الغدد على الجليد ثم فلاش تجميدها في النيتروجين السائل. بعد تجميد فلاش في النيتروجين السائل ، ووضعهم في -80 درجة مئوية للتخزين. </li></ol> 4. ممثل النتائج عند إزالة الغدد المختلفة ، ينبغي اتخاذ الحذر الشديد أثناء التعامل مع سوطي الشكل الكلي والغدد ، كما يمكن أن هذين الهيكلين ثقب بسهولة وتلف مع ملقط. وعلاوة على ذلك ، فمن الجدير بالذكر أن شكليا الغدد سوطي الشكل الكلي وتبدو متشابهة للغاية قبل إزالتها ، وغالبا ما تتشابك مع بعضها البعض. لمنع التلوث عبر هذه الأنسجة على الإزالة ، وينبغي للمشرح ندف بعناية هذه الهياكل إربا. بالإضافة إلى ذلك ، عند التعرض لها في الغدد المنتجة للحرير ، والغدد عنيبي الشكل الكمثري ويكون أكثر صعوبة في تصور على الفور نظرا لصغر حجم وموقعها التشريحي. غالبا ما هناك هو وجود الكثير من البيض. وعلاوة على ذلك ، والرعاية إضافية يلزم اتخاذها عند إزالة الغدة كمثري الشكل ، وهذا النسيج هو لزجة جدا وغالبا ما ستلتزم ملقط الخاص. عندما يتم هذا الإجراء بشكل صحيح ، فمن الممكن الحصول على الحرير السبعة جميعهم من الغدد المنتجة للعنكبوت واحد بطريقة عالي النقاء. عادة ، يمكن للمرء استرداد كميات ميكروغرام من الحمض النووي الريبي والبروتينات الكلية من تشريح العنكبوت واحد. ويرد مثال باستخدام الحمض النووي الريبي مجموع qPCR لدراسة مستويات مرنا من الجينات tubuliform فبروين المقيدة ، TuSp1 ، (الشكل 4). التجارب التي تنطوي على ممثل lysates جمعت من البروتين في الغدد مثلا في محلول الهضم تريبسيني تليها تحليل MS (يمكن أن تستخدم أيضا لMS / MS تحليل) أو تكوين الأحماض الأمينية التحليل هو موضح (الشكل 5-6 ، على التوالي). <img src="/files/ftp_upload/2382/2382fig1a.jpg" alt="الشكل 1A" /><img src="/files/ftp_upload/2382/2382fig1e.jpg" alt="الرقم 1E" /> الشكل 1. المناولة والتخدير ، والتخلص من الهيكل الخارجي من بطن عنكبوت الأرملة السوداء الإناث. أ) نقل العنكبوت في صندوق من الورق المقوى مبطنة بالبلاستيك لتسهيل نقل العنكبوت إلى قارورة صغيرة من البلاستيك. ب) وضع العنكبوت إلى قارورة من البلاستيك مع المكونات. C) التخدير العنكبوت مع غاز ثاني أكسيد الكربون. D) الفصل بين cephalothorax من البطن باستخدام microscissors. E) استيقاف من البطن في علبة تشريح باستخدام دبابيس الحشرات. F) عرض بعد إجراء شق الوحشي مع مقص ، وجزء من الهيكل الخارجي ودقت مرة بالملقط. G) التي تبذل لخفض عمودي الشقوق الجانبي الأولي. H) إزالة الهيكل الخارجي والتعرض للطبقة الدهون. <img src="/files/ftp_upload/2382/2382fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. التصور في الغدد المنتجة للحرير seven مختلفة بينما سليمة في بطن العنكبوت فضلا عن الأنسجة المحيطة بها. أ) صور من tubuliform ، أمبولي الشكل الكبرى ، سوطي الشكل والركام ، والأنسجة أمبولي الشكل طفيفة في التكبير 12X. ب) صورة للغدد عنيبي الشكل الكمثري والتكبير في 12X. <img src="/files/ftp_upload/2382/2382fig3a.jpg" alt="الشكل 3A" /><img src="/files/ftp_upload/2382/2382fig3e.jpg" alt="الرقم 3E" /> الشكل 3. فوتوغرافية للغدد الحرير المنتجة السبعة بعد ازالتها من البطن. تم القبض على جميع الصور في 20X التكبير مع استثناء من عنيبي الشكل الكمثري والغدد ، والتي كانت تتم في 40X. والكبرى)أمبولي الشكل غدة ؛ B) أمبولي الشكل الرئيسية والثانوية (الجانب الأيمن) للمقارنة حجم ؛ C) tubuliform ؛ D) سوطي الشكل ؛ E) الكلي ؛ F) عنيبي الشكل ؛ G) الكمثري. <img src="/files/ftp_upload/2382/2382fig4.jpg" alt="الشكل 4" /> النتائج الممثل الشكل 4. نمط التعبير عن الجينات الحرير ، TuSp1 ، بعد مسح مستويات TuSp1 مرنا في الغدد المنتجة للحرير المختلفة (باستثناء الغدة الكمثري) باستخدام كمية الوقت الحقيقي PCR (qPCR) العزلة التالية من الحمض النووي الريبي من مجموع الغدد. <img src="/files/ftp_upload/2382/2382fig5.jpg" alt="الشكل 5" /> الشكل 5. مثال لتحليل MS مقتطفات من البروتين الحصول عليها من غدة كمثري الشكل التالي في محلول الهضم زيتية. ملاحظة : 2 - X2 يمثل أضعاف التكبير كثافة الطيف. وترد جماهير الطيف ايون الببتيد التي تتوافق مع مناطق فبروين PySp1 مع الرمز #. <img src="/files/ftp_upload/2382/2382fig6.jpg" alt="الشكل 6" /> الشكل 6. نتيجة نموذجي من الأحماض الأمينية تكوين البروتينات المستخرجة من الغدة tubuliform. ملاحظة : ASX = ASP والأسباراجين ؛ = GLX حمض الغلوتاميك وGLN. تلوين الزرقاء يعكس الأحماض الأمينية القطبية مع الجماعات سلسلة الجانب حين تلون أحمر يمثل بقايا الأحماض الأمينية مع المنظمات غير القطبية مجموعات سلسلة جانبية.

