يتم دعم العمل الحالي بمنح من (1) المؤسسة الوطنية لعلوم الطبيعة (81973877 و 82174408) ، (2) البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2020YFE0201600) ، (3) مشروع بناء مركز شنغهاي للأبحاث ذات الأولوية القصوى (2022ZZ01009) ، (4) مركز شنغهاي للابتكار التعاوني للتحول الصناعي لإعداد الطب الصيني التقليدي للمستشفى ، و (5) مشاريع بحثية ضمن ميزانية جامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي (2021LK047).

يصف هذا البروتوكول تقنية التزويج التفصيلية في الفئران النموذجية للساركوما العظمية باستخدام ديكوتيون Yiqi Jiedu كعينة. تم استخدام ذكور الفئران الأثيمية البالغة من العمر أربعة أسابيع (BALB / c nude) في هذه التجربة وتم الاحتفاظ بها في غرفة تربية SPF في مركز المختبر في جامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي. تمت الموافقة على جميع التجارب على من قبل إدارة ولجنة جامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي ، وامتثلت لمدونة أخلاقيات المختبر (رقم الموافقة على أخلاقيات: PZSHUTCM2304060007) ، وأجريت بما يتفق بدقة مع المتطلبات الدولية المتعلقة بحيوانات المختبر.
1. المواد
<ol><li>احصل على المواد التالية: الأعشاب الصينية (الجينسنغ 42 جم ، Hedyotis diffusa 52.5 جم ، عشب القلنسوة الشائكة 31.5 جم) ، حقنة 1 مل ، وإبرة تجويف الكوع 12 جم / 55 مم (الشكل 1).</li>
</ol>2. تحديد الجرعة
<ol><li>احسب الجرعة اليومية على النحو التالي: الجرعة اليومية للبالغين الذين يبلغ وزنهم القياسي 60 كجم هي الجينسنغ 12 جم ، Hedyotis diffusa 15 جم ، وعشب قلنسوة الشائكة 9 جم ، بإجمالي 36 جم دواء جاهز ديكوتيون ، أي 0.6 جم من الأدوية الجاهزة ديكوتيون / كجم من وزن الجسم. بالإشارة إلى 12 مرة للجرعة المكافئة ، و 6 مرات للجرعة المنخفضة ، و 24 مرة للجرعة العالية بين البالغين الذين يبلغ وزن الجسم القياسي 60 كجم والفئران ذات وزن الجسم القياسي 25 جم وفقا لمساحة سطح الجسم11 ، بالإضافة إلى بياناتنا الأولية ، استخدم نسبة جرعة 20 مرة من Yiqi Jiedu decoction للفئران في الدراسة الحالية ، لذلك ، كانت جرعة الفئران 12 جم من الأدوية الجاهزة ديكوتيون / كجم من وزن الجسم.</li>
	<li>احسب الجرعة لكل ماوس باستخدام المعادلة: جرعة الفأر (وزن جسم الحامل) = جرعة للبالغين (وزن جسم الحامل) × 20 (نسبة الجرعة المكافئة المحددة). الجرعة اليومية لكل فأر هي 0.3 جم [(12 جم أدوية جاهزة ديكوتيون / 1000 جم من وزن الجسم) × 25 جم من وزن الجسم] في 200 ميكرولتر بتركيز نهائي قدره 1.5 جم / مل.</li>
	<li>احسب إجمالي الأدوية الجاهزة للديكوتيون للفئران (ن = 7) في مجموعة Yiqi Jiedu decoction مع إعطاء gavage لمدة 28 يوما ليكون 58.8 جم. ركز هذا إلى 39.2 mL للوصول إلى تركيز نهائي قدره 1.5 g/mL.</li>
