تم دعم هذا العمل من قبل إدارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة جيلين (YDZJ202201ZYTS181).

تمت الموافقة على الإجراء الحيواني من قبل لجنة الأخلاقيات بجامعة تشانغتشون للطب الصيني (رقم السجل: 2021214). تم إيواء الفئران C57BL / 6J المحددة الخالية من مسببات الأمراض (8-10 أسابيع ، الوزن 18-22 جم) ، ذكورا وإناثا ، في أقفاص جيدة التهوية عند 22 درجة مئوية ورطوبة نسبية 65٪. بدأت الفئران التجربة بعد 7 أيام من التغذية التكيفية ، والتي كان لديهم خلالها حرية الوصول إلى الماء والنظام الغذائي.
1. إعداد المخدرات
<ol><li>إعداد LJZD ملاحظة: تم شراء الدواء الصيني المستخدم من المستشفى التابع لجامعة تشانغتشون للطب الصيني وتم تحديده على أنه دواء صيني حقيقي (انظر الجدول 1).<ol><li>ضع Dangshen (12 جم) ، Baizhu (12 جم) ، Gancao (6 جم) ، Chenpi (12 جم) ، Jiangbanxia (9 جم) في وعاء خزفي متخصص (انظر جدول المواد). أضف 1000 مل من الماء المقطر وانقعه في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة (انظر الشكل 1 أ).</li>
		<li>مسحوق 12 جم يقلب في مسحوق ناعم بمطحنة وينقع في 300 مل من الماء المقطر في وعاء آخر لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.</li>
		<li>امزج الدواء الصيني أعلاه في وعاء السيراميك المتخصص. اسلقي الخليط ثم اتركيه على نار متوسطة حتى يتبقى 300 مل فقط من ديكوتيون. استخدم الشاش الطبي للترشيح والحفاظ على المرشح في درجة حرارة الغرفة.</li>
		<li>أضف 1000 مل من الماء المقطر وكرر عملية ديكوتيون المذكورة أعلاه مرة أخرى. تصفية مرة أخرى باستخدام الشاش الطبي. يمزج المرشح ويغلى حتى يتبقى 150 مل فقط.</li>
		<li>قم بطرد السائل المركز عند 10000 × جم لمدة 5 دقائق ، وقم بزيادة تركيز المادة الطافية التي تم الحصول عليها إلى 30 مل على نار متوسطة. انقل المركز النهائي إلى طبق وجففه باستخدام فرن تجفيف كهربائي حتى يبقى المذاب فقط كمسحوق.</li>
		<li>قم بوزن المادة الصلبة المذكورة أعلاه وقم بإذابتها في ماء مقطر معقم للحصول على محلول يحتوي على 22.85 مجم من الدواء لكل 0.2 مل (114.16 مجم / مل) ، وهي الجرعة اليومية للفئران.</li>
	</ol></li>
	<li>إعداد 5-حمض الساليسيليك الأمينية ملاحظة: حمض الساليسيليك 5-amino (5-ASA ؛ انظر جدول المواد) له تأثير وقائي جيد على UC-CRC ، وقد تم استخدامه كدواء إيجابي في هذه الدراسة23.<ol><li>قم بإذابة 64 مجم مسحوق 5-ASA في 200 مل من الماء المقطر المعقم للحصول على محلول 1.82 مجم / مل 5-ASA. كانت الجرعة اليومية لفأر واحد 0.2 مل.</li>
	</ol></li>
	<li>تحضير محلول حقن AOM<ol><li>أضف 2.5 مل من الماء المقطر المعقم إلى مسحوق AOM 25 مجم (انظر جدول المواد) ، واخلطه بواسطة خلاط دوامة (انظر جدول المواد) لعمل محلول مخزون AOM سعة 10 مجم / مل ، واحفظه في -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.</li>