<ol>
	<li>Vollrath, F., Knight, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Int. J. Biol. Macromol. 24, 243-243 (1999).</li><li>Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J. Exp. Biol. 202, 3295-3295 (1999).</li><li>Gosline, J. M., DeMont, M. E., Denny, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Endeavour. 10, 31-31 (1986).</li><li>Hinman, M. B., Jones, J. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Trends Biotechnol. 18 (9), 374-374 (2000).</li><li>Lewis, R. V., Xu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 87, 7120-7120 (1990).</li><li>Colgin, M. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Protein Sci. 7 (3), 667-667 (1998).</li><li>Tian, M., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Appl. Phys. A-Mater. 82, 265-265 (2006).</li><li>Hu, X., Lawrence, B., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biochemistry. 44 (30), 10020-10020 (2005).</li><li>Vasanthavada, K., Hu, X., Falick, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Biol Chem. 282 (48), 35088-35088 (2007).</li><li>Hayashi, C. Y., Blackledge, T. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mol. Biol. Evol.. 21 (10), 1950-1950 (2004).</li><li>Blasingame, E., Tuton-Blasingame, T., Larkin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Biol Chem. 284 (42), 29097-29097 (2009).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

منهجيتنا لmicrodissection في الغدد المنتجة للحرير العنكبوت من الأرملة السوداء يوفر وسيلة فعالة للحصول على الحرير عالي النقاء لانتاج الغدد. يمكن أن تكتمل في تشريح 1،5-3 ساعات ، مما أسفر عن مجموعة كاملة من السبعة المتميزة الحرير المنتجة من الغدد cobweavers. الحصول على الحرير عالي ا?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sodium chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EM Science</td>
<td>SX0420-1</td>
<td>0.1 M in water</td>
</tr>
<tr>
<td>Diethyl pyrocarbonate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D-5758 - 5 ml</td>
<td>0.1% v/v</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium citrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S1804 - 1 kg</td>
<td>0.015 M in water</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>Leica MZ16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Digital microscope camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>DFC320</td>
<td>Software - Leica Application Suite v2.8.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Vannas scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>500260</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless steel forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>501764</td>
<td>Mini Dumont #M5S</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect pins</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Indigo Instruments</td>
<td>33414-2</td>
<td>Insect pins #2</td>
</tr>
<tr>