	<li>النظر في فقدان المخدرات المحتملة خلال مراحل ديكوتيون و gavage ، ولتسهيل الحساب ، وإعداد ما مجموعه 126 غرام (الجينسنغ 42 غرام ، Hedyotis diffusa 52.5 غرام ، عشب قلنسوة الشائكة 31.5 غرام) دواء جاهز ديكوتيون ، والتركيز في حجم نهائي من 84 مل.</li>
</ol>3. مصدر الخلية والثقافة
<ol><li>قم بشراء خلايا الساركوما العظمية 143B المشتقة من الإنسان من بنك خلايا ATCC.</li>
	<li>بذرة 1 × 106 143 خلية B في 10 مل من وسط MEM تحتوي على 10٪ FBS و 100 U / mL من البنسلين و 100 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين في طبق زراعة الخلايا 10 سم.</li>
	<li>زراعة خلايا 143B عند 37 درجة مئوية في حاضنة CO2 بنسبة 5٪ حتى تتلاقى الخلايا بنسبة 80٪ -90٪.</li>
</ol>4. طرق النمذجة
<ol><li>اجمع 80٪ من خلايا 143B المستنبتة المتقاربة ، وأعد تعليقها في 6 مل من وسط MEM المحتوي على 10٪ مصل واخلطها مع هلام مصفوفة الغشاء القاعدي بنسبة حجم 1: 1 لعمل تعليق خلية بتركيز نهائي 1 × 107 خلايا / مل.</li>
	<li>حقن 10 ميكرولتر من معلق الخلية في الساق اليسرى لكل فأر أثيمي لإنشاء نموذج فأر ساركوما عظمية في الموقع ، كما هو موضح في منشورنا السابق12. الخطوات باختصار هي كما يلي.<ol><li>اغسل الخلايا 2x باستخدام برنامج تلفزيوني. التربسين الخلايا مع 1.5 مل من 0.25 ٪ التربسين لمدة 3 دقائق. أضف 6 مل من وسائط MEM المحتوية على 10٪ مصل. اجمع الخلايا في أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل.</li>
		<li>نضح 20 ميكرولتر من تعليق الخلية في غرفة لوحة عد الخلايا وحساب تركيز الخلية باستخدام عداد الخلية التلقائي. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 800 × غرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.</li>
		<li>تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة ، وأعد تعليق حبيبات الخلية في مصفوفة غشاء القاعدية 8.5 مجم / مل ، وضعها على الثلج.</li>
		<li>تخدير الفئران عن طريق تعريضها ل 2٪ إيزوفلوران و 98٪ أكسجين (معدل تدفق الأكسجين ، 2 لتر / دقيقة). ضع كمية صغيرة من مرهم الطبيب البيطري على العينين لمنع الجفاف أثناء التخدير.</li>
		<li>نفذ الإجراء بأكمله في منطقة جيدة التهوية. قبل حقن خلايا الساركوما العظمية ، تأكد من أن كل فأر يخضع للتخدير العميق عن طريق لمس القدم برفق ؛ إذا كان الماوس لا يزال لديه استجابات ، مثل نشل أو رعشة. انتظر لفترة أطول إذا كان الماوس لا يزال لديه استجابات ، مثل نشل أو رعشة ، حتى تختفي هذه الاستجابات.</li>
		<li>ضع الماوس في وضع ضعيف. امسك كاحل الماوس باستخدام الإبهام والسبابة وقم بتطهير موقع حقن الساق بثلاث جولات متناوبة من البيتادين و 70٪ من الإيثانول.</li>
		<li>قم بتوصيل الإبرة بمحقنة سعة 1 مل ووجه طرف الإبرة نحو موقع الحقن الموازي لمحور الظنبوب. أدخل الإبرة عن طريق الجلد لحفر ثقب عبر منصة الساق باتجاه الطرف البعيد من الساق.</li>
