يشكر المؤلفون كاثي غيج على دعمها التحريري. تم إنشاء أرقام المخطط مع BioRender.com. تم دعم هذه الدراسة بأموال من قسم التخدير (المركز الطبي بجامعة ديوك) ومنح المعاهد الوطنية للصحة (NS099590 و HL157354 و NS117973 و NS127163).

يتم تنفيذ جميع الإجراءات الموضحة في هذا العمل وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام في البحث ، وقد تمت الموافقة على البروتوكول من قبل لجنة رعاية واستخدام بمعهد ديوك (IACUC). تم استخدام ذكور الفئران الصغيرة (8-10 أسابيع) والذين تتراوح أعمارهم بين (22 شهرا) C57Bl / 6 في الدراسة الحالية. يوضح الشكل 1 نظرة عامة على هذا البروتوكول.
1. التحضير الجراحي
<ol><li>افحص الماوس بحثا عن تشوهات جسيمة وعجز سلوكي. ملاحظة: قبل الجراحة ، من المهم أن يرتدي الجراحون معدات الوقاية الشخصية المناسبة (المعدات الشخصية الواقية) ، بما في ذلك القناع الجراحي والقبعة والقفازات والعباءة.</li>
	<li>وزن الماوس. قم ببرمجة جهاز التنفس الصناعي (انظر جدول المواد) بناء على وزن الجسم.</li>
	<li>ضع الماوس في صندوق تحريض التخدير 4 × 4 بوصة × 7. قم بتشغيل مقياس تدفق الأكسجين (انظر جدول المواد) ، واضبط على 30 ، ومقياس تدفق أكسيد النيتروز ، مضبوطا على 70. قم بتشغيل المرذاذ بنسبة 5٪ إيزوفلوران.</li>
	<li>أدخل سلك التوجيه في القسطرة الوريدية (IV) 20 G.</li>
	<li>أخرج الماوس من صندوق الحث عندما ينخفض معدل التنفس إلى 30-40 نفسا في الدقيقة.</li>
	<li>ضع الماوس على المقعد الجراحي في وضع ضعيف. اسحب لسان الماوس للخارج وأمسكه بأصابع اليد اليسرى. أدخل منظار الحنجرة (انظر جدول المواد) في فم لتصور الحبل الصوتي.</li>
	<li>تثبيت ذقن الماوس على منظار الحنجرة باستخدام الإصبع الأوسط الأيمن. حرر اليد اليسرى لحمل قسطرة 20 G IV.</li>
	<li>أدخل سلك التوجيه قليلا في الحبل الصوتي ، ثم ادفع القسطرة الوريدية 20 G ببطء في القصبة الهوائية حتى يصبح جزء الجناح من القسطرة متساويا مع طرف الأنف. ملاحظة: إذا كان الماوس يتحرك، فلا تقم بإدخال السلك. هذا قد يسبب صدمة في القصبة الهوائية والنزيف.</li>
	<li>قم بتشغيل جهاز التنفس الصناعي (انظر جدول المواد) ، وقم بتوصيله بقسطرة 20 G IV التي يتم تنبيبها في الماوس. قلل الأيزوفلوران إلى 1.5٪ ، وتأكد من تهوية كلتا الرئتين ميكانيكيا. ملاحظة: لا تنس تقليل تركيز الأيزوفلوران. خلاف ذلك ، سوف يتلقى الماوس جرعة زائدة من التخدير.</li>
	<li>يوضع مرهم العين على كلتا العينين ويحقن 5 ملغ/ كغ من كاربروفين تحت الجلد.</li>
	<li>احتفظ بالماوس في وضع جانبي مع توجيه المنطقة الزمنية اليمنى لأعلى. حافظ على درجة حرارة المستقيم عند 37 درجة مئوية باستخدام وسادة تدفئة (35 درجة مئوية) ومصباح حراري يتم التحكم فيه بواسطة منظم درجة الحرارة (انظر جدول المواد).</li>