		<li>تحضير محلول حقن AOM عن طريق تخفيف محلول مخزون AOM بالماء المقطر المعقم عند 10: 1 (1 مجم / مل).</li>
	</ol></li>
</ol>2. إنشاء نموذج UC-CRC
ملاحظة: تم تقسيم التجربة إلى 4 مجموعات: مجموعة التحكم ، والنموذج ، و LJZD ، ومجموعة 5-ASA ، 10 فئران في كل مجموعة. باستثناء المجموعة الضابطة ، عولجت المجموعات الأخرى باستخدام AOM و DSS.
<ol><li>الحقن داخل الصفاق لمحلول حقن AOM ملاحظة: بعد التغذية التكيفية لمدة 7 د ، أعطيت الفئران محلول حقن AOM (1 ملغ / مل) عن طريق الحقن داخل الصفاق (انظر الشكل 1B).<ol><li>امسك الماوس مع بطنه لأعلى ورأسه لأسفل قليلا. أمسك الجلد الخلفي لشد جلد البطن واخترق الجلد حوالي 1 سم إلى يمين تقاطع خط الجذر لكلا الفخذين على خط منتصف البطن باستخدام حقنة سعة 1 مل (انظر جدول المواد).</li>
		<li>ادفع إبرة المحقنة سعة 1 مل لمسافة 3-5 مم تحت الجلد ، مع إبقائها موازية لخط الوسط البطني ، وأدخل الإبرة 0.3-0.5 مم في تجويف البطن بزاوية 45 درجة.</li>
		<li>بعد مرور الطرف عبر عضلة البطن ، يشعر المشغل بفقدان مفاجئ للمقاومة. بعد ذلك ، اسحب المحقنة للخارج والخلف لمراقبة ما إذا كان تسرب السائل يحدث. إذا لم يكن الأمر كذلك ، ادفع محلول حقن AOM ببطء إلى الفئران عند 0.1 مل / 10 جم.</li>
	</ol></li>
	<li>التحفيز الدوري لمحلول DSS 2٪ ملاحظة: تم إعطاء كل فأر مستحث ب AOM 500 مل من محلول DSS في الأسابيع 3 و 6 و 9 ، وشربت الفئران بحرية خلال هذه الفترة.<ol><li>قم بإعداد محلول DSS بنسبة 2٪ بإضافة 500 مل من الماء المقطر المعقم إلى 10 جم DSS (انظر جدول المواد). تخلط مع خلاط دوامة وتحفظ على حرارة 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.</li>
		<li>يشرب كل فأر مستحث ب AOM 500 مل من محلول DSS 2٪ بحرية لمدة 7 أيام في الأسابيع 3 و 6 و 9 بعد تحريض AOM.</li>
	</ol></li>
</ol>3. العلاج من تعاطي المخدرات
ملاحظة: يحتاج البشر البالغون إلى 63 جم LJZD يوميا. وفقا لصيغة تحويل جرعة الفئران التجريبية والدواء البشري ، كانت الجرعة التجريبية المكافئة للفئران (ملغم / كغم) = الجرعة البشرية (ملغم / كغم) / وزن الجسم (60 كجم) × 9.1 ، كانت الجرعة اليومية من الفئران حوالي 9.6 جم / كجم.
<ol><li>عالج مجموعة LJZD و 5-ASA ب 0.1 مل / 10 جم من محلول LJZD و 5-ASA المحضر عن طريق تجويف المعدة في الأسبوع 7 والأسبوع 15 على التوالي.<ol><li>للإعطاء داخل المعدة في الفئران ، قم بتنفيذ الإجراء التالي. امسك الماوس في اليد اليسرى ، وفي اليد اليمنى ، أمسك جهاز تروية المعدة. أدخل إبرة المحقنة في الفم وحركها أسفل الجدار الخلفي للبلعوم للفئران. انزلق لأسفل البلعوم بينما تبتلع الفئران واستمر في المضي قدما. عندما يكون هناك شعور بالمقاومة ، ويمكن دفع المحقنة إلى البلعوم ، اسحب الإبرة للخارج وأكمل الحقن.</li>
