Mevcut çalışma, (1) Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81973877 ve 82174408), (2) Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2020YFE0201600), (3) Şanghay En Öncelikli Araştırma Merkezi inşaat projesi (2022ZZ01009), (4) Hastane TCM Hazırlığının Endüstriyel Dönüşümü için Şanghay İşbirlikçi İnovasyon Merkezi ve (5) Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Bütçesi kapsamındaki Araştırma Projeleri (2021LK047).

Bu protokol, örnek olarak Yiqi Jiedu kaynatma kullanılarak osteosarkom model farelerde ayrıntılı gavaj tekniğini açıklar. Bu deneyde dört haftalık erkek atletik fareler (BALB / c çıplak) kullanıldı ve Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'ndeki Laboratuvar Hayvanları Merkezi'nin SPF dereceli üreme odasında tutuldu. Tüm hayvan deneyleri, Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Yönetimi ve Komitesi tarafından onaylanmış, Laboratuvar Hayvanları için Etik Kurallarına (Hayvan Etiği Onay Numarası: PZSHUTCM2304060007) uyulmuş ve laboratuvar hayvanlarıyla ilgili uluslararası gerekliliklere sıkı sıkıya bağlı kalınarak yürütülmüştür.
1. Malzemeler
<ol><li>Aşağıdaki malzemeleri elde edin: Çin otları (Ginseng 42 g, Hedyotis diffusa 52.5 g, Dikenli takke otu 31.5 g), 1 mL şırınga ve 12G / 55 mm dirsek gavaj iğnesi (Şekil 1).</li>
</ol>2. Dozaj tayini
<ol><li>Günlük dozu şu şekilde hesaplayın: standart vücut ağırlığı 60 kg olan yetişkinler için günlük doz Ginseng 12 g, Hedyotis diffusa 15 g ve Dikenli takke otu 9 g, toplam 36 g kaynatma hazır ilaç, yani 0.6 g kaynatmaya hazır ilaçlar / kg vücut ağırlığı. Vücut yüzey alanına göre standart vücut ağırlığı 60 kg olan yetişkinler ile standart vücut ağırlığı 25 g olan fareler arasında eşdeğer doz için 12 kez, düşük doz için 6 kez ve yüksek doz için 24 kez atıfta bulunarak11 ve ön verilerimiz, mevcut çalışmada fareler için 20 kat doz oranı Yiqi Jiedu kaynatma kullanın, Bu nedenle, fareler için dozaj 12 g kaynatmaya hazır ilaçlar / kg vücut ağırlığı idi.</li>
	<li>Denklemi kullanarak her fare için dozu hesaplayın: Fare için dozaj (stand vücut ağırlığı) = yetişkin için dozaj (stand vücut ağırlığı) x 20 (belirlenmiş eşdeğer doz oranı). Her farenin günlük dozu, 200 μL'de 0.3 g [(12 g kaynatmaya hazır ilaçlar / 1000 g vücut ağırlığı) x 25 g vücut ağırlığı] ve nihai konsantrasyon 1.5 g / mL'dir.</li>
	<li>Yiqi Jiedu kaynatma grubundaki fareler (n = 7) için 28 gün boyunca gavaj uygulaması ile toplam kaynatmaya hazır ilaçları 58.8 g olacak şekilde hesaplayın. 1,5 g/mL'lik bir nihai konsantrasyona ulaşmak için bunu 39,2 mL'ye konsantre edin.</li>
	<li>Kaynatma ve gavaj aşamaları sırasında olası ilaç kaybını göz önünde bulundurarak ve hesaplama kolaylığı için, toplam 126 g (Ginseng 42 g, Hedyotis diffusa 52.5 g, Dikenli takke bitkisi 31.5 g) kaynatmaya hazır ilaç hazırlayın, 84 mL'lik bir son hacme konsantre edin.</li>
</ol>3. Hücre kaynağı ve kültürü
<ol><li>ATCC hücre bankasından insan kaynaklı 143B osteosarkom hücreleri satın alın.</li>
	<li>10 cm'lik bir hücre kültürü kabında% 10 FBS, 100 U / mL penisilin ve 100 μg / mL streptomisin içeren 10 mL MEM ortamında 1 x 106 143B hücrelerini tohumlayın.</li>
	<li>Hücreler% 80 -% 90 birleşene kadar% 5 CO2 inkübatörde 37 ° C'de 143B hücrelerini kültürleyin.</li>
</ol>4. Modelleme yöntemleri
<ol><li>% 80 birleşik kültürlenmiş 143B hücrelerini toplayın, 6 mL% 10 serum içeren MEM ortamına yeniden süspanse edin ve 1 x 107 hücre / mL nihai konsantrasyona sahip bir hücre süspansiyonu yapmak için 1: 1 hacim oranında bazal membran matris jeli ile karıştırın.</li>