<td>Small or large dissection dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Living Systems Instrumentation</td>
<td>DD-50-S or DD-90-S</td>
<td>52 mm diameter x 18 mm H (Sylgard Depth ~6mm) or 93 mm x 22 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Drosophila culture vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carolina Biological Supply Company</td>
<td>FR-17-3076</td>
<td>Size is 31.75 mm diameter x 101.6 mm</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

microdissection of black widow spider silk-producing glands

العناكب الحديثة تدور ألياف الحرير عالية الأداء مع طائفة واسعة من الوظائف البيولوجية ، بما في ذلك تنقل التقاط الفريسة ، وحماية النامية 1،2 ذرية. العناكب إنجاز هذه المهام من خلال الدوران عدة أنواع الألياف التي لها خصائص مميزة الميكانيكية المختلفة. لقد حدث مثل هذا التخصص من أنواع الألياف من خلال تطور غدد الحرير المنتجة المختلفة ، والتي تؤدي وظيفة وbiofactories الصغيرة. وهذه صناعة biofactories تخزين كميات كبيرة من البروتينات الحرير لإنتاج الألياف. من خلال سلسلة معقدة من الأحداث البيوكيميائية ، يتم تحويل هذه البروتينات الحرير من السائل إلى مادة صلبة عند قذف. وقد أثبتت الدراسات الميكانيكية التي الحرير العنكبوت أقوى من الفولاذ عالي الشد 3. وقد كشفت التحاليل لفهم العلاقة بين بنية ووظيفة المواضيع التي حرير العنكبوت عنكبوت الحرير تتألف في معظمها من البروتينات ، أو fibroins ، التي يكرر كتلة ضمن تسلسل البروتين 4. ويجري كشف التوقيعات الجزيئية المشتركة التي تساهم في قوة الشد والتمدد لا يصدق من الحرير العنكبوت من خلال تحليلات cDNAs الحرير ترجمتها. نظرا للخصائص المواد غير عادية من الحرير العنكبوت ، ومختبرات الأبحاث في جميع أنحاء العالم تتسابق على فهم ومحاكاة عملية الغزل لإنتاج ألياف الحرير الاصطناعي للاستخدامات التجارية والعسكرية والصناعية. واحدة من التحديات الرئيسية التي تواجه صناعة الغزل الاصطناعي حرير العنكبوت في مختبر البحوث ينطوي على فهم كامل للعمليات الكيميائية الحيوية التي تحدث أثناء قذف من الألياف من الغدد المنتجة للحرير. هنا نقدم وسيلة لعزل السبع الحرير المنتجة للغدد مختلفة من عنكبوت الأرملة السوداء cobweaving ، والذي يتضمن الغدد أمبولي الشكل الرئيسية والثانوية 7 [dragline بتصنيع الحرير والسقالات] 5،6 ، tubuliform [البيض يجمع الحرير القضية] ، 8 ، سوطي الشكل [وظيفة معروفة في الكوز ، النساجين] ، الإجمالية [يجعل الغراء الحرير] ، عنيبي الشكل [التفاف فريسة يجمع البيض والمواضيع القضية] (9) والكمثري [تنتج الحرير القرص المرفق] (10). ويستند هذا النهج على التخدير العنكبوت مع غاز ثاني أكسيد الكربون ، وفصل لاحق من cephalothorax من البطن ، وmicrodissection من البطن للحصول على الغدد المنتجة للحرير. بعد انفصال في الغدد المنتجة للحرير مختلفة ، يمكن استخدام هذه الأنسجة لاسترداد الجزيئات المختلفة للتحاليل الكيميائية الحيوية المتميزة ، بما في ذلك في الوقت الحقيقي PCR الكمي ، شمال وغرب النشاف ، ويحلل الطيف الكتلي (MS أو MS / MS) لتحديد سلاسل بروتين الحرير الجديد ، والبحث عن البروتينات التي تشارك في مسار التجمع الحرير ، أو استخدام أنسجة سليمة للثقافة الخلية أو التجارب النسيجية.

Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands at JoVE.com

Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands

نحن هنا تصف استراتيجية فعالة لإزالة الغدد المنتجة للحرير من بطن امرأة عناكب الأرملة السوداء. هذا الإجراء يسمح للعزلة السريع للانتاج الحرير seven متميزة الغدد بطريقة عالي النقاء ، وهي عملية هامة للمحققين يدرسون العنكبوت إنتاج الحرير والتجمع الألياف.

Microdissection الغدد الارملة السوداء الحرير المنتجة العنكبوت

Modern spiders spin high-performance silk fibers with a broad range of biological functions, including locomotion, prey capture and protection of ...

microdissection-of-black-widow-spider-silk-producing-glands

Research

JoVE Journal

Biology

15.6K Views.  University of the Pacific. نحن هنا تصف استراتيجية فعالة لإزالة الغدد المنتجة للحرير من بطن امرأة عناكب الأرملة السوداء. هذا الإجراء يسمح للعزلة السريع للانتاج الحرير seven متميزة الغدد بطريقة عالي النقاء ، وهي عملية هامة للمحققين يدرسون العنكبوت إنتاج الحرير والتجمع الألياف.

Video: Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol demonstrates dissection techniques for removal of the midgut and salivary glands from Aedes aegypti mosquitoes. 



The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for vector pathogens like Plasmodium falciparum and the dengue virus. This video demonstrates the dissection techniques for removing the midgut and salivary glands from Aedes aegypti mosquitoes.

تشريح الغدد اللعابية والمعي المتوسط ​​من AE. بعوض البعوض

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections. LMD techniques rely on a thermo labile membrane placed either on top of, or underneath, the tissue section. In one method, focused laser energy is used to melt the membrane onto the underlying cells, which can then be lifted out of the tissue section. In the other, the laser energy vaporizes the foil along a path "drawn" on the tissue, allowing the selected cells to fall into a collection device. Each technique allows the selection of cells with a minimum resolution of several microns. DNA, RNA, protein, and lipid samples may be isolated and analyzed from micro-dissected samples. In this video, we demonstrate the use of the Leica AS-LMD laser microdissection instrument in seven segments, including an introduction to the principles of LMD, initializing the instrument for use, general considerations for sample preparation, mounting the specimen and setting up capture tubes, aligning the microscope, adjusting the capture controls, and capturing tissue specimens. Laser-capture micro-dissection enables the investigator to isolate samples of pure cell populations as small as a few cell-equivalents. This allows the analysis of cells of interest that are free of neighboring contaminants, which may confound experimental results.

الليزر Microdissection القبض على أنسجة الثدييات

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post fertilization (dpf), the larvae will show the first visual response. Many genes have been identified to control a proper eye development, but we are far from a complete understanding of the underlying genetic architecture. Whole genome gene expression profiling is a useful tool to elucidate genetic regulatory network for eye development. However, the small size of the embryonic eye in zebrafish makes it challenging to obtain intact and pure eye tissues for expression analysis. For example, the anterior-posterior length of the eye between day 2 and 3 is only approximately 200-300 &mu;m, while the diameter of the lens is less 100 &mu;m. Also, the retinal pigment epithelium (RPE) underlying the retina is just a single-layer epithelium. While gene expression profiles can be obtained from the whole embryo, they do not accurately represent the expression of these tissues. Therefore pure tissue must be obtained for a successful gene expression profiling of eye development. To address this issue, we have developed an approach to microdissect intact retina and retina with RPE attached from 1-3 dpf, which cover major stages of eye morphogenesis. All procedures can be done with fine forceps and general laboratory supplies under standard stereomicroscopes. For retinal dissection, the single-layer RPE is removed and peeled off by brushing action and the preferential adherence of the RPE remnants to the surface of the culture plate for dissection. For RPE-attached retinal dissection, the adherence of RPE to the dissection plate is removed before the dissection so that the RPE can be completely preserved with the retina. A careful lifting action of this tissue can efficiently separate the presumptive choroid and sclera. The lens can be removed in both cases by a chemically etched tungsten needle. In short, our approach can obtain intact eye tissues and has been successfully utilized to study tissue-specific expression profiles of zebrafish retina1, 2 and retinal pigment epithelium3.