	</ol></li>
	<li>عالج مجموعة التحكم والطراز بنفس الكمية من المحلول الملحي (انظر جدول المواد).</li>
	<li>علاج الفئران في كل مجموعة مع الدواء المناسب مرة واحدة في اليوم في نفس الوقت خلال فترة الإدارة.</li>
</ol>4. تقييم نموذج UC-CRC وفعالية LJZD
<ol><li>درجة مؤشر نشاط المرض ملاحظة: وفقا للجدول 2 ، تم تقييم درجة مؤشر نشاط المرض (DAI) من خلال الجمع بين فقدان الوزن ولزوجة البراز ونزيف البراز للفئران.<ol><li>سجل وزن الفئران يوميا من بداية التغذية التكيفية حتى نهاية العلاج بالعقاقير.</li>
		<li>راقب اتساق البراز لكل فأر تجريبي بعناية وسجل حركات الأمعاء كواحدة من الحالات الثلاثة: البراز الطبيعي الرخو والإسهال المائي.</li>
		<li>سجل النزيف البرازي لحيوانات التجارب كواحد من الشروط الثلاثة: لا نزيف ، نزيف قليل ، ودم مرئي في البراز.</li>
	</ol></li>
	<li>الكشف عن مستوى IL-6 في المصل<ol><li>علاج الفئران مع LJZD أو 5-ASA لمدة 9 أسابيع. إصلاح الفئران عن طريق الإمساك جلد الرقبة من الماوس باليد اليسرى والضغط بلطف على الطاولة التجريبية لاتخاذ موقف الاستلقاء الجانبي. قطع شعيرات الفئران بالمقص. اقطع شعيرات الفئران بالمقص بعناية (انظر جدول المواد) لمنع تلوث الدم. ملاحظة: الفئران التي لا يمكن أن تذبذب بحرية اعتبرت ثابتة بشكل صحيح. إذا لم يحدث هذا ، يجب إصلاح الفئران.</li>
		<li>تخدير الماوس عن طريق استنشاق 2 ٪ إيزوفلوران. تعقيم الجلد حول مقلة العين بالإيثانول (انظر جدول المواد). اضغط على جلد العين على الجانب برفق لجعل مقلة العين مزدحمة وبارزة.</li>
		<li>المشبك مقلة العين مع ملقط الكوع وإزالة مقل العيون بدقة وبسرعة. اسمح للدم بالتنقيط في أنبوب الطرد المركزي (انظر جدول المواد). في هذه العملية ، اضغط على قلب الفأر لتسريع جمع الدم.</li>
		<li>احتفظ بالدم الذي تم جمعه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة وطرده مركزيا عند 3500 × جم لمدة 10 دقائق. اجمع المادة الطافية واكتشف مستوى IL-6 وفقا لتعليمات مجموعة أدوات اكتشاف محتوى IL-6 (انظر جدول المواد).</li>
	</ol></li>
	<li>فصل أنسجة القولون والمستقيم<ol><li>القتل الرحيم للفئران بعد أخذ عينات الدم عن طريق استنشاق 5٪ جرعة زائدة من الأيزوفلوران وخلع عنق الرحم (انظر جدول المواد) وفقا لأخلاقيات.</li>
		<li>الحفاظ على الفئران في بيئة تشريحية مبردة. شل حركة الفئران في وضع ضعيف. قص شعر أسفل البطن بالمقص وتعقيمه بالإيثانول.</li>
		<li>اضغط على نقطة التقاطع بين جذري الفخذ وخط الوسط البطني باستخدام ملقط الجفن (انظر جدول المواد). قطع شق عرضي حوالي 1-1.5 سم بالمقص.</li>
		<li>قم بقص شق طولي على طول الخط المتوسط للبطن من منتصف الشق المستعرض باتجاه عملية الخنجري.</li>
		<li>قم بإزالة الأنسجة المحيطة بالقولون والمستقيم في اتجاه فتحة الشرج لفصل القولون والمستقيم عن الأنسجة المحيطة. احرص على عدم إتلاف القولون والمستقيم.</li>