	<li>Önceki yayınımız 12'de açıklandığı gibi, bir in situ ksenogreft osteosarkom fare modeli oluşturmak için her bir timik farenin sol tibiasına10 μL hücre süspansiyonu enjekte edin. Kısaca adımlar aşağıdaki gibidir.<ol><li>Hücreleri PBS ile 2 kez yıkayın. Hücreleri 3 dakika boyunca 1.5 mL% 0.25 tripsin ile tripsinize edin. 6 mL %10 serum içeren MEM ortamı ekleyin. Hücreleri 15 mL'lik bir santrifüj tüpünde toplayın.</li>
		<li>Hücre sayma plakasının haznesine 20 μL hücre süspansiyonu aspire edin ve otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücre konsantrasyonunu hesaplayın. Hücreleri oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 800 x g'da santrifüjleyin.</li>
		<li>Süpernatanı bir pipetle atın, hücre peletini 8.5 mg/mL bazal membran matrisinde yeniden süspanse edin ve buz üzerine yerleştirin.</li>
		<li>Fareleri %2 izofluran ve %98 oksijene (oksijen akış hızı, 2 L/dk) maruz bırakarak uyuşturun. Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için gözlere az miktarda veteriner merhemi sürün.</li>
		<li>Tüm prosedürü iyi havalandırılan bir alanda gerçekleştirin. Osteosarkom hücre enjeksiyonundan önce, ayağa hafifçe dokunarak her farenin derin anestezi altında olduğundan emin olun; Farenin hala seğirme veya sarsıntı gibi yanıtları varsa. Farenin hala seğirme veya sarsıntı gibi yanıtları varsa, bu yanıtlar kaybolana kadar daha uzun süre bekleyin.</li>
		<li>Fareyi sırtüstü pozisyona getirin. Başparmağınızı ve işaret parmağınızı kullanarak farenin ayak bileğini tutun ve tibianın enjeksiyon bölgesini üç alternatif betadin ve% 70 etanol çubuğu ile dezenfekte edin.</li>
		<li>İğneyi 1 mL'lik bir şırıngaya takın ve iğne ucunu tibia eksenine paralel olarak enjeksiyon bölgesine doğru tutun. Tibia platformundan tibianın distal ucuna doğru bir delik açmak için iğneyi perkütan olarak sokun.</li>
		<li>Daha önce buz üzerine yerleştirilen osteosarkom hücre süspansiyonunu mikro hacimli bir şırıngaya yükleyin ve tibiadaki 1 mL'lik şırıngayı osteosarkom hücresi yüklü mikro hacimli şırınga ile değiştirin. Her bir timik farenin kaval kemiğine yaklaşık 10 μL (1 x 107 hücre/mL) osteosarkom hücre süspansiyonunu yavaşça enjekte edin.</li>
		<li>Mikro hacimli şırıngayı enjeksiyon bölgesinden çıkarın ve enjeksiyon bölgesini pamuklu çubukla yaklaşık 30 saniye bastırın. Fareyi temiz bir kafese geri koyun ve 10 dakika boyunca iyileşmesini gözlemleyin.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Gavaj için geleneksel Çin tıbbı kaynatma formülünün hazırlanması (Şekil 2)
<ol><li>Dozu 2. adıma göre hesaplayın.</li>
	<li>Pahalı bitki Ginseng hariç, tüm şifalı bitkileri kaynatma için, ilaç yüzeyinden 3 cm daha yüksek bir seviyeye sahip içme suyunda 30 dakika bekletin ve ardından kaynatma işlemini aşağıda açıklandığı gibi 2x yapın.</li>
	<li>İlk kaynatma işlemini güçlü bir ateşte kaynayana kadar ısıtarak ve ardından hafif bir ateşte 15-25 dakika ısıtarak gerçekleştirin. Hafif ateş, tipik olarak 80 °C ila 100 °C arasında değişen sıcaklıklara sahip düşük güçlü bir ısıyı ifade ederken, güçlü ateş, tipik olarak 200 °C ila 300 °C arasında değişen yüksek güçlü bir ısıyı ifade eder.</li>
	<li>Kaynatma sıvısını bir kaba dökün.</li>
	<li>İkinci kaynatmayı, şifalı bitkileri içme suyunda, ilaç yüzeyini batırmaya yetecek bir hacimde, güçlü bir ateşte kaynatarak ve ardından hafif bir ateşte 15-25 dakika ısıtarak gerçekleştirin.</li>
	<li>Kaynatma sıvısını adım 5.4'teki gibi aynı kaba dökün.</li>
	<li>Pahalı olduğu için 42 g Ginseng'i ayrı ayrı, ilaç yüzeyinden 3 cm daha yüksek içme suyuyla ıslatın ve kaynatın.</li>
	<li>Islatılmış Ginseng'in ilk kaynatma işlemini 60 dakika boyunca güçlü bir ateşte ısıtarak gerçekleştirin. Kaynatma sıvısını adım 5.4'teki gibi aynı kaba dökün.</li>