This article describes an approach to microdissect zebrafish retinas with and without retinal pigment epithelium attached, from one to three days postfertilization embryos.

Microdissection من الأنسجة الجنينية العين اسماك الزرد

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Isolation of Viable Multicellular Glands from Tissue of the Carnivorous Plant, Nepenthes

Many plants possess specialized structures that are involved in the production and secretion of specific low molecular weight compounds and proteins. These structures are almost always localized on plant surfaces. Among them are nectaries or glandular trichomes. The secreted compounds are often employed in interactions with the biotic environment, for example as attractants for pollinators or deterrents against herbivores.
Glands that are unique in several aspects can be found in carnivorous plants. In so-called pitcher plants of the genus Nepenthes, bifunctional glands inside the pitfall-trap on the one hand secrete the digestive fluid, including all enzymes necessary for prey digestion, and on the other hand take-up the released nutrients. Thus, these glands represent an ideal, specialized tissue predestinated to study the underlying molecular, biochemical, and physiological mechanisms of protein secretion and nutrient uptake in plants. Moreover, generally the biosynthesis of secondary compounds produced by many plants equipped with glandular structures could be investigated directly in glands.
In order to work on such specialized structures, they need to be isolated efficiently, fast, metabolically active, and without contamination with other tissues. Therefore, a mechanical micropreparation technique was developed and applied for studies on Nepenthes digestion fluid. Here, a protocol is presented that was used to successfully prepare single bifunctional glands from Nepenthes traps, based on a mechanized microsampling platform. The glands could be isolated and directly used further for gene expression analysis by PCR techniques after preparation of RNA.

Isolation of Viable Multicellular Glands from Tissue of the Carnivorous Plant, Nepenthes

Plants glands are specialized structures responsible for the biosynthesis and secretion of many compounds involved in interactions with the biotic environment. To enable studies on their molecular and biochemical features, a mechanical micropreparation technique was established in order to isolate single metabolically active glands, here from the carnivorous plant Nepenthes.

Many plants possess specialized structures that are involved in the production and secretion of specific low molecular weight compounds and proteins. ...

Reconstruction of 3-Dimensional Histology Volume and its Application to Study Mouse Mammary Glands

Histology volume reconstruction facilitates the study of 3D shape and volume change of an organ at the level of macrostructures made up of cells. It can also be used to investigate and validate novel techniques and algorithms in volumetric medical imaging and therapies. Creating 3D high-resolution atlases of different organs1,2,3 is another application of histology volume reconstruction. This provides a resource for investigating tissue structures and the spatial relationship between various cellular features. We present an image registration approach for histology volume reconstruction, which uses a set of optical blockface images. The reconstructed histology volume represents a reliable shape of the processed specimen with no propagated post-processing registration error. The Hematoxylin and Eosin (H&#38;E) stained sections of two mouse mammary glands were registered to their corresponding blockface images using boundary points extracted from the edges of the specimen in histology and blockface images. The accuracy of the registration was visually evaluated. The alignment of the macrostructures of the mammary glands was also visually assessed at high resolution.
This study delineates the different steps of this image registration pipeline, ranging from excision of the mammary gland through to 3D histology volume reconstruction. While 2D histology images reveal the structural differences between pairs of sections, 3D histology volume provides the ability to visualize the differences in shape and volume of the mammary glands.

We present an image registration approach for 3-dimensional (3D) histology volume reconstruction, which facilitates the study of the changes of an organ at the level of macrostructures made up of cells . Using this approach, we studied the 3D changes between wild-type and Igfbp7-null mammary glands.