		<li>ادفع جلد البطن إلى الجانبين لفضح القولون والمستقيم بالكامل. إزالة القولون والمستقيم من تجويف البطن مع ملقط الجفن وقطع الأجزاء من فتحة الشرج إلى الأعور (باستثناء) ؛ الطول الإجمالي حوالي 10 سم. قم بتخزين أنسجة القولون والمستقيم التي تم الحصول عليها في محلول ملحي عند 4 درجات مئوية.</li>
	</ol></li>
	<li>تقييم طول ووزن المستقيم<ol><li>استخرج المحلول الملحي عند 4 درجات مئوية بإبرة 5 مل (انظر جدول المواد) لشطف القولون والمستقيم من الداخل. ثم ضع القولون والمستقيم على ورق ماص لامتصاص رطوبة الأنسجة.</li>
		<li>قم بوزن أنسجة القولون والمستقيم ثم ضعها على ورق A4 لقياس طولها.</li>
	</ol></li>
	<li>قياس عدد الأورام في القولون والمستقيم<ol><li>قطع القولون والمستقيم بالطول لفتحه بالكامل ومراقبة عدد وحجم الأورام في القولون والمستقيم.</li>
	</ol></li>
	<li>التحليل المرضي للمستقيم<ol><li>إصلاح القولون والمستقيم في 4 ٪ بارافورمالدهيد لمدة 24 ساعة. قم بتضمين أنسجة المستقيم الثابتة في البارافين المذاب والمقطع بشكل مستمر بسمك 5 ميكرومتر بواسطة ميكروتوم تجميد الأنسجة.</li>
		<li>وفقا لإجراء Hou et al.24 ، قم بإزالة الشمع من الأقسام الموجودة في الزيلين ثم قم بتجفيفها بتركيزات تسلسلية من الإيثانول. بعد تلطيخ بمحلول الهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق ، شطف الأقسام بالماء النقي. بعد ذلك ، وصمة عار مع محلول eosin 0.5 ٪ لمدة 1 دقيقة (انظر جدول المواد).</li>
		<li>قم بإجراء تجفيف متدرج وعلاج شفاف للزيلين مرة أخرى. أغلق الأقسام وراقبها تحت المجهر الضوئي (انظر جدول المواد) والصورة الفوتوغرافية ، كما وصفها Xie et al.25.</li>
	</ol></li>
	<li>التحليل المناعي الكيميائي للقولون والمستقيم<ol><li>إزالة الشمع وتجفيف الأقسام وفقا للطريقة المذكورة أعلاه. إصلاح المستضد في الأقسام بتقنية الإصلاح الحراري عالي الضغط ، كما هو موضح بواسطة Gok et al.26.</li>
		<li>نقع الأقسام في حاصرات البيروكسيديز الذاتية في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. ختم الأقسام بمصل الماعز (انظر جدول المواد).</li>
		<li>أضف الجسم المضاد الأساسي ZO-1 (1: 1000) و Occludin (1: 1000) و KI67 (1: 500 ؛ انظر جدول المواد) إلى الأقسام واحتضانها طوال الليل عند 4 درجات مئوية. اشطف الأقسام بمخزن مؤقت PBS (انظر جدول المواد) ، وأضف جسما مضادا ثانويا للأغراض العامة (1: 5000 ؛ انظر جدول المواد) إليه واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.</li>
		<li>أضف حل DAB (انظر جدول المواد) إلى الأقسام لتطوير اللون. عكس المقاطع بمحلول الهيماتوكسيلين.</li>
		<li>قم بتجفيف الأقسام وشفافيتها وإغلاقها مرة أخرى. مراقبة التعبير عن البروتين بواسطة المجهر الضوئي.</li>
	</ol></li>
</ol>