	<li>حلق مساحة السطح بين العين اليمنى والأذن ، وتطهير المنطقة الجراحية ثلاث مرات على الأقل باستخدام مسحات اليود والكحول.</li>
</ol>2. جراحة MCAO
<ol><li>افتح حزمة الأدوات المعقمة لجراحة MCAO. ارتداء قفازات معقمة وعمل شق جلدي 1 سم بين العين اليمنى والأذن اليمنى باستخدام مقص جراحي. ملاحظة: راقب لون البشرة ودرجة حرارة الجسم والاستجابة لقرصة إصبع القدم كل 15 دقيقة.</li>
	<li>تشريح اللفافة الكامنة بالملقط لكشف العضلات الصدغية والعضلات العضلية. ملاحظة: احرص على عدم إتلاف الغدة النكفية.</li>
	<li>استخدم الملقط للمس الجزء السفلي من العضلة الصدغية واكتشاف موقع القوس الوجني. اسحب بعناية فروع العصب الوجهي.</li>
	<li>استخدم طرف حلقة الكي ذات درجة الحرارة العالية (انظر جدول المواد) لقطع شق عرضي 5 مم على العضلة الصدغية.</li>
	<li>استخدم ملقطين لتشريح القوس الوجني الأساسي وكشف المفصل بين عظام الفك العلوي والعظام الوجنية.</li>
	<li>استخدم المقص لقطع جزء 3 مم من القوس الوجني وإزالته. افصل عضلة العضلة عن قاعدة الجمجمة. ملاحظة: احرص على عدم كسر الجيب الحجاجي الخلفي والوريد الصدغي السطحي.</li>
	<li>ضع أربعة مبعدات صغيرة موضوعة في اتجاهات مختلفة لكشف قاعدة الجمجمة القحفية ، مع سحب فروع العصب الثلاثي التوائم بشكل جانبي بواسطة ضامد واحد. ملاحظة: يشير التلم الموجود على السطح الخارجي لقاعدة الجمجمة إلى موقع الشق الجانبي بين الفص الجبهي والصدغي. يقع MCA هنا (الشكل 2A) ، ويمكن رؤية جذعه وفروعه من خلال الجمجمة الرفيعة والشفافة (الشكل 2B). يوضح الشكل 2 أ علاقة هذا الشريان بالشرايين الدماغية الرئيسية الأخرى.</li>
	<li>ضع قطرة محلول ملحي طبيعي بنسبة 0.9٪ على الجمجمة فوق جذع MCA وبالقرب من فرع قشرة الأنف. استخدم مطحنة كهربائية لترقق الجمجمة حتى يظهر كسر صغير. ملاحظة: لا تدفع المطحنة على الجمجمة ، لأنها قد تخترق الجمجمة وتصيب الشريان الأساسي.</li>
	<li>استخدم طرف الملقط لرفع الجمجمة الرقيقة وإزالتها. بالنسبة للفئران الوهمية ، توقف هنا ، ولا تضغط على الشريان. ملاحظة: يتم تشكيل نافذة مستطيلة صغيرة عبر جذع MCA.</li>
	<li>ضع حلقة أحادية الخيط من الحرير الأسود المضفر أعلى MCA (الشكل 2C). أدخل 8-0 إبرة جراحية مجهرية لرفع جذع MCA ، وربط الخيط (انظر جدول المواد) تحت الإبرة ، مع ترك طرفي الإبرة أعلى عقدة حلقة خيط الحرير (الشكل 2 د).</li>
	<li>بالنسبة ل MCAO العابر ، شد عقدة الخيط الحريري قليلا أسفل الإبرة لمنع تدفق الدم الشرياني (الشكل 2E) ، الذي يمثل بداية MCAO.</li>
	<li>استخدم الملقط لتثبيت الخيط ، وقم بإزالة الإبرة ببطء في نهاية نقص التروية (على سبيل المثال ، 60 دقيقة أو أكثر). ملاحظة: عند إزالة الإبرة ، تنزلق عقدة خيط الحرير من MCA ، ويتم إعادة تغذية الدماغ (الشكل 2F).</li>