	<li>Ginseng'in ikinci kaynatma işlemini, 40 dakika boyunca hafif bir ateşte ısıtarak, ilaç yüzeyini batırmaya yetecek bir hacme sahip içme suyunda gerçekleştirin. Kaynatma sıvısını adım 5.4'teki gibi aynı kaba dökün. NOT: Kaynatma için kullanılan kaplar, tıbbi maddelerle olası kimyasal reaksiyonları önlemek için güveç (klinik uygulamada en yaygın kullanılan), seramik, cam ve paslanmaz çelik gibi kimyasal olarak kararlı olmalıdır. Farklı adımlardan elde edilen tüm kaynatma sıvıları aynı kaba konulmalıdır.</li>
	<li>Lastik bantlı bir ölçüm kabının ağzına sabitlenmiş üç kat gazlı bez kullanarak kaynatma sıvısını karıştırın ve süzün.</li>
	<li>Filtrelenmiş kaynatma maddesini bir tencerede güçlü bir ateşte kaynatın, ardından hafif ateşe geçin ve hedef konsantrasyona ulaşana kadar hafif ateşi tutun (son konsantrasyon 1,5 g/mL olan 84 mL'lik bir nihai hacim).</li>
	<li>1 hafta boyunca intragastrik uygulama için gereken doza göre konsantre kaynatma 21 mL alikot hazırlayın ve alikotları -20 ° C'de buzdolabında saklayın.</li>
</ol>6. Bir gavaj cihazı kullanarak farelerde gavaj uygulaması
<ol><li>Fareyi fare kafesinin yüzeyine veya daha pürüzlü başka bir yüzeye yerleştirin.</li>
	<li>Farenin kuyruğunu sağ elin başparmağı ve işaret parmağıyla kavrayın. Ardından, sol elin başparmağı, işaret parmağı ve orta parmağıyla farenin boynunu kavrayın.</li>
	<li>Farenin başını, boynunu ve gövdesini düz bir çizgide yapmak için sol elin diğer iki parmağıyla fare kuyruğunu tutun. NOT: Tüm kavrama işlemi boyunca fareyi rahat tuttuğunuzdan emin olun. Fare hareket etmekte zorlanmaya devam ederse, fare rahatlayana kadar kavrama işlemi gerçekleştirilmelidir.</li>
	<li>Gavaj cihazını sağ elinizde tutun ve 20 g vücut ağırlığına sahip bir fare için 200 μL kaynatma formülü yükleyin (100 μL kaynatma formülü/farenin 10 g vücut ağırlığı).</li>
	<li>Gavaj iğnesini köşeden ağza sokun ve dili farenin üst çenesine doğru itin.</li>
	<li>Fare gövdesini aynı yönde tutun ve gavaj iğnesinin yaklaşık 10 mm'si dışarıda kalana kadar gavaj iğnesini yemek borusu boyunca mideye doğru hafifçe itin. NOT: Gavaj iğnesi yemek borusuna girdiğinde çukurluk hissi vardır. Fareye sokulan gavaj iğnesinin uzunluğu sternumun tepesine kadar ölçülmelidir. Gavaj iğnesinin toplam uzunluğu 60 mm'dir (Şekil 3), bu nedenle, kaynatma formülü farenin midesine enjekte edilmeden önce yaklaşık 50 mm'lik gavaj iğnesi farenin gövdesine yerleştirilmelidir.</li>
	<li>Kaynatma formülünü farenin midesine enjekte edin. Dirençle karşılaşmak veya ağız köşesinden sıvı gelmesi, gavaj iğnesinin yanlış yerleştirilmesi anlamına gelir ve bundan kaçınılmalıdır. Ek olarak, kaynatma formülü kalınsa enjeksiyon hızı yavaşlatılmalıdır.</li>
	<li>Fareyi bırakın ve 10 dakika boyunca gözlemleyin. Solunum anormalliği gözlenmezse gavaj başarılı olur ve fareyi kafese geri döndürür (Şekil 4).</li>
</ol>7. Tedavi süresi
<ol><li>Yiqi Jiedu kaynatma işleminin terapötik etkinliğini keşfetmek için bir kontrol grubu ve bir Yiqi Jiedu kaynatma grubu kurun. Kontrol grubundaki fareler için, 28 gün boyunca günde bir kez fizyolojik salin uygulayın. Yiqi Jiedu kaynatma grubundaki fareler için, Yiqi Jiedu kaynatma işlemini 28 gün boyunca günde bir kez uygulayın.</li>
</ol>8. Olumsuz reaksiyonlar
<ol><li>Farelerin kafese geri yerleştirildikten sonra, kilo kaybı ve yiyeceklerin mideye girememesi nedeniyle zihinsel durumun azalması da dahil olmak üzere durumunu yakından gözlemleyin.</li>
	<li>Fareler, gıdaya bağlı trakeal tıkanıklık nedeniyle nefes almada zorluk ve nefes darlığı yaşayacak ve trakeayı temizlemek için öksüreceklerdir. Gavaj sırasında bu semptomlardan herhangi biri gözlenirse, gavajı hemen durdurun ve farelere ötenazi yapın.</li>