		<li>قم بتحميل معلق خلايا الساركوما العظمية الذي تم وضعه مسبقا على الثلج في حقنة ميكروحجمية واستبدل المحقنة سعة 1 مل في الساق بحقنة ميكروحجمية محملة بخلايا الساركوما العظمية. حقن ببطء ما يقرب من 10 ميكرولتر من (1 × 107 خلايا / مل) معلق خلايا الساركوما العظمية في قصبة كل فأر أثيمي.</li>
		<li>قم بإزالة المحقنة ذات الحجم الصغير من موقع الحقن ، واضغط على موقع الحقن بقطعة القطن لمدة 30 ثانية تقريبا. ضع الماوس مرة أخرى في قفص نظيف ولاحظ تعافيه لمدة 10 دقائق.</li>
	</ol></li>
</ol>5. إعداد صيغة مغلي الطب الصيني التقليدي للتزجيج (الشكل 2)
<ol><li>احسب الجرعة حسب الخطوة 2.</li>
	<li>نقع جميع الأعشاب الطبية لديكوتيون ، باستثناء عشب الجينسنغ باهظة الثمن ، في مياه الشرب مع مستوى 3 سم أعلى من سطح الدواء ، لمدة 30 دقيقة ، ثم أداء ديكوتيون 2x كما هو موضح أدناه.</li>
	<li>قم بإجراء ديكوتيون الأول عن طريق التسخين حتى الغليان على نار قوية ، ثم التسخين لمدة 15-25 دقيقة على نار خفيفة. يشير الحريق المعتدل إلى حرارة منخفضة الطاقة تتراوح درجات الحرارة عادة من 80 درجة مئوية إلى 100 درجة مئوية ، بينما يشير الحريق القوي إلى حرارة عالية الطاقة تتراوح عادة من 200 درجة مئوية إلى 300 درجة مئوية.</li>
	<li>صب السائل ديكوتيون في حاوية واحدة.</li>
	<li>قم بإجراء ديكوتيون الثاني عن طريق تسخين الأعشاب الطبية في مياه الشرب ، بحجم يكفي فقط لغمر سطح الدواء ، ليغلي على نار قوية ، ثم يسخن لمدة 15-25 دقيقة على نار خفيفة.</li>
	<li>صب السائل ديكوتيون في نفس الحاوية كما في الخطوة 5.4.</li>
	<li>نقع و decoct 42 غرام من الجينسنغ بشكل منفصل ، مع مياه الشرب 3 سم أعلى من سطح الدواء ، لأنه مكلف.</li>
	<li>أداء ديكوتيون الأول من الجينسنغ غارقة عن طريق تسخينه على نار قوية لمدة 60 دقيقة. صب السائل ديكوتيون في نفس الحاوية كما في الخطوة 5.4.</li>
	<li>أداء ديكوتيون الثاني من الجينسنغ في مياه الشرب مع حجم يكفي فقط لغمر سطح الدواء ، عن طريق التدفئة على نار خفيفة لمدة 40 دقيقة. صب السائل ديكوتيون في نفس الحاوية كما في الخطوة 5.4. ملاحظة: يجب أن تكون الحاويات المستخدمة في ديكوتيون مستقرة كيميائيا ، مثل الأوعية المقاومة للحرارة (الأكثر استخداما في الممارسة السريرية) والسيراميك والزجاج والفولاذ المقاوم للصدأ لتجنب التفاعلات الكيميائية المحتملة مع المواد الطبية. يجب وضع كل سائل ديكوتيون تم الحصول عليه من خطوات مختلفة في نفس الحاوية.</li>
	<li>امزج وفلتر سائل ديكوتيون باستخدام ثلاث طبقات من الشاش مثبتة عند فم كوب قياس بأشرطة مطاطية.</li>
	<li>اغلي المرتقي المصفى على نار قوية في وعاء ، ثم قم بتغييره إلى نار خفيفة واحتفظ بالنار الخفيفة حتى الوصول إلى التركيز المستهدف (حجم نهائي 84 مل بتركيز نهائي 1.5 جم / مل).</li>