إعادة بناء 3 الأبعاد حجم الأنسجة وتطبيقاتها لدراسة ماوس الغدد الثديية

Histology volume reconstruction facilitates the study of 3D shape and volume change of an organ at the level of macrostructures made up of cells. It can ...

Cryosectioning Method for Microdissection of Murine Colonic Mucosa

The colonic mucosal tissue provides a vital barrier to luminal antigens. This barrier is composed of a monolayer of simple columnar epithelial cells. The colonic epithelium is dynamically turned over and epithelial cells are generated in the stem cell containing crypts of Lieberk&#252;hn. Progenitor cells produced in the crypt-bases migrate toward the luminal surface, undergoing a process of cellular differentiation before being shed into the gut lumen. In order to study these processes at the molecular level, we have developed a simple method for the microdissection of two spatially distinct regions of the colonic mucosa; the proliferative crypt zone, and the differentiated surface epithelial cells. Our objective is to isolate specific crypt and surface epithelial cell populations from mouse colonic mucosa for the isolation of RNA and protein.

Here we describe a simple method for the isolation of spatially distinct murine colonic epithelial surface cells from the underlying crypt-base cells.

الطريقة Cryosectioning لتسليخ مجهري الفئران القولون الغشاء المخاطي

The colonic mucosal tissue provides a vital barrier to luminal antigens. This barrier is composed of a monolayer of simple columnar epithelial cells. The ...

Rodent Working Heart Model for the Study of Myocardial Performance and Oxygen Consumption

Isolated working heart models have been used to understand the effects of loading conditions, heart rate and medications on myocardial performance in ways that cannot be accomplished in vivo. For example, inotropic medications commonly also affect preload and afterload, precluding load-independent assessments of their myocardial effects in vivo. Additionally, this model allows for sampling of coronary sinus effluent without contamination from systemic venous return, permitting assessment of myocardial oxygen consumption. Further, the advent of miniaturized pressure-volume catheters has allowed for the precise quantification of markers of both systolic and diastolic performance. We describe a model in which the left ventricle can be studied while performing both volume and pressure work under controlled conditions. 
In this technique, the heart and lungs of a Sprague-Dawley rat (weight 300-500 g) are removed en bloc under general anesthesia. The aorta is dissected free and cannulated for retrograde perfusion with oxygenated Krebs buffer. The pulmonary arteries and veins are ligated and the lungs removed from the preparation. The left atrium is then incised and cannulated using a separate venous cannula, attached to a preload block. Once this is determined to be leak-free, the left heart is loaded and retrograde perfusion stopped, creating the working heart model. The pulmonary artery is incised and cannulated for collection of coronary effluent and determination of myocardial oxygen consumption. A pressure-volume catheter is placed into the left ventricle either retrograde or through apical puncture. If desired, atrial pacing wires can be placed for more precise control of heart rate. This model allows for precise control of preload (using a left atrial pressure block), afterload (using an afterload block), heart rate (using pacing wires) and oxygen tension (using oxygen mixtures within the perfusate).

Isolated working heart models can be used to measure the effect of loading conditions, heart rate, and medications on myocardial performance and oxygen consumption. We describe methods for preparation of a rodent left heart working model that permits study of systolic and diastolic performance and oxygen consumption under various conditions.

القوارض العمل نموذج القلب لدراسة أداء عضلة القلب واستهلاك الأوكسجين

Isolated working heart models have been used to understand the effects of loading conditions, heart rate and medications on myocardial performance in ways ...

Isolation of Intact, Whole Mouse Mammary Glands for Analysis of Extracellular Matrix Expression and Gland Morphology

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal architecture. Here, a small pocket below the skin was created using Mayo scissors, allowing separation of the glands within the subcutaneous tissue from the underlying peritoneum. Visualization of the glands was aided by the use of 3.5x-R surgical micro loupes. The pelt was inverted and pinned back allowing identification of the intact mammary fat pads. Each of the #4 abdominal glands was bluntly dissected by sliding the scalpel blade laterally between the subcutaneous layer and the glands. Immediately post-harvest, glands were placed in 10% neutral buffered formalin for subsequent tissue processing. Excision of the entire gland is advantageous because it primarily eliminates the risk of excluding important tissue-wide interactions between ductal epithelial cells and other microenvironmental cellular populations that could be missed in a partial biopsy. One drawback of the methodology is the use of serial sections from fixed tissues which limits analyses of ductal morphogenesis and protein expression to discrete locations within the gland. As such, changes in ductal architecture and protein expression in 3 dimensions (3D) is not readily obtainable. Overall, the technique is applicable to studies requiring whole intact murine mammary glands for downstream investigations such as developmental ductal morphogenesis or breast cancer.