Liujunzi مغلي: علاج فعال للوقاية من UC-CRC

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

يعد CRC أحد أكثر أنواع السرطان شيوعا في جميع أنحاء العالم ، مع ما يقرب من 1,148,000 حالة جديدة وأكثر من 576,000 حالة وفاة كل عام. يمكن تقسيم اتفاقية حقوق الطفل إلى ثلاثة أنواع وفقا لأسباب مختلفة ، بما في ذلك وراثية ومتفرقة و UC-CRC31. معدل حدوث CRC في المرضى الذين يعانون من أمراض الأمعاء الالت?...

سرطان القولون والمستقيم (CRC) هو ورم خبيث شائع في الجهاز الهضمي ، وهو ثالث أكثر الأورام الخبيثة شيوعا ، وثاني أكثر أسباب الوفاة شيوعا في العالم ، حيث يمثل 10٪ من حالات الإصابة بالسرطان في العالم و 9.4٪ من إجمالي الوفيات المرتبطة بالسرطان 1,2. العوامل الوراثية ، والالتهابات المزمنة ، والنظام الغذائي عالي الدهون ، ومرض السكري ، والنباتات المعوية غير الطبيعية هي عوامل خطر ل CRC 3,4. من بينها ، مرض التهاب الأمعاء ، وخاصة التهاب القولون التقرحي (UC) ، هو عامل خطر واضح ل CRC 5,6. CRC (UC-CRC) المرتبطة بجامعة كاليفورنيا هي عملية انتقالية من الالتهاب وفرط التنسج اللانمطي والسرطان بناء على التهاب مزمن في القولون والمستقيم ، والذي يختلف عن نموذج تطوير الورم الحميد والسرطان الغدي النموذجي لاتفاقية حقوق الطفل 7,8. بالمقارنة مع عامة السكان ، فإن خطر الإصابة ب CRC أعلى بحوالي 10-40 مرة في المرضى الذين يعانون من مرض التهاب الأمعاء9.
حاليا ، لا تزال الجراحة هي العلاج القياسي ل CRC ، واعتمادا على موقع الورم ومرحلته ، فإن العلاج الإشعاعي أو العلاج الدوائي الجهازي أو مزيج من الاثنين ممكنان10. على الرغم من أن طرق العلاج التقليدية هذه قد أحرزت تقدما كبيرا ، نظرا لارتفاع معدل عدم التجانس وتكرار CRC ، إلا أن التشخيص ضعيف ، وتأثير العلاج ليس مثاليا11,12. لذلك ، يعد الكشف المبكر والتشخيص المبكر والعلاج الشامل أمرا أساسيا لتحسين معدل بقاء مرضى CRC ، ومن المهم بشكل خاص الانتباه إلى تحويل UC إلى CRC. على مر السنين ، اجتذب الطب الصيني التقليدي (TCM) الكثير من الاهتمام في علاج UC-CRC أو التهاب المعدة المزمن بسبب آثاره الجانبية المحدودة وفعاليته الكبيرة. استنادا إلى العلاج الجدلي ، ابتكر ممارسو الطب الصيني المشهورون من أجيال مختلفة عددا كبيرا من الوصفات الكلاسيكية ، مثل Huangqi Jianzhong decoction13 و Sijunzi decoction14 و Sishen pill15.
نشأ Liujunzi decoction (LJZD) من أعمال Yi Xue Zheng Zhuan التي تم تجميعها في عهد أسرة مينغ وهي وصفة طبية كلاسيكية في TCM16. كما هو موضح في الجدول 1 ، يتكون LJZD من ستة أعشاب تقليدية ، بما في ذلك Codonopsis pilosula (Franch.) نانف. (دانجشين) ، بوريا كوكوس (شو.) الذئب (فولينغ) ، أتراكتيلوديس ماكروسيفالا كويدز. (بايتشو) ، غليسيرهيزا أورالينسيس فيش. (غانكاو) ، الحمضيات شبكية بلانكو (تشينبي) وبينيليا تيرناتا (ثونب.) Breit (Banxia) ، الذي له تأثير في تجديد تشي وتقوية الطحال ، وتجفيف الرطوبة ، وحل البلغم. في الممارسة السريرية الحديثة ، غالبا ما يستخدم لعلاج التهاب المعدة المزمن وقرحة المعدة وقرحة الاثني عشر. أظهرت الأبحاث الدوائية الحديثة أن LJZD و LJZD المعدل لهما قيمة تطبيق عالية في العلاج المساعد لسرطان UC وسرطان الجهاز الهضمي17،18،19.
في الوقت الحاضر ، هناك العديد من الطرق لبناء نماذج الفئران UC-CRC ، ولكن نموذج الماوس الناجم عن أزوكسي ميثان (AOM) / ديكستران كبريتات الصوديوم (DSS) هو نموذج UC-CRC الأكثر استخداما. أثبتت الأعراض السريرية والملاحظات المورفولوجية والمرضية أن النموذج مشابه جدا ل UC-CRCالبشري 20,21. المبدأ الأساسي هو أولا إحداث التسرطن باستخدام مادة كيميائية مسرطنة AOM ثم تعريض الفئران باستمرار لبيئة التحفيز الالتهابية ل DSS لمحاكاة الضرر المستمر وإصلاح ظهارة الغشاء المخاطي المعوي ، وبالتالي بناء نموذج الماوس UC-CRC22. الهدف من هذه الدراسة هو إنشاء نموذج فأر ل UC-CRC عن طريق الحقن داخل الصفاق ل AOM والتحفيز الدوري ل DSS على المدى القصير وتقييم تأثير الدواء والآلية الجزيئية ل LJZD على UC-CRC من أجل توفير أساس علمي لعلاج UC-CRC.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-amino salicylic acid</td>
			<td>Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td>3819413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>NO 210726210100853716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slip</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>10212432C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB color development kit</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>2005289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dewatering machine&#160;</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JJ-12J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran sulfate sodium</td>
			<td>Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>MB5535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin-eosin dye</td>
			<td>Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>B1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-6</td>
			<td>Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd</td>
			<td>MM-0163M2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd</td>
			<td>R510-22-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KI67 primary antibody</td>
			<td>Google Biotechnology Inc</td>
			<td>GB121141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Object slide</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>10212432A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Occludin primary antibody</td>
			<td>Affnity</td>
			<td>DF7504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orthostatic optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathological microtome</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZO-1 primary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab221547</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of coloproctitis cancer model in mice and evaluation of therapeutic effect of chinese medicine