</ol>

Osteosarkom Farelerinde Bitki Kaynatma Formülasyonu ve Gavaj Standardizasyonu

<ol>
	<li>Gao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discussion+on+advantages+and+improvement+of+traditional+Chinese+medicine+decoction.">Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction.</a> Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).</li><li>An, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interpretation+on+specification+of+traditional+Chinese+medicine+decoction.">Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction.</a> Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+strategies+in+standard+decoction+of+medicinal+slices.">Research strategies in standard decoction of medicinal slices.</a> China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).</li><li>Luo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+soaking+traditional+Chinese+medicine+before+decoction+on+active+components.">Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components.</a> Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).</li><li>Liu, F., Chen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+standardization+of+decocting+methods+of+modern+decoction.">On the standardization of decocting methods of modern decoction.</a> Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+decocting+times+and+instrument+on+the+quality+of+decoction.">Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction.</a> J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbal+decoctosome+is+a+novel+form+of+medicine.">Herbal decoctosome is a novel form of medicine.</a> Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).</li><li>Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflections+on+PK+-+PD+model+based+on+animal+experiments+for+study+of+Chinese+medicine.">Reflections on PK - PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine.</a> Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).</li><li>Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+and+reflection+on+standard+decoction+of+Chinese+materia+medica.">Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica.</a> Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).</li><li>. Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers">https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers</a> (2005)</li><li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratibial+osteosarcoma+cell+injection+to+generate+orthotopic+osteosarcoma+and+lung+metastasis+mouse+models.">Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models.</a> J Vis Exp. (176), 63072 (2021).</li><li>He, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+animal+science.">Laboratory animal science.</a> , (2006).</li><li>Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+different+animal+models+of+fetal+alcohol+spectrum+disorders+and+their+use+in+studying+complex+behaviors.">A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors.</a> Fronti Pedia. 2, 93 (2014).</li><li>Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+mice+undergoing+serial+oral+gavage+while+awake+or+anesthetized.">Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).</li><li>Recena Aydos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonalcoholic+fatty+liver+disease+induced+by+high-fat+diet+in+C57bl/6+models.">Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models.</a> Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).</li></ol>

Yazarlar açıklayacak hiçbir şeyleri olmadığını beyan ederler.