Here, we present a protocol for the isolation of whole, intact mouse mammary glands to investigate extracellular matrix (ECM) expression and ductal morphology. Mouse #4 abdominal glands were extracted from 8-10 week old female nulliparous mice, fixed in neutral buffered formalin, sectioned and stained using immunohistochemistry for ECM proteins.

عزل الغدد الثديية الماوس سليمة، وكلها لتحليل التعبير المصفوفة خارج الخلية ومورفولوجية الغدة

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal ...

Investigating Teliospore Germination Using Microrespiration Analysis and Microdissection

Smut fungi are the etiological agents of several devastating agricultural diseases. They are characterized by the production of teliospores, which are thick-walled dispersal agents. Teliospores can remain dormant for decades. The dormancy is characterized by low metabolic rates, paused macromolecular biosynthesis and greatly reduced levels of respiration. Upon receiving required environmental signals, teliospores germinate to produce haploid cells, which can initiate new rounds of infection. Teliospore germination is characterized by the resumption of macromolecular biosynthesis, increased respiration and dramatic morphological changes. In order to precisely measure changes in cellular respiration during the early stages of germination, we have developed a simple protocol employing a Clark-type respirometer. The later stages of germination are distinguished by specific morphological changes, but germination is asynchronous. We developed a microdissection technique that enables us to collect teliospores at distinct germination stages.

Smut fungi cause many devastating agricultural diseases. They are dispersed as dormant teliospores that germinate in response to environmental cues. We outline two methods to investigate molecular changes during germination: measuring respiration increase to detect metabolic activation and assessing changing molecular events by isolating teliospores at distinct morphological stages.

التحقيق الإنبات تيليوسبوري باستخدام تحليل ميكروريسبيريشن وميكروديسيكشن

Smut fungi are the etiological agents of several devastating agricultural diseases. They are characterized by the production of teliospores, which are ...

Isolation of Myoepithelial Cells from Adult Murine Lacrimal and Submandibular Glands

The lacrimal gland (LG) is an exocrine tubuloacinar gland that secretes an aqueous layer of tear film. The LG epithelial tree is comprised of acinar, ductal epithelial, and myoepithelial cells (MECs). MECs express alpha smooth muscle actin (&#945;SMA) and have a contractile function. They are found in multiple glandular organs and are of ectodermal origin. In addition, the LG contains SMA+ vascular smooth muscle cells of endodermal origin called pericytes: contractile cells that envelop the surface of vascular tubes. A new protocol allows us to isolate both MECs and pericytes from adult murine LGs and submandibular glands (SMGs). The protocol is based on the genetic labeling of MECs and pericytes using the SMACreErt2/+:Rosa26-TdTomatofl/fl mouse strain, followed by preparation of the LG single-cell suspension for fluorescence activated cell sorting (FACS). The protocol allows for the separation of these two cell populations of different origins based on the expression of the epithelial cell adhesion molecule (EpCAM) by MECs, whereas pericytes do not express EpCAM. Isolated cells could be used for cell cultivation or gene expression analysis.

The lacrimal gland (LG) has two cell types expressing &#945;-smooth muscle actin (&#945;SMA): myoepithelial cells (MECs) and pericytes. MECs are of ectodermal origin, found in many glandular tissues, while pericytes are vascular smooth muscle cells of endodermal origin. This protocol isolates MECs and pericytes from murine LGs.

عزل الخلايا العضلية الفطرية من الغدد الفكه البالغة الدمعية

The lacrimal gland (LG) is an exocrine tubuloacinar gland that secretes an aqueous layer of tear film. The LG epithelial tree is comprised of acinar, ...