	<li>للحصول على MCAO دائم ، شد حلقة خيط الحرير بإحكام حول الشريان ، وقم بإزالة الإبرة. قطع وإزالة مواد خياطة الزائدة.</li>
	<li>ضع قطرة من 0.25٪ بوبيفاكايين على شق الجلد ، وقم بخياطة العضلات والجلد بشكل منفصل باستخدام خيوط من النايلون 6-0 بشكل متقطع (انظر جدول المواد). تطبيق مرهم مضاد حيوي على سطح شق الجلد. ملاحظة: يمكن أيضا إغلاق شق الجلد بدبابيس معقمة أو غراء.</li>
</ol>3. رعاية ما بعد الجراحة
<ol><li>قم بإيقاف تشغيل الأيزوفلوران لإيقاظ الماوس. افصل جهاز التنفس الصناعي عند استعادة التنفس التلقائي.</li>
	<li>انقل الماوس إلى غرفة الاسترداد (انظر جدول المواد) بدرجة حرارة متحكم فيها.</li>
	<li>قم بإخراج الماوس عند استعادة رد الفعل الصحيح ، أو يبدأ في التحرك.</li>
	<li>راقب الماوس عن كثب في غرفة يتم التحكم في درجة حرارتها ورطوبتها. أعد الماوس إلى قفص المنزل بعد أن يكتسب وعيا كاملا (فترة الاسترداد ~ 2 ساعة). تطبيق 5 ملغ/ كغ كاربروفين تحت الجلد يوميا لمدة 3 أيام.</li>
</ol>4. تصوير تباين البقع بالليزر (LSCI)
<ol><li>ستة و 24 ساعة بعد MCAO ، قم بتركيب الماوس المخدر على الإطار المجسم. حلق الجزء العلوي من الرأس ، وقم بتنظيفه بثلاث مسحات متناوبة من اليود والكحول. ملاحظة: تم إجراء التخدير كما هو مذكور في الخطوة 1.3. يتم تنفيذ LSCI أيضا قبل MCAO.</li>
	<li>قم بعمل شق جلدي في خط الوسط بطول 3 سم وقم بتشريح الجلد من الجمجمة. ضع أربعة مبعدات إبرة صغيرة لكشف الجزء العلوي من الجمجمة.</li>
	<li>حرك كاميرا الليزر المرقطة (انظر جدول المواد) فوق الرأس، واضبط تركيز الكاميرا. تخيل تدفق الدم الدماغي.</li>
</ol>5. 2،3،5-ثلاثي فينيل تيترازوليوم كلوريد (TTC) تلطيخ
<ol><li>تخدير الفأر بعمق باستخدام 5٪ إيزوفلوران في نهاية التجربة ، عادة في اليوم 1 أو 3 أو 28 بعد السكتة الدماغية. اضغط على الذيل للتأكد من عدم وجود استجابة للألم.</li>
	<li>قطع رأس الفأر باستخدام مقص جراحي وحصاد الدماغ. احتضان الدماغ في محلول ملحي بارد لمدة 20 دقيقة.</li>
	<li>ضع الدماغ في مصفوفة تقطيع الدماغ على الثلج وأسقط محلول ملحي بارد على الدماغ. قطع الدماغ إلى شرائح 1 مم باستخدام شفرات حلاقة رقيقة.</li>
	<li>اغمر شرائح الدماغ في نفس الاتجاه في طبق من محلول TTC 2٪ (انظر جدول المواد). الحفاظ على الطبق في الظلام في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. ملاحظة: تصبح أنسجة المخ الطبيعية حمراء وتبقى الأنسجة الإقفارية بيضاء.</li>
	<li>نقل شرائح الدماغ إلى 10 ٪ الفورمالين لمدة 24 ساعة من التثبيت. تخيل شرائح الدماغ وقياس منطقة الاحتشاء.</li>
</ol>