	<li>تحضير 21 مل من ديكوتيون مركزة وفقا للجرعة المطلوبة للإعطاء داخل المعدة لمدة 1 أسبوع ، وتخزين القسمة في الثلاجة في -20 درجة مئوية.</li>
</ol>6. إدارة Gavage في الفئران باستخدام جهاز gavage
<ol><li>ضع الماوس على سطح قفص الماوس أو أي سطح آخر أكثر خشونة.</li>
	<li>أمسك ذيل الماوس بالإبهام والسبابة من اليد اليمنى. ثم أمسك عنق الماوس بالإبهام والسبابة والإصبع الأوسط من اليد اليسرى.</li>
	<li>امسك ذيل الفأر بالإصبعين الآخرين من اليد اليسرى لجعل رأس الفأر ورقبته وجسمه في خط مستقيم. ملاحظة: تأكد من إبقاء الماوس مسترخيا أثناء عملية الإمساك بأكملها. إذا استمر الماوس في النضال من أجل الحركة ، فيجب إجراء عملية الإمساك حتى يتم استرخاء الماوس.</li>
	<li>امسك جهاز التزويج في اليد اليمنى وقم بتحميل 200 ميكرولتر من تركيبة ديكوتيون للماوس مع 20 جم من وزن الجسم (100 ميكرولتر من تركيبة ديكوتيون / 10 جم من وزن الجسم من الماوس).</li>
	<li>أدخل إبرة التجويف في الفم من الزاوية وادفع اللسان ضد الفك العلوي للماوس.</li>
	<li>حافظ على جسم الفأر في نفس الاتجاه وادفع إبرة التجويف برفق نحو المعدة على طول المريء حتى يتم ترك حوالي 10 مم من إبرة التجويف بالخارج. ملاحظة: هناك شعور أجوف عندما تدخل إبرة التجويف إلى المريء. يجب قياس طول إبرة التجويف التي يتم إدخالها في الماوس إلى أعلى القص. يبلغ الطول الإجمالي لإبرة التجويف 60 مم (الشكل 3) ، لذلك يجب إدخال حوالي 50 مم من إبرة التجويف في جسم الفأر قبل حقن تركيبة ديكوتيون في معدة الفأر.</li>
	<li>حقن صيغة ديكوتيون في المعدة من الماوس. إن مواجهة المقاومة أو السائل الخارج من زاوية الفم يعني وضع إبرة التجويف في غير مكانها ، والتي يجب تجنبها. بالإضافة إلى ذلك ، يجب إبطاء سرعة الحقن إذا كانت تركيبة ديكوتيون سميكة.</li>
	<li>حرر الماوس وراقبه لمدة 10 دقائق. ينجح التجويف إذا لم يلاحظ أي خلل في التنفس وإعادة الماوس إلى القفص (الشكل 4).</li>
</ol>7. مسار العلاج
<ol><li>لاستكشاف الفعالية العلاجية ل Yiqi Jiedu decoction ، قم بإعداد مجموعة تحكم ومجموعة Yiqi Jiedu decoction. بالنسبة للفئران في المجموعة الضابطة ، يتم تطبيق محلول ملحي فسيولوجي ، مرة واحدة يوميا لمدة 28 يوما. بالنسبة للفئران في مجموعة Yiqi Jiedu decoction ، قم بإدارة Yiqi Jiedu ديكوتيون مرة واحدة يوميا لمدة 28 يوما.</li>
</ol>8. ردود الفعل السلبية
<ol><li>راقب عن كثب حالة الفئران بعد وضعها مرة أخرى في القفص ، بما في ذلك فقدان الوزن وانخفاض الحالة العقلية بسبب عدم قدرة الطعام على الدخول إلى المعدة.</li>
	<li>ستواجه الفئران صعوبة في التنفس وضيق في التنفس بسبب انسداد القصبة الهوائية الناجم عن الطعام وسوف تسعل في محاولة لإزالة القصبة الهوائية. إذا لوحظ أي من هذه الأعراض أثناء التزويج ، فقم بإيقاف التجويف على الفور والقتل الرحيم للفئران.</li>
</ol>