Geleneksel Çin tıbbında reçete edilen bitkilerin klinik etkinliği büyük ölçüde uygulanan doz ve dozaj formu ile ilişkilidir; Bu nedenle, standartlaştırılmış bir kaynatma stratejisinin oluşturulması ve yetenekli bir uygulama süreci, klinik uygulamada ve deneysel sonuçların güvenilirliğinin arttırılmasında gereklidir.
Bu çalışmada, ilk olarak, geleneksel Çin tıbbının klinik uygulamasında kullanılan Çin bitkilerinin standartlaştırılmış kaynatma için ayrı...

Kaynatma formülü, geleneksel Çin tıbbının ve sıvı tıbbi ilaçlarınen yaygın kullanılan dozaj şeklidir 1,2. Geleneksel Çin tıbbının kaynatma formülü, otların ıslatıldıktan sonra suda kaynatılması ve ardından tortuların atılması için süzülmesiyle işlenir.
Kaynatma formülü, özellikle geleneksel Çin tıbbında kanıta dayalı tedavinin özelliklerine uygun olarak, klinik gerekliliklere göre kişiselleştirilebildiğinden, trans-oral uygulama yoluyla bu dozaj formu, spesifik ve yeri doldurulamaz avantajlarla binlerce yıldır klinik uygulamada uygulanmaktadır 3,4. Kaynatma formülünün kalitesi doğrudan klinik etkinlik ile ilgilidir. Bu nedenle, kaynatma formülü, aktif bileşenlerin maksimum düzeyde ekstrakte edilmesini ve korunmasını sağlamak için standartlaştırılmış kaynatma yöntemlerinin ilkelerine göre hazırlanmalıdır3. Bu arada, kaynatmaya hazır ilaçlar, klinik uygulamada kullanılan çiğ Çin bitkilerinin ana şeklidir; Reçete edilen kaynatmaya hazır ilaçların kalite standartları ve üretim yöntemleri Çin Farmakopesi2 hükümlerine uygun olmalıdır. Ayrıca, reçete edilen kaynatmaya hazır ilaçlar, özel bir ilaç kabında ısıtılarak kaynatılmadan önce en az 30 dakika soğuk içme suyuna batırılmalıdır5. Çalışmalar, aktif bileşenlerin çoğunun iki kez kaynatma yoluyla ekstrakte edilebileceğini göstermiştir ve Tıbbi Kurumlarda Geleneksel Çin İlaçlarının Kaynatma Odalarının İdaresi için Uygulama Kuralları da kaynatma işleminin iki kez yapılmasını öngörmektedir 4,6,7. Sert dokulu veya tonikli olanlar gibi özel Çin otları reçete edilirse, kaynatma süresinin uzatılması önerilir. Reçete edilen kaynatmaya hazır ilaçların ıslatıldığı kaptan başlayarak, kaynatma formülü ile doğrudan temas eden kaynatma kapları ve saklama kapları, kimyasal olarak stabil olmalı ve güveç, seramik, cam ve paslanmaz çelik gibi kapaklara sahip olmalıdır. Bununla birlikte, alüminyum ve sıradan plastik ürünler kullanılmamalı, terapötik etkinliği azaltacak ve hatta zararlı etkiler yaratacak olası kimyasal reaksiyonlardan kaçınmak için demir ve diğer aşındırıcı kaplar yasaklanmalıdır 4,6,7.