إنشاء نموذج الفئران انسداد الشريان الدماغي الأوسط عبر الجمجمة

<ol>
	<li>Tsao, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2022+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2022 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 145 (8), e153 (2022).</li><li>Nogueira, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombectomy+6+to+24+hours+after+stroke+with+a+mismatch+between+deficit+and+infarct.">Thrombectomy 6 to 24 hours after stroke with a mismatch between deficit and infarct.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (1), 11-21 (2018).</li><li>Fisher, M., Savitz, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+brain+cytoprotection+in+acute+ischaemic+stroke-renewed+hope+in+the+reperfusion+era.">Pharmacological brain cytoprotection in acute ischaemic stroke-renewed hope in the reperfusion era.</a> Nature Reviews Neurology. 18 (4), 193-202 (2022).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Knauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+semiquantitative+non-invasive+measurement+of+PcomA+patency+in+C57BL/6+mice+explains+variance+in+ischemic+brain+damage+in+filament+MCAo.">A semiquantitative non-invasive measurement of PcomA patency in C57BL/6 mice explains variance in ischemic brain damage in filament MCAo.</a> Frontiers in Neuroscience. 14, 576741 (2020).</li><li>Yang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-ischemia+common+carotid+artery+occlusion+worsens+memory+loss,+but+not+sensorimotor+deficits,+in+long-term+survived+stroke+mice.">Post-ischemia common carotid artery occlusion worsens memory loss, but not sensorimotor deficits, in long-term survived stroke mice.</a> Brain Research Bulletin. 183, 153-161 (2022).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+O-GlcNAcylation+is+neuroprotective+in+young+and+aged+brains+after+ischemic+stroke.">Increasing O-GlcNAcylation is neuroprotective in young and aged brains after ischemic stroke.</a> Experimental Neurology. 339, 113646 (2021).</li><li>Jiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=XBP1+(X-box-binding+protein-1)-dependent+O-GlcNAcylation+Is+neuroprotective+in+ischemic+stroke+in+young+mice+and+its+impairment+in+aged+mice+is+rescued+by+thiamet-G.">XBP1 (X-box-binding protein-1)-dependent O-GlcNAcylation Is neuroprotective in ischemic stroke in young mice and its impairment in aged mice is rescued by thiamet-G.</a> Stroke. 48 (6), 1646-1654 (2017).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+transcriptomic+analysis+of+the+immune+cell+landscape+in+the+aged+mouse+brain+after+ischemic+stroke.">Single-cell transcriptomic analysis of the immune cell landscape in the aged mouse brain after ischemic stroke.</a> Journal of Neuroinflammation. 19 (1), 83 (2022).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+neuronal+ATF6+activation+in+permanent+ischemic+stroke.">Beneficial effects of neuronal ATF6 activation in permanent ischemic stroke.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 16, 1016391 (2022).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+2.+Regional+cerebral+blood+flow+determined+by+[14C]iodoantipyrine+autoradiography+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 2. Regional cerebral blood flow determined by [14C]iodoantipyrine autoradiography following middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 1 (1), 61-69 (1981).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 1 (1), 53-60 (1981).</li></ol>

جميع المؤلفين ليس لديهم تضارب في المصالح.

تم إنشاء أول نموذج انسداد MCA عبر الجمجمة في الفئران في عام 198111،12 ، واستبدل بنموذج MCAO بدون استئصال الجمجمة في عام 19894. كان لانسداد MCA الأولي عبر الجمجمة مجال جراحي واسع ، بحيث تمت إزالة القوس الوجني بالكامل وسحب العضلات بشكل جانبي. تورمت الأنسجة ا?...