سرطان القولون والمستقيم (CRC) هو ورم خبيث شائع في الجهاز الهضمي وأصبح ثالث أكثر الأورام الخبيثة شيوعا في جميع أنحاء العالم والسبب الرئيسي الثاني للوفاة المرتبطة بالأورام الخبيثة. التهاب القولون التقرحي (UC) هو آفة سرطانية ، و CRC (UC-CRC) المرتبطة ب UC هي النوع الفرعي الأكثر شيوعا من CRC. لذلك ، فإن نموذج UC-CRC المعقول هو حجر الزاوية والضمان لتطوير أدوية جديدة. يستخدم الطب الصيني التقليدي (TCM) على نطاق واسع في علاج UC-CRC بسبب فعاليته الجيدة. كوصفة طبية منشط كلاسيكية من الطب الصيني التقليدي ، تم استخدام Liujunzi decoction (LJZD) على نطاق واسع في علاج UC-CRC. في هذه الدراسة ، تم إنشاء نموذج UC-CRC من خلال الجمع بين أزوميثان وكبريتات ديكستران الصوديوم ، وتم إعطاء LJZD. أكدت البيانات أن LJZD يمكن أن يمنع بشكل فعال انتقال السرطان في UC-CRC باستخدام وزن جسم الفأر وطول القولون والمستقيم والعوامل المرضية والالتهابية ووظيفة حاجز القولون والمستقيم وعلامات السرطان. يوفر هذا البروتوكول نظاما لتقييم فعالية الطب الصيني التقليدي في الوقاية والعلاج من UC-CRC.

Colorectal cancer (CRC) is a common gastrointestinal malignancy, the third most common malignancy, and the second most common cause of death in the world, accounting for 10% of the global cancer incidence and 9.4% of the total cancer-related death1,2. Genetic factors, chronic inflammation, high-fat diet, diabetes, and abnormal intestinal flora are risk factors for CRC3,4. Among them, inflammatory bowel disease, especially ulcerative coloproctitis (UC), is a clear risk factor for CRC5,6. UC-associated CRC (UC-CRC) is a transition process of inflammation, atypical hyperplasia, and cancer based on chronic inflammation of the colorectum, which is different from the typical adenoma-adenocarcinoma development model of CRC7,8. Compared with the general population, the risk of CRC is approximately 10-40 times higher in patients with inflammatory bowel disease9.
Currently, surgery is still the standard treatment for CRC, and depending on the location and stage of the tumor, radiation therapy, systemic drug therapy, or a combination of both are possible10. Although these traditional treatment modalities have made great progress, due to the high heterogeneity and recurrence rate of CRC, the prognosis is poor, and the treatment effect is not ideal11,12. Therefore, early detection, early diagnosis, and comprehensive treatment are key to improving the survival rate of CRC patients, and it is particularly important to pay attention to the transformation of UC to CRC. Over the years, traditional Chinese medicine (TCM) has attracted much attention in the treatment of UC-CRC or chronic gastritis due to its limited side effects and significant efficacy. Based on dialectical treatment, famous Chinese medicine practitioners of various generations have created a large number of classic prescriptions, such as Huangqi Jianzhong decoction13, Sijunzi decoction14, and Sishen pill15.
Liujunzi decoction (LJZD) originated from the works of Yi Xue Zheng Zhuan compiled in the Ming Dynasty and is a classic prescription in TCM16. As shown in Table 1, LJZD consists of six traditional herbs, including Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. (Dangshen), Poria cocos (Schw.) Wolf (Fuling), Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu), Glycyrrhiza uralensis Fisch. (Gancao), Citrus reticulata Blanco (Chenpi) and Pinellia ternata (Thunb.) Breit (Banxia), which has the effect of replenishing qi and strengthening the spleen, drying dampness, and resolving phlegm. In modern clinical practice, it is often used to treat chronic gastritis, gastric ulcers, and duodenal ulcers. Modern pharmacological research has shown that LJZD and modified LJZD have high application value in the adjuvant treatment of UC and digestive tract cancer17,18,19.
At present, there are many ways to construct UC-CRC mouse models, but the azoxymethane (AOM)/dextran sulfate sodium (DSS) induced mouse model is the most widely used UC-CRC model; the clinical symptoms, morphological, and pathological observations have proved that the model is very similar to human UC-CRC20,21. The basic principle is to first induce carcinogenesis with chemical carcinogen AOM and then continuously expose mice to the inflammatory stimulation environment of DSS to simulate the continuous damage and repair of intestinal mucosal epithelium, thereby constructing a UC-CRC mouse model22. The aim of this study is to establish a mouse model of UC-CRC by intraperitoneal injection of AOM and cyclic stimulation of DSS in the short term and to evaluate the effect of the drug and the molecular mechanism of LJZD on UC-CRC in order to provide a scientific basis for the treatment of UC-CRC.