صياغة ديكوتيون عشب وتوحيد Gavage في الفئران ساركوما العظم

<ol>
	<li>Gao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discussion+on+advantages+and+improvement+of+traditional+Chinese+medicine+decoction.">Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction.</a> Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).</li><li>An, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interpretation+on+specification+of+traditional+Chinese+medicine+decoction.">Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction.</a> Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+strategies+in+standard+decoction+of+medicinal+slices.">Research strategies in standard decoction of medicinal slices.</a> China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).</li><li>Luo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+soaking+traditional+Chinese+medicine+before+decoction+on+active+components.">Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components.</a> Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).</li><li>Liu, F., Chen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+standardization+of+decocting+methods+of+modern+decoction.">On the standardization of decocting methods of modern decoction.</a> Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+decocting+times+and+instrument+on+the+quality+of+decoction.">Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction.</a> J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbal+decoctosome+is+a+novel+form+of+medicine.">Herbal decoctosome is a novel form of medicine.</a> Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).</li><li>Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflections+on+PK+-+PD+model+based+on+animal+experiments+for+study+of+Chinese+medicine.">Reflections on PK - PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine.</a> Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).</li><li>Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+and+reflection+on+standard+decoction+of+Chinese+materia+medica.">Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica.</a> Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).</li><li>. Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers">https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers</a> (2005)</li><li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratibial+osteosarcoma+cell+injection+to+generate+orthotopic+osteosarcoma+and+lung+metastasis+mouse+models.">Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models.</a> J Vis Exp. (176), 63072 (2021).</li><li>He, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+animal+science.">Laboratory animal science.</a> , (2006).</li><li>Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+different+animal+models+of+fetal+alcohol+spectrum+disorders+and+their+use+in+studying+complex+behaviors.">A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors.</a> Fronti Pedia. 2, 93 (2014).</li><li>Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+mice+undergoing+serial+oral+gavage+while+awake+or+anesthetized.">Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).</li><li>Recena Aydos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonalcoholic+fatty+liver+disease+induced+by+high-fat+diet+in+C57bl/6+models.">Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models.</a> Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).</li></ol>

يعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم ما يكشفون عنه.

ترتبط الفعالية السريرية للأعشاب الموصوفة في الطب الصيني التقليدي إلى حد كبير بالجرعة المعطاة وشكل الجرعة. لذلك ، فإن إنشاء استراتيجية ديكوتيون موحدة وعملية إدارة ماهرة ضرورية في الممارسة السريرية ، وكذلك في تحسين موثوقية النتائج التجريبية.
في هذه الدراسة ، قدمنا أولا است?...

صيغة ديكوتيون هي شكل الجرعة الأكثر استخداما للطب الصيني التقليدي والأدوية الطبية السائلة1،2. تتم معالجة صيغة ديكوتيون للطب الصيني التقليدي عن طريق إزالة الأعشاب في الماء بعد نقعها ، تليها التصفية للتخلص من الثمالة.
نظرا لأنه يمكن تخصيص تركيبة ديكوتيون بناء على الضرورات السريرية ، خاصة بما يتماشى مع خصائص العلاج القائم على الأدلة في الطب الصيني التقليدي ، فقد تم تطبيق شكل الجرعة هذا عن طريق الإعطاء عن طريق الفم في الممارسة السريرية لآلاف السنين مع مزايا محددة لا يمكن الاستغناء عنها 3,4. ترتبط جودة صيغة ديكوتيون ارتباطا مباشرا بالفعالية السريرية. لذلك ، يجب تحضير تركيبة ديكوتيون بناء على مبادئ طرق ديكوتيون الموحدة لضمان استخراج المكونات النشطة وحمايتها إلى أقصىحد 3. وفي الوقت نفسه ، الأدوية الجاهزة ديكوتيون هي الشكل الرئيسي للأعشاب الصينية الخام المستخدمة في الممارسة السريرية. يجب أن تتوافق معايير الجودة وطرق إنتاج الأدوية الموصوفة الجاهزة ديكوتيون مع أحكام دستور الأدوية الصيني2. علاوة على ذلك ، يجب نقع الأدوية الموصوفة الجاهزة ديكوتيون في ماء الشرب البارد لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل تفكيكها في وعاء صيدلاني خاص عن طريق تسخين5. أظهرت الدراسات أنه يمكن استخراج معظم المكونات النشطة عن طريق الفك لمرتين ، كما تنص مدونة الممارسات لإدارة غرف ديكوتيون للأدوية الصينية التقليدية في المؤسسات الطبية على أن يتم ديكوتيون مرتين4،6،7. إذا تم وصف الأعشاب الصينية الخاصة ، مثل تلك ذات الملمس الصلب أو المقويات ، فمن المستحسن تمديد وقت ديكوتيون. يجب أن تكون أواني ديكوتيون وحاويات التخزين التي تتلامس مباشرة مع تركيبة ديكوتيون ، بدءا من الحاوية التي تنقع فيها الأدوية الموصوفة الجاهزة ، مستقرة كيميائيا ولها أغطية ، مثل الأوعية المقاومة للحرارة والسيراميك والزجاج والفولاذ المقاوم للصدأ. ومع ذلك ، لا ينبغي استخدام الألمنيوم والمنتجات البلاستيكية العادية ، في حين يجب حظر الحديد والأواني المسببة للتآكل الأخرى لتجنب التفاعلات الكيميائية المحتملة ، مما يقلل من الفعالية العلاجية وحتى ينتج عنه آثار ضارة4،6،7.
نظرا لقيود إجراء التجارب السريرية ، غالبا ما تستخدم الصغيرة التي تحمل الأمراض البشرية ، مثل الفئران ، في الأبحاث الطبية لاستكشاف الفعالية العلاجية والآليات الشاملة للتدخلات المختلفة بما في ذلك صيغة ديكوتيون للطب الصيني التقليدي 8,9; ومع ذلك ، على عكس البشر ، يجب تحضير صيغ ديكوتيون كل يوم ، وخلطها معا ، وإدارتها طازجة 2x يوميا في الممارسة السريرية. غير قادرة على تناول أدويتها طواعية في الوقت المحدد بالجرعة المطلوبة ، ومعظم التجارب على المتعلقة بالطب الصيني التقليدي هي إعطاء عن طريق الفم قائم على التزويج لصيغ ديكوتيون في الوقت الحاضر. يجب تحضير تركيبات ديكوتيون المستخدمة في التجارب على في الجسم الحي مسبقا ، وتخزينها في -20 درجة مئوية وإذابتها قبل الاستخدام مباشرة3،4،10. علاوة على ذلك ، فإن تجميد دون المستوى المطلوب والتلاعب بإبرة التزويج يزيد من خطر الإصابات غير الضرورية والعواطف السلبية. لذلك ، كطريقة مهمة لتوصيل الأدوية عبر الفم ، فإن تقنية التزويج الماهرة مهمة بشكل خاص لتجنب إصابة المريء المحتملة وانسكاب الدواء ، وبالتالي ضمان حصول كل نموذجي على كمية متساوية من الأدوية العشبية الموصوفة لتحقيق نتائج تجريبية دقيقة. هنا ، نحن نقدم بروتوكول gavage لصيغة ديكوتيون من الطب الصيني التقليدي.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>143B cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-8303</td>
			<td>osteosarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd</td>
			<td>R500IP</td>
			<td>The Equipment of Anesthesia mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic cell counter</td>
			<td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td>
			<td>IC1000</td>
			<td>Counting cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c athymic mice</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td>
			<td>Male</td>
			<td>Animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barbed skullcap herb</td>
			<td>Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd.</td>
			<td>20230606</td>
			<td>Decoction-ready medicines&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd</td>
			<td>356234, BD, Matrigel</td>
			<td>re-suspende cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube (15 mL)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>430790, Corning</td>
			<td>Centrifuge the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm)</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd.</td>
			<td>C21014-12</td>
			<td>Component of gastric perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Haishi Hainuo Group Co., Ltd.</td>
			<td>LC45</td>
			<td>Decoction filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ginseng</td>
			<td>Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd.</td>
			<td>20220704-2</td>
			<td>Decoction-ready medicines&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hedyotis diffusa</td>
			<td>Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd.</td>
			<td>2023071107</td>
			<td>Decoction-ready medicines&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>VETEASY</td>
			<td>Anesthesia mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-volume syringe</td>
			<td>Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd</td>
			<td>0-50 &#956;L</td>
			<td>Inject precise cells into the tibia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>ST447</td>
			<td>wash the human osteosarcoma cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands</td>
			<td>Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>XPJ</td>
			<td>Fixing gauze on the measuring cup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL )</td>
			<td>Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd.</td>
			<td>SBM0040</td>
			<td>Component of gastric perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>25200056, Gibco</td>
			<td>trypsin treatment of cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