يعاني ما يقرب من 800000 شخص من سكتة دماغية في الولايات المتحدة كل عام ، ومعظم هذه السكتات الدماغية هي نقص تروية في الطبيعة1. استعادة تدفق الدم الدماغي في الوقت المناسب مع منشط البلازمينوجين الأنسجة (tPA) و / أو استئصال الخثرة هو حاليا العلاج الأكثر فعالية لمرضى السكتة الدماغية. ومع ذلك ، فإن الشفاء التام للوظائف العصبية على المدى الطويل أمر نادر الحدوث 2,3. وبالتالي ، فإن البحث عن علاج جديد للسكتة الدماغية يستهدف التحسين الوظيفي هو مجال مكثف للبحث يتطلب نماذج حيوانية ذات صلة سريريا للسكتة الدماغية.
يستخدم نموذج السكتة الدماغية الإقفارية الأكثر شيوعا في القوارض انسداد الشريان الدماغي الأوسط داخل اللمعة (MCAO) للحث على السكتة الدماغية. في هذا النموذج ، الذي طورته Zea Longa في البداية في عام 1989 ، يتم إدخال خيوط نايلون في الشريان السباتي الداخلي (ICA) لمنع تدفق الدم إلى الشريان الدماغي الأوسط (MCA) 4. ومع ذلك ، فإن هذا النموذج له قيود. أولا ، عندما يتم إدخال الفتيل في ICA ، يمكن حظر تدفق الدم إلى الشريان الدماغي الخلفي (PCA) جزئيا أيضا ، خاصة في الفئران. بشكل حاسم ، فإن الشريان المتصل الخلفي (PcomA) ، وهو شريان صغير يربط الدورة الدموية الدماغية الأمامية والخلفية ، غالبا ما يكون متخلفا في بعض سلالات الفئران ، مثل C57Bl / 6 ، وهي السلالة المستخدمة في الغالب في أبحاث السكتة الدماغية التجريبية. يعتقد أن هذا المباح من PcomA يساهم في التباين في حجم الآفة في الفئران بعد السكتة الدماغية5. في الواقع ، عندما ينخفض تدفق الدم إلى PCA بشكل حاد خلال MCAO ، ولا يستطيع PcomA توفير تدفق دم جانبي كاف ، يمكن أن يتوسع احتشاء السكتة الدماغية إلى أراضي PCA. علاوة على ذلك ، في هذا النموذج ، تؤدي مدة نقص التروية الطويلة إلى زيادة فرصة الوفيات في الفئران. وبالتالي ، عادة ما يتم استخدام مدة MCAO قصيرة من 30-60 دقيقة في الفئران. ومع ذلك ، فإن معظم مرضى السكتة الدماغية يعانون من بضع ساعات من نقص التروية قبل علاج التروية. وبالتالي ، فإن نموذج ضربة الماوس مع مدة طويلة من نقص التروية له أهمية سريرية عالية. 
الهدف العام من هذا الإجراء هو نمذجة السكتة الدماغية الإقفارية في الفئران التي لديها احتشاء متوسط الحجم ومعدل بقاء ممتاز. يعالج نموذج MCAO عبر الجمجمة السمات الحرجة للسكتة الدماغية السريرية ، حيث يمكن إجراء نقص التروية لفترات طويلة ، وتتحمل الفئران المسنة هذا النموذج جيدا ، مما يسمح بالتقييم طويل الأجل للتعافي الوظيفي.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.25% bupivacaine</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-1159-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% sodium chloride</td>
			<td>ICU Medical</td>
			<td>NDC 0990-7983-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC)&#160;</td>
			<td>Sigma or any available vendor</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 G IV catheter</td>
			<td>BD</td>
			<td>381534</td>
			<td>20 GA 1.6 IN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Look</td>
			<td>SP116</td>
			<td>Black braided silk</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 suture with needle&#160;</td>
			<td>Ethilon</td>
			<td>2822G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol swabs</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia induction box</td>
			<td>Any suitable vendor</td>
			<td></td>
			<td>Pexiglass make&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical grinder</td>
			<td>JSDA</td>
			<td>JD 700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High temperature cautery loop tip</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>AA03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>NDC 11695-6777-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser doppler perfusion monitor</td>
			<td>Moor Instruments</td>
			<td>moorVMS-LDF1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant eye ointment</td>
			<td>Bausch + Lomb</td>
			<td>339081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse rectal probe</td>
			<td>Physitemp</td>
			<td>RET-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrous Oxide</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>UN1070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Otoscope</td>
			<td>Welchallyn</td>
			<td>728</td>
			<td>2.5 mm Speculum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>UN1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>CVS</td>
			<td>955338</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recovery box</td>
			<td>Brinsea&#160;</td>
			<td>TLC eco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>6100701</td>
			<td>Injectable 50 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent ventilator</td>
			<td>Harvard</td>
			<td>Model 683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature controller</td>
			<td>Physitemp</td>
			<td>TCAT-2DF&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibioric &#38; pain relief</td>
			<td>CVS</td>
			<td>NDC 59770-823-56</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporizer</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R583S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified transcranial middle cerebral artery occlusion model to study stroke outcomes in aged mice

