يصف هذا البروتوكول الخطوات التفصيلية لاستخدام أجنة الزرد في تجارب الفحص القائمة على الإشعاع وبعض الأساليب القائمة على الملاحظة لتقييم علاج الأدوية والإشعاع المختلفة. سيساعد هذا القراء على وضع فحص شبه عالي الإنتاجية للعقاقير يتضمن التعرض للأشعة السينية باستخدام أجنة الزرد ، والذي سيوجه في تقييم السمية الإشعاعية وفعالية الأدوية المختلفة المستخدمة. يمكن استخدام هذا الإجراء لفحص الأدوية المختلفة والتحقق من صحتها أو تقييمها كمحسسات إشعاعية أو واقيات محتملة ، والتي يمكن استكشافها أو استخدامها في مجال العلاج الإشعاعي للسرطان أو البيولوجيا الإشعاعية.
للبدء ، راقب الأجنة المتنامية تحت مجهر التشريح. تحديد المرحلة المناسبة وإزالة أي أجنة ميتة أو غير صحية. تأكد من أن التدريج المناسب للجنين هو الإشعاع وسيتم إعطاء جرعات الدواء في مرحلة معينة من المعدة.
قبل البدء في التجربة ، قم بتوزيع الأجنة السليمة بعناية في اللوحات التجريبية بمساعدة ماصة باستور. لكل مجموعة تجريبية ، خذ 15 إلى 20 جنينا. أثناء إعداد تجربة إشعاعية ، قم بتضمين مجموعة تحكم غير مشععة ومجموعة إشعاعية فقط.
توزيع الأجنة في صفيحة بئر إذا كانت الدروع الإشعاعية يمكن أن تغطي وتحمي الآبار الزائدة من الإشعاع بينما تتعرض الآبار الأخرى لجرعة إشعاعية معينة. خلاف ذلك ، استخدم لوحات أو أقراص فردية لرؤية الأجنة لكل جرعة إشعاعية. قم بتشغيل جهاز تشعيع الأشعة السينية وابدأ تهيئة الجهاز وتسخينه.
ضع اللوحة التجريبية أسفل جهاز التشعيع داخل الجهاز في المنتصف ، مع التأكد من أن اللوحة أسفل مصدر الأشعة السينية مباشرة. ثم اضبط الجرعة وابدأ الأشعة السينية. بعد الانتهاء من التشعيع ، أخرج الألواح ، وأغلق برنامج الماكينة ، وأوقف تشغيل الجهاز ، وافحص الألواح الموجودة تحت المجهر مباشرة بعد الإشعاع.
إزالة الأجنة الميتة ، وتسجيل عددها بعد تقييمها تحت المجهر التشريحي. أعد الألواح إلى الحاضنة عند 28.5 درجة مئوية. جمع البيانات على فترات زمنية محددة مسبقا بعد إعطاء الإشعاع.
سجل جميع الملاحظات الممكنة مثل البقاء على قيد الحياة ، وكفاءة الفقس ، ومرحلة التطور ، وعدد ضربات القلب ، وانحناء الجسم والذيل ، وذمة التامور ، وتمديد كيس الصفار ، وصغر الرأس ، وتطور المثانة ، والحركة العامة أو النشاط ، وما إلى ذلك. لالتقاط الصور، اختر أجنة تمثيلية على شريحة نظيفة. تحقق من الأجنة تحت المجهر ، وتوجيهها في اتجاه معين.
يصور منحنى البقاء على قيد الحياة للأجنة المشععة في ست ساعات بعد الإخصاب أنه في المجموعة الضابطة والأجنة المعرضة ل 2 رمادي و 5 رمادي ، لم يكن هناك موت كبير في الأجنة. يشير عدد نبضات القلب في الدقيقة إلى أن معدل ضربات القلب انخفض بشكل كبير مع زيادة جرعات الأشعة السينية. في المجموعة الضابطة كل 24 ساعة ، لوحظ أن معدل ضربات القلب يزداد.
يشتبه في حدوث تشوه شديد في القلب والأوعية الدموية في الأجنة المعرضة ل 15 شعاعا رماديا و 20 شعاعا رماديا حيث انخفضت ضربات القلب بشكل كبير. يتم تصوير وتقييم عيوب النمط الظاهري والنمو المختلفة للأجنة المعرضة لجرعات مختلفة من الإشعاع في نقاط زمنية مختلفة. كما تم إجراء ملاحظات مورفولوجية لثني العمود الفقري أو الذيل ، وتشوه الرأس وصغر الرأس ، وعيوب النمو ، وذمة التامور ، وتشوهات كيس الصفار ، وتشوهات المثانة ، والتغيرات في بنية العين بالنسبة للبروتوكول الذي أظهرناه ، فإن اختيار الأجنة السليمة ، والوضع المناسب للأجنة في التشعيع والتقييم المناسب للتشوهات المتقاطعة هي مفتاح هذا الإجراء.