gavage strategy for decoction formula of traditional chinese medicine in osteosarcoma model mice

صيغة ديكوتيون هي شكل الجرعة الأكثر استخداما في الطب الصيني التقليدي ويتم تطبيقها في الممارسة السريرية لآلاف السنين عن طريق الإدارة عبر الفم ، والتي تتميز بالتأثير السريع والامتصاص السهل والعلاج الفردي بناء على متلازمات محددة للمرضى. جودة صيغة ديكوتيون مسؤولة بشكل مباشر عن الفعالية السريرية للطب الصيني التقليدي. لذلك ، فإن عملية توحيد صيغة ديكوتيون مهمة لتجنب الاختلافات في جودة ديكوتيون الناجمة عن عوامل ذاتية. وفي الوقت نفسه ، نظرا لقيود إجراء التجارب السريرية ، غالبا ما تستخدم الصغيرة التي تحمل أمراضا بشرية ، مثل الفئران ، في الأبحاث الطبية لاستكشاف الفعالية العلاجية والآليات الشاملة للتدخلات المختلفة ، بما في ذلك صيغة ديكوتيون للطب الصيني التقليدي. وبالتالي ، كطريقة مهمة للإعطاء عبر الفم ، فإن تقنية التزويج الماهرة مهمة بشكل خاص لتجنب تلف المريء المحتمل وانسكاب الدواء ، مما يضمن إعطاء كمية متساوية من الدواء لكل نموذجي ، مما يؤدي إلى نتائج تجريبية دقيقة. علاوة على ذلك ، فإن الطريقة الموحدة لإعداد صيغة ديكوتيون واستراتيجية التزويج الماهرة ضرورية لحماية رعاية وتقليل عدد المستخدمة. هنا ، أبلغنا عن عملية توحيد مفصلة لصيغة ديكوتيون وتقنية التزجيج باستخدام Yiqi Jiedu decoction في نموذج فأر الساركوما العظمية كمثال. تم تقييم الفعالية من خلال حجم الورم. سيعمل هذا البروتوكول على زيادة حماية إلى أقصى حد وتحسين موثوقية بيانات البحث ، وبالتالي توفير استراتيجيات فعالة للتحقيق في الفعالية العلاجية المستقبلية والآليات الجزيئية لصيغة ديكوتيون للطب الصيني التقليدي في الجسم الحي.

Decoction formula is the most commonly used dosage form of the traditional Chinese medicine and the liquid medicinal drugs1,2. The decoction formula of traditional Chinese medicine is processed by decocting the herbs in water after being soaked, followed by filtering to discard the dregs.
Because the decoction formula can be individualized based on clinical necessities, especially in line with the characteristics of evidence-based treatment in traditional Chinese medicine, this dosage form via trans-oral administration has been applied in clinical practice for thousands of years with specific and irreplaceable advantages3,4. The quality of the decoction formula is directly related to the clinical efficacy.&#160;Therefore, the decoction formula must be prepared based on the principles for the standardized decoction methods to ensure the active ingredients are maximally extracted and protected3. Meanwhile, decoction-ready medicines are the main form of raw Chinese herbs used in clinical practice; the quality standards and production methods of prescribed decoction-ready medicines must comply with the provisions of the Chinese Pharmacopoeia2. Moreover, the prescribed decoction-ready medicines must be soaked in cold drinking water for at least 30 min before being decocted in a special pharmaceutical pot by heating5. Studies have shown that most of the active ingredients can be extracted by decocting for two times, and the&#160;Code of Practice for the Administration of Decoction Rooms of Traditional Chinese Medicines in Medical Institutions also prescribes decoction to be done twice4,6,7. If special Chinese herbs, such as one with hard texture or tonics, are prescribed, the decoction time is recommended to be extended. The decoction utensils and storage containers that directly come in contact with the decoction formula, starting from the container in which the prescribed decoction-ready medicines are soaked, should be chemically stable and have lids, such as casseroles, ceramics, glass and stainless steel. However, aluminum and ordinary plastic products should not be used, while iron and other corrosive utensils should be prohibited to avoid possible chemical reactions, which will reduce therapeutic efficacy and even produce harmful effects4,6,7.
Due to the limitations of performing clinical experiments, small animals bearing the human diseases, such as mice, are often used in medical research to explore the therapeutic efficacy and comprehensive mechanisms of different interventions including the decoction formula of traditional Chinese medicine8,9; however, unlike humans, the decoction formulas should be prepared every day, mixed together, and freshly administered 2x a day in clinical practice. Animals are unable to voluntarily take their medications on time with the required dosage, and most of the animal experiments related to traditional Chinese medicine are gavage-based oral administration of the decoction formulas at present. The decoction formulas used for in vivo animal experiments should be prepared in advance, aliquoted, stored at -20 &#176;C and thawed just before use3,4,10. Moreover, substandard animal immobilization and gavage needle manipulation increase the risk of unnecessary injuries and negative emotions. Therefore, as an important method of trans-oral drug delivery, the skilled gavage technique is particularly important to avoid possible esophageal injury and drug spillage, thus ensuring that each model animal receives an equal amount of prescribed herbal medicine to achieve accurate experimental results. Here, we provide a gavage protocol for the decoction formula of traditional Chinese medicine.