تسليط الضوء على المؤلف: Liujunzi ديكوتيون كعلاج صيني تقليدي لسرطان التهاب القولون

إنشاء نموذج سرطان التهاب القولون والمستقيم في الفئران وتقييم التأثير العلاجي للطب الصيني

This study was on the prevention and treatment of coloproctitis cancer with traditional Chinese medicine. We aim to establish a mouse model for coloproctitis cancer and evaluate traditional Chinese medicine indicators. We confirmed that the Chinese medicine Liujunzi decoction is a effective treatment for coloproctitis cancer prevention.In the future, we will work to identify more sensitive biomarkers for colon and rectal cancer and screen Liujunzi decoction for therapeutic targets.

تم تحضير ديكوتيون من LJZD وفقا لنسبة تكوين الأدوية في الجدول 1 وطريقة ديكوتيون من TCM في الشكل 1A. وفقا للنقطة الزمنية المشار إليها في الشكل 1B ، تم حقن الفئران داخل الصفاق ب 1 مجم / مل AOMفي اليوم السابع ، وتم منح الفئران حرية الوصول إلى مياه الشرب الت...

Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Liujunzi Decoction as a Traditional Chinese Treatment for Coloproctitis Cancer at JoVE.com

يوفر هذا البروتوكول نموذجا للفأر لسرطان القولون والمستقيم المرتبط بالتهاب القولون التقرحي الناجم عن الأزوميثان مع كبريتات ديكستران الصوديوم. تم استخدام النموذج لتقييم فعالية مركبات الطب الصيني التقليدي في الوقاية والعلاج من سرطان القولون والمستقيم.

Colorectal cancer (CRC) is a common malignancy of the digestive system and has become the third most common malignancy worldwide and the second leading ...

كانت هذه الدراسة حول الوقاية والعلاج من سرطان التهاب القولون مع الطب الصيني التقليدي. نهدف إلى إنشاء نموذج فأر لسرطان التهاب القولون وتقييم مؤشرات الطب الصيني التقليدي. أكدنا أن الدواء الصيني Liujunzi ديكوتيون هو علاج فعال للوقاية من سرطان التهاب القولون.في المستقبل ، سنعمل على تحديد المؤشرات الحيوية الأكثر حساسية لسرطان القولون والمستقيم وفحص Liujunzi decoction للأهداف العلاجية.

establishment-coloproctitis-cancer-model-mice-evaluation-therapeutic

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment of Coloproctitis Cancer Model in Mice and Evaluation of Therapeutic Effect of Chinese Medicine

596 Views.  Changchun University of Chinese Medicine. كانت هذه الدراسة حول الوقاية والعلاج من سرطان التهاب القولون مع الطب الصيني التقليدي. نهدف إلى إنشاء نموذج فأر لسرطان التهاب القولون وتقييم مؤشرات الطب الصيني التقليدي. أكدنا أن الدواء الصيني Liujunzi ديكوتيون هو علاج فعال للوقاية من سرطان التهاب القولون.في المستقبل ، سنع...

Video: تسليط الضوء على المؤلف: Liujunzi ديكوتيون كعلاج صيني تقليدي لسرطان التهاب القولون

Colorectal cancer (CRC) is a common malignancy of the digestive system and has become the third most common malignancy worldwide and the second leading cause of malignancy-related death. Ulcerative coloproctitis (UC) is a precancerous lesion, and UC-associated CRC (UC-CRC) is the most common subtype of CRC. Therefore, a reasonable UC-CRC model is the cornerstone and guarantee of new drug development. Traditional Chinese medicine (TCM) has been widely used in the treatment of UC-CRC due to its good efficacy. As a classic tonic prescription of TCM, Liujunzi decoction (LJZD) has been widely used in the treatment of UC-CRC. In this study, a UC-CRC model was established by combining azomethane and dextran sulfate sodium, and the LJZD was administered. The data confirmed that LJZD can effectively inhibit cancer transition in UC-CRC by using mouse body weight, colorectal length, pathological and inflammatory factors, colorectal barrier function, and cancer markers. This protocol provides a system for evaluating the efficacy of TCM in the prevention and treatment of UC-CRC.