في أبحاث السكتة الدماغية التجريبية ، يستخدم انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) بخيوط داخل اللمعة على نطاق واسع لنمذجة السكتة الدماغية الإقفارية في الفئران. يظهر نموذج MCAO الفتيل عادة احتشاء دماغي هائل في الفئران C57Bl / 6 التي تتضمن أحيانا أنسجة المخ في المنطقة التي يوفرها الشريان الدماغي الخلفي ، والذي يرجع إلى حد كبير إلى ارتفاع معدل رتق الشريان الخلفي المتصل. تعتبر هذه الظاهرة مساهما رئيسيا في ارتفاع معدل الوفيات الذي لوحظ في الفئران C57Bl / 6 أثناء التعافي من السكتة الدماغية على المدى الطويل بعد خيوط MCAO. وبالتالي ، فإن العديد من دراسات السكتة الدماغية المزمنة تستغل نماذج MCAO البعيدة. ومع ذلك ، فإن هذه النماذج عادة ما تنتج احتشاء فقط في منطقة القشرة ، وبالتالي ، فإن تقييم العجز العصبي بعد السكتة الدماغية يمكن أن يمثل تحديا. أنشأت هذه الدراسة نموذجا معدلا ل MCAO عبر الجمجمة يتم فيه إغلاق MCA في الجذع جزئيا إما بشكل دائم أو عابر عبر نافذة جمجمة صغيرة. نظرا لأن موقع الانسداد قريب نسبيا من أصل MCA ، فإن هذا النموذج يولد تلفا في الدماغ في كل من القشرة والمخطط. أظهر التوصيف المكثف لهذا النموذج معدل بقاء ممتاز على المدى الطويل ، حتى في الفئران المسنة ، بالإضافة إلى عجز عصبي يمكن اكتشافه بسهولة. لذلك ، يمثل نموذج الماوس MCAO الموصوف هنا أداة قيمة لأبحاث السكتة الدماغية التجريبية.

Nearly 800,000 people suffer a stroke in the US every year, and most of these strokes are ischemic in nature1. Timely restoration of the cerebral blood flow with tissue plasminogen activator (tPA) and/or thrombectomy is currently the most effective treatment for stroke patients; however, the full recovery of neurologic functions in the long term is rare2,3. Thus, searching for novel stroke therapy that targets functional improvement is an intense area of research that requires clinically relevant animal models of stroke. 
The most common ischemic stroke model in rodents uses intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) to induce stroke. In this model, initially developed by Zea Longa in 1989, a nylon filament is introduced into the internal carotid artery (ICA) to block the blood flow to the middle cerebral artery (MCA)4. However, this model has limitations. First, when the filament is inserted into the ICA, the blood flow to the posterior cerebral artery (PCA) could be partially blocked as well, especially in mice. Critically, the posterior communicating artery (PcomA), a small artery that connects anterior and posterior cerebral circulation, is frequently underdeveloped in some mouse strains, such as C57Bl/6, the strain predominantly used in experimental stroke research. This patency of the PcomA is believed to contribute to the variability in lesion size in mice after stroke5. Indeed, when blood flow to the PCA drops precipitously during MCAO, and the PcomA is unable to provide sufficient collateral blood flow, the stroke infarct can expand into the territory of the PCA. Moreover, in this model, a long duration of ischemia leads to a higher chance of mortality in mice. Consequently, a short MCAO duration of 30-60 min is typically used in mice. However, most stroke patients experience a few hours of ischemia before reperfusion treatment. Thus, a mouse stroke model with an extended duration of ischemia is of high clinical relevance. 
The overall goal of this procedure is to model ischemic stroke in mice that have a medium-sized infarct and an excellent survival rate. This transcranial MCAO model addresses critical attributes of clinical stroke, as prolonged ischemia can be performed, and aged mice tolerate this model well, allowing for the long-term assessment of functional recovery.