تسليط الضوء على المؤلف: بروتوكول ديكوتيون عشبي موحد للدراسات الحيوانية المحسنة

استراتيجية Gavage لصيغة ديكوتيون من الطب الصيني التقليدي في الفئران نموذج ساركوما العظمية

This study provides a detailed and standardized protocol for about precaution preparation under gradual operation that's providing a reference for those in need. Our research ensures that each animal is dosed equally to produce accurate results. Our study aims to maximize the animal protection and improve the reliability of results from studies of about Decoction formulations.

تم تحديد التأثير المثبط ل Yiqi Jiedu decoction على نمو الساركوما العظمية في الجسم الحي في نموذج فأر الساركوما العظمية داخل الظنبوب ، والذي تم تحضيره عن طريق حقن خلايا الساركوما العظمية 143B في قصبة الفئران الذئيمية. تم إعطاء ديكوتيون Yiqi Jiedu للفئران من مجموعة Yiqi Jiedu decoction عن طريق التزويج لمدة 28 يوم...

يوفر البروتوكول عملية توحيد مفصلة لصيغة ديكوتيون وتقنية التزويج مع مغلي Yiqi Jiedu في نموذج فأر الساركوما العظمية كمثال. يصف حماية ويحسن موثوقية البيانات البحثية ، ويوفر استراتيجيات فعالة للتحقيق في الفعالية العلاجية والآليات الجزيئية لصيغ ديكوتيون في الجسم الحي.

Decoction formula is the most commonly used dosage form in traditional Chinese medicine and applied in clinical practice for thousands of years by ...

توفر هذه الدراسة بروتوكولا مفصلا وموحدا حول الاستعداد الوقائي في ظل التشغيل التدريجي الذي يوفر مرجعا للمحتاجين. يضمن بحثنا أن يتم إعطاء جرعات متساوية لكل للحصول على نتائج دقيقة. تهدف دراستنا إلى تعظيم حماية وتحسين موثوقية النتائج من الدراسات حول تركيبات ديكوتيون.

gavage-strategy-for-decoction-formula-traditional-chinese-medicine

Research

JoVE Journal

Medicine

Gavage Strategy for Decoction Formula of Traditional Chinese Medicine in Osteosarcoma Model Mice

392 Views.  Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. توفر هذه الدراسة بروتوكولا مفصلا وموحدا حول الاستعداد الوقائي في ظل التشغيل التدريجي الذي يوفر مرجعا للمحتاجين. يضمن بحثنا أن يتم إعطاء جرعات متساوية لكل للحصول على نتائج دقيقة. تهدف دراستنا إلى تعظيم حماية وتحسين موثوقية النتائج من الدراسات حول تركيبات ديكوتيون.

Video: تسليط الضوء على المؤلف: بروتوكول ديكوتيون عشبي موحد للدراسات الحيوانية المحسنة

Decoction formula is the most commonly used dosage form in traditional Chinese medicine and applied in clinical practice for thousands of years by trans-oral administration, which is characterized by quick effect, easy absorption, and individualized treatment based on the specific syndromes of patients. The quality of the decoction formula is directly responsible for the clinical efficacy of traditional Chinese medicine; therefore, the standardization process of the decoction formula is important to avoid differences in decoction quality caused by subjective factors. Meanwhile, due to the limitations of performing clinical experiments, small animals bearing human diseases, such as mice, are often used in medical research to explore the therapeutic efficacy and comprehensive mechanisms of different interventions, including the decoction formula for traditional Chinese medicine.&#160;Consequently, as an important trans-oral administration method, the skilled gavage technique is particularly important to avoid potential esophagus damage and drug spillage, which will ensure an equal amount of medicine being administered to each model animal, leading to accurate experimental results. Furthermore, the standardized method of decoction formula preparation and skilled gavage strategy are necessary to protect animal welfare and minimize the number of animals used. Here, we reported a detailed standardization process of the decoction formula and gavage technique with Yiqi Jiedu decoction in osteosarcoma mouse model as an example. The efficacy was evaluated by the tumor volume. This protocol will maximize animal protection and improve the reliability of research data, therefore providing effective strategies for future investigating therapeutic efficacy and molecular mechanisms of decoction formula for traditional Chinese medicine in vivo.

The protocol provides a detailed standardization process of decoction formula and gavage technique with Yiqi Jiedu decoction in the osteosarcoma mouse model as an example. It describes animal protection and improves reliability of research data, providing effective strategies for investigating therapeutic efficacy and molecular mechanisms of decoction formulas in vivo.