This protocol provides a mouse model of ulcerative coloproctitis-associated colorectal cancer induced by azomethane combined with dextran sulfate sodium. The model was used to evaluate the efficacy of traditional Chinese medicine compounds in the prevention and treatment of colorectal cancer.

Preparation of Liujunzi Decoction (LJZD) for the Treatment of Ulcerative Coloproctitis-Colorectal Cancer  (UC-CRC)

To begin place Dang Shen, Bai Zhu, into a specialized ceramic pot. Add 1000 milliliters of distilled water and let it soak at room temperature for one hour. Using a grinder, grind 12 grams of Fu ling into a fine powder.Then, soak the powdered Fu ling in 300 milliliters of distilled water in a separate container for one hour at room temperature. Mix the prepared Chinese herbal mixture in the specialized ceramic pot. Boil the mixture and maintain it over medium heat until the decoction volume reduces to 300 milliliters.Combine the filtrate obtained from the decoction and continue boiling until the volume reduces to 150 milliliters. Then centrifuge the concentrated liquid at 10, 000 G for five minutes. Concentrate the obtained supernatant to 30 milliliters over medium heat.Transfer the final concentrate to a dish and dry it using an electric drying oven until only the solute remains as a powder. Now, weigh the obtained powder, and dissolve it in sterile distilled water to create the daily dosage for mice. To prepare five amino salicylic acid, weigh 64 milligrams of five amino salicylic acid powder, and dissolve it in 200 milliliters of sterile distilled water.

تحضير ليوجونزي ديكوتيون (LJZD) لعلاج التهاب القولون التقرحي وسرطان القولون والمستقيم (UC-CRC)

Establishment of an Ulcerative Coloproctitis-Colorectal Cancer (UC-CRC) Model to Evaluate the Therapeutic Effect of Chinese Medicine

To begin, gently position the mouse with its belly up and the head slightly down. Grasp the back skin to secure the abdominal area and insert a one milliliter syringe needle, one centimeter to the right of the midline of the abdomen at the intersection of the line, connecting both thighs. Gradually insert the one milliliter syringe needle to a depth of three to five millimeters under the skin.Insert the needle approximately 0.3 to 0.5 millimeters into the abdominal cavity at a 45 degree angle. Once the needle tip passes through the abdominal muscle, notice a sudden decrease in resistance. Slowly inject 0.1 milliliters of the azoxymethane injection solution per 10 grams of body weight into the mice.Subsequently, retract the syringe gently. Then add 500 milliliters of sterile distilled water to 10 grams of DSS. To prepare a 2%DSS solution.Mix the solution with a vortex mixer and store at four degrees Celsius until use, administer the prepared LJZD and five amino salicylic acid solution daily at a consistent time via gastric gavage to the respective groups at week seven and week 15.

إنشاء نموذج التهاب القولون والمستقيم التقرحي - سرطان القولون والمستقيم (UC-CRC) لتقييم التأثير العلاجي للطب الصيني

Evaluation of an Ulcerative Coloproctitis-Colorectal Cancer (UC-CRC) Model and Efficacy of Liujunzi Decoction (LJZD)

To begin, establish the UC-CRC mouse model and administer the prepared LJZD and 5-ASA solution to the respective groups. After the drug treatment, monitor the weight of mice daily from the beginning of adaptive feeding until the end of drug treatment. Diligently observe and document the fecal consistency of each experimental mouse, categorizing it as normal, loose stools or watery diarrhea.Carefully document any fecal bleeding observed in the experimental animals, categorizing it into no bleeding, minimal bleeding, or visible blood in the stool. To separate the colorectal tissue, maintain the euthanized mice within a cryogenic anatomical environment. Secure the mice in a supine position.Using scissors, trim the lower abdominal hair and sterilize the area with ethanol. Using eyelid forceps, gently grasp the intersection point between the two thigh roots and the abdominal midline. Then use scissors to create a one to 1.5 centimeters long transverse incision.Perform a longitudinal incision along the median line of the abdomen, starting from the midpoint of the transverse incision to the xiphoid process. Carefully detach the peri-colorectal tissues in the direction towards the anus, separating the colorectum rom the surrounding tissue. Gently push aside the abdominal skin to fully expose the colorectum.Using eyelid forceps, extract the colorectum from the abdominal cavity and section it from the anus to the cecum. Preserve the collected colorectal tissues in saline at four degrees Celsius. The UC-CRC model group had a significant weight loss compared to the control group which was alleviated by LJZD treatment.LJZD treatment improved the disease activity index compared with the UC-CRC model group.