تسليط الضوء على المؤلف: التقنيات المبتكرة والاتجاهات المستقبلية في أبحاث السكتة الدماغية 

نموذج معدل لانسداد الشريان الدماغي الأوسط عبر الجمجمة لدراسة نتائج السكتة الدماغية في الفئران المسنة

Stroke affects nearly 800, 000 people annually in the US.Around 87%of this, ischemic, presenting as a severe medical condition. However, there are limited treatment options available especially during the chronic stroke phase. Our research aims to develop a recovery enhancing therapy to reduce disability and improve the quality of life for stroke patients.They widely use the filament, the middle cerebral artery occlusion model, as a drawback where the inserted filament can block a blood flow to the posterior cerebral artery. The C57BL/6 in mice often have an undisturbed posterior communicating artery leading to a high mortality in the later chronic stroke recovery phase. Our modified transcranial middle cerebral artery occlusion model partially across the MCA at the trunk generating brain damage in the cortex and the striatum via a small cranial window.This model achieves a high long-term survival rate, detectable neurological deficits, and works well even in aged mice. Our transcranial MCAO model can incorporate the critical attributes of clinical stroke, such as delayed reperfusion, neurological deficits, and aging factor. This model can be used to evaluate the therapeutical potential of new stroke treatments on long-term function recovery.

من خلال عرض مباشر تحت المجهر الجراحي ، يمكن التأكد بصريا من أن تدفق الدم MCA يتم حظره أثناء نقص التروية. أظهرت دراستنا السابقة انخفاضا بنسبة >80٪ في تدفق الدم في المنطقة الإقفارية باستخدام جهاز مراقبة دوبلر بالليزر6. من أجل تحديد تغيرات تدفق الدم بعد MCAO ، يمكن استخدام LSCI لمزيد من ?...

Watch this Scientific Journal Video about Innovative Techniques and Future Directions in Stroke Research at JoVE.com

يوضح هذا البروتوكول نموذجا فريدا لضربة الماوس مع احتشاء متوسط الحجم ومعدل بقاء ممتاز. يسمح هذا النموذج لباحثي السكتة الدماغية قبل السريرية بتمديد مدة نقص التروية ، واستخدام الفئران المسنة ، وتقييم النتائج الوظيفية طويلة الأجل.

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. ...

السكتة الدماغية تؤثر على ما يقرب من 800،000 شخص سنويا في الولايات المتحدة. حوالي 87 ٪ من هذا ، نقص تروية ، تظهر كحالة طبية خطيرة. ومع ذلك ، هناك خيارات علاج محدودة متاحة خاصة خلال مرحلة السكتة الدماغية المزمنة. يهدف بحثنا إلى تطوير علاج يعزز التعافي لتقليل الإعاقة وتحسين نوعية الحياة لمرضى السكتة الدماغية.يستخدمون على نطاق واسع الفتيل ، نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط ، كعيب حيث يمكن للخيوط المدرجة أن تمنع تدفق الدم إلى الشريان الدماغي الخلفي. غالبا ما يكون لدى C57BL / 6 في الفئران شريان خلفي متصل غير مضطرب مما يؤدي إلى ارتفاع معدل الوفيات في مرحلة التعافي من السكتة الدماغية المزمنة اللاحقة. نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط عبر الجمجمة المعدل جزئيا عبر MCA في الجذع مما يؤدي إلى تلف في الدماغ في القشرة والمخطط عبر نافذة قحفية صغيرة.يحقق هذا النموذج معدل بقاء مرتفع على المدى الطويل ، وعجز عصبي يمكن اكتشافه ، ويعمل بشكل جيد حتى في الفئران المسنة. يمكن أن يتضمن نموذج MCAO عبر الجمجمة السمات الحرجة للسكتة الدماغية السريرية ، مثل تأخر التروية والعجز العصبي وعامل الشيخوخة. يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم الإمكانات العلاجية لعلاجات السكتة الدماغية الجديدة على استعادة الوظيفة على المدى الطويل.

a-modified-transcranial-middle-cerebral-artery-occlusion-model-to

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice

1.9K Views.  Duke University Medical Center. السكتة الدماغية تؤثر على ما يقرب من 800،000 شخص سنويا في الولايات المتحدة. حوالي 87 ٪ من هذا ، نقص تروية ، تظهر كحالة طبية خطيرة. ومع ذلك ، هناك خيارات علاج محدودة متاحة خاصة خلال مرحلة السكتة الدماغية المزمنة. يهدف بحثنا إلى تطوير علاج يعزز التعافي لتقليل الإعاقة وتحسين نوعية ا?...

