이 프로토콜은 방사선 기반 스크리닝 실험에 제브라피시 배아를 사용하는 자세한 단계와 다양한 약물 및 방사선의 처리를 평가하기 위한 몇 가지 관찰 접근 방식을 설명합니다. 이를 통해 독자는 제브라피시 배아를 사용한 X선 노출과 관련된 준고처리량 약물 스크리닝을 설정하는 데 도움이 될 것이며, 이는 방사능 독성 및 사용된 다양한 약물의 효과를 평가하는 데 도움이 될 것입니다. 이 절차는 잠재적인 방사선 감작제 또는 보호제로서 다양한 약물을 스크리닝 및 검증 또는 평가하는 데 사용할 수 있으며, 이는 암 방사선 요법 또는 방사선 생물학 분야에서 추가로 탐색되거나 사용될 수 있습니다.
시작하려면 해부 현미경으로 성장하는 배아를 모니터링합니다. 적절한 단계를 식별하고 죽거나 건강하지 않은 배아를 제거합니다. 적절한 배아 병기가 방사선 및 약물 투여가 특정 위축 단계에서 제공되는지 확인합니다.
실험을 시작하기 전에 파스퇴르 피펫을 사용하여 건강한 배아를 실험 플레이트에 조심스럽게 분배하십시오. 각 실험 그룹마다 15-20개의 배아를 채취합니다. 방사선 실험을 설정하는 동안 방사선 비조사 대조군 및 방사선 전용 그룹을 포함합니다.
방사선 차폐막이 여분의 웰을 덮고 방사선으로부터 보호할 수 있는 반면 다른 웰은 특정 방사선량에 노출될 수 있는 경우 배아를 웰 플레이트에 분배합니다. 그렇지 않으면 개별 플레이트 또는 디스크를 사용하여 방사선량당 배아를 확인합니다. X-ray 조사기 기계를 켜고 기계 초기화 및 워밍업을 시작합니다.
실험용 플레이트를 기계 내부의 조사기 아래에 놓고 플레이트가 X선 소스 바로 아래에 있는지 확인합니다. 그런 다음 선량을 설정하고 엑스레이를 시작합니다. 방사선 조사가 완료되면 플레이트를 꺼내고 기계 프로그램을 종료하고 기계의 전원을 끄고 방사선 직후 현미경으로 플레이트를 확인하십시오.
죽은 배아를 제거하고 해부 현미경으로 평가한 후 그 수를 기록합니다. 플레이트를 섭씨 28.5도의 인큐베이터로 되돌립니다. 방사선이 주어진 후 미리 결정된 시간 간격으로 데이터를 수집합니다.
생존, 부화 효율, 발달 단계, 심장 박동 수, 몸 및 꼬리 곡률, 심낭 부종, 난황낭 확장, 소두증, 수영 방광 발달, 일반적인 운동 또는 활동 등과 같은 가능한 모든 관찰을 기록합니다. 이미지를 캡처하려면 깨끗한 슬라이드에서 대표적인 배아를 선택합니다. 현미경으로 배아를 확인하고 특정 방향으로 향하게 합니다.
수정 후 6시간에 방사선을 조사한 배아의 생존 곡선은 대조군과 2개의 회색과 5개의 회색에 노출된 배아에서 배아에서 유의한 죽음이 없음을 나타냈다. 분당 심장 박동 수는 엑스레이 방사선의 선량이 증가함에 따라 심박수가 엄청나게 감소했음을 시사합니다. 대조군에서는 24시간 간격으로 심박수가 증가하는 것으로 나타났습니다.
심장 박동이 엄청나게 떨어지면서 15개의 회색 방사선과 20개의 회색 방사선에 노출된 배아에서 심각한 심혈관 변형이 의심됩니다. 서로 다른 시점에서 다양한 방사선량에 노출된 배아에 대해 다양한 표현형 및 발달 결함이 묘사되고 평가됩니다. 척추 또는 꼬리 굽힘, 머리 기형 및 소두증, 발달 결함, 심낭 부종, 난황낭 기형, 수영 방광 기형 및 눈 구조 변화에 대한 형태학적 관찰도 수행되었습니다.