Video: تسليط الضوء على المؤلف: التقنيات المبتكرة والاتجاهات المستقبلية في أبحاث السكتة الدماغية 

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. The filament MCAO model typically exhibits a massive cerebral infarction in C57Bl/6 mice that sometimes includes brain tissue in the territory supplied by the posterior cerebral artery, which is largely due to a high incidence of posterior communicating artery atresia. This phenomenon is considered a major contributor to the high mortality rate observed in C57Bl/6 mice during long-term stroke recovery after filament MCAO. Thus, many chronic stroke studies exploit distal MCAO models. However, these models usually produce infarction only in the cortex area, and consequently, the assessment of post-stroke neurologic deficits could be a challenge. This study has established a modified transcranial MCAO model in which the MCA at the trunk is partially occluded either permanently or transiently via a small cranial window. Since the occlusion location is relatively proximal to the origin of the MCA, this model generates brain damage in both the cortex and striatum. Extensive characterization of this model has demonstrated an excellent long-term survival rate, even in aged mice, as well as readily detectable neurologic deficits. Therefore, the MCAO mouse model described here represents a valuable tool for experimental stroke research.

This protocol demonstrates a unique mouse stroke model with a medium-sized infarct and an excellent survival rate. This model allows preclinical stroke researchers to extend the ischemia duration, use aged mice, and assess long-term functional outcomes.

Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) to Induce Stroke in a Murine Model

To begin, lay an eight to 10 weeks anesthetized C57 black six male mouse on the surgical bench. Using blunt forceps, pull out the tongue and hold it with fingers. Insert a laryngoscope into the mouth and visualize the vocal cord.Stabilize the mouse chin on the laryngoscope and hold the 20 gauge intravenous, or IV catheter with a guide wire inserted in it. Then slightly insert the guide wire into the vocal cord and slowly push the 20 gauge IV catheter into the trachea until its wing part is even with the nose tip. Once the mouse is connected to the ventilator, keep it in a lateral position with the right temporal area facing up.Maintain the rectal temperature at 37 degrees Celsius using a heating pad and a heat lamp. After locating the zygomatic arch and incising the temporal muscle, use two forceps to dissect the underlying zygomatic arch and expose the joint between the maxilla and zygomatic bones. Then using scissors, cut a three millimeter portion of the zygomatic arch and remove it.Finally, separate the masseter muscle from the skull base. Position four small retractors in different directions and expose the cranial skull base with one retractor pulling the trigeminal nerve branches laterally. Apply a saline drop to the skull above the middle cerebral artery, or MCA trunk and proximal to the rhinal cortex branch.Use an electrical grinder to thin the skull until a small fracture is visible. And with the tip of the forceps, remove the thin skull. Place a single-strand loop of black braided silk on top of the MCA.Then insert an 8-O microsurgical needle to lift the MCA trunk and tie the suture under the needle, leaving the needle's two ends on top of the silk thread loop knot. For transient middle cerebral artery occlusion, or MCAO, slightly tighten the silk thread knot under the needle to block arterial blood flow, representing MCAO onset. Use the forceps to hold the suture and slowly remove the needle at the end of the ischemia.The laser speckle contrast imaging confirmed the reduced blood supply in the right MCA. For transient MCAO after suture removal, the cerebral blood flow reperfusion was evident, and further improved after 24 hours. TTC staining of the brain after 24 hours of stroke demonstrated the generation of infarcted tissue in both the cortical and lateral striatum areas in young and aged mice.The infarct size was moderate compared to filament MCAO.