Klinik deneylerin yapılmasının sınırlamaları nedeniyle, fareler gibi insan hastalıklarını taşıyan küçük hayvanlar, geleneksel Çin tıbbının kaynatma formülü de dahil olmak üzere farklı müdahalelerin terapötik etkinliğini ve kapsamlı mekanizmalarını araştırmak için tıbbi araştırmalarda sıklıkla kullanılır 8,9; Bununla birlikte, insanlardan farklı olarak, kaynatma formülleri her gün hazırlanmalı, birlikte karıştırılmalı ve klinik uygulamada günde 2 kez taze olarak uygulanmalıdır. Hayvanlar, ilaçlarını gerekli dozajla zamanında gönüllü olarak alamazlar ve geleneksel Çin tıbbı ile ilgili hayvan deneylerinin çoğu, şu anda kaynatma formüllerinin gavaj bazlı oral uygulamasıdır. İn vivo hayvan deneyleri için kullanılan kaynatma formülleri önceden hazırlanmalı, aliquoted'lanmalı, -20 °C'de saklanmalı ve kullanımdan hemen önce çözülmelidir 3,4,10. Ayrıca, standart altı hayvan immobilizasyonu ve gavaj iğnesi manipülasyonu, gereksiz yaralanma ve olumsuz duygu riskini artırır. Bu nedenle, trans-oral ilaç dağıtımının önemli bir yöntemi olarak, yetenekli gavaj tekniği, olası özofagus yaralanmasını ve ilaç dökülmesini önlemek için özellikle önemlidir, böylece her model hayvanın doğru deneysel sonuçlar elde etmek için eşit miktarda reçeteli bitkisel ilaç almasını sağlar. Burada, geleneksel Çin tıbbının kaynatma formülü için bir gavaj protokolü sunuyoruz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>143B cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-8303</td>
			<td>osteosarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd</td>
			<td>R500IP</td>
			<td>The Equipment of Anesthesia mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic cell counter</td>
			<td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td>
			<td>IC1000</td>
			<td>Counting cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c athymic mice</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td>
			<td>Male</td>
			<td>Animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barbed skullcap herb</td>
			<td>Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd.</td>
			<td>20230606</td>
			<td>Decoction-ready medicines&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd</td>
			<td>356234, BD, Matrigel</td>
			<td>re-suspende cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube (15 mL)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>430790, Corning</td>
			<td>Centrifuge the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm)</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd.</td>
			<td>C21014-12</td>
			<td>Component of gastric perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Haishi Hainuo Group Co., Ltd.</td>
			<td>LC45</td>
			<td>Decoction filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ginseng</td>
			<td>Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd.</td>
			<td>20220704-2</td>
			<td>Decoction-ready medicines&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hedyotis diffusa</td>
			<td>Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd.</td>
			<td>2023071107</td>
			<td>Decoction-ready medicines&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>VETEASY</td>
			<td>Anesthesia mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-volume syringe</td>
			<td>Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd</td>
			<td>0-50 &#956;L</td>
			<td>Inject precise cells into the tibia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>ST447</td>
			<td>wash the human osteosarcoma cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands</td>
			<td>Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>XPJ</td>
			<td>Fixing gauze on the measuring cup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL )</td>
			<td>Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd.</td>
			<td>SBM0040</td>
			<td>Component of gastric perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>25200056, Gibco</td>
			<td>trypsin treatment of cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

gavage strategy for decoction formula of traditional chinese medicine in osteosarcoma model mice

Kaynatma formülü, geleneksel Çin tıbbında en sık kullanılan dozaj şeklidir ve hastaların spesifik sendromlarına göre hızlı etki, kolay emilim ve bireyselleştirilmiş tedavi ile karakterize edilen trans-oral uygulama ile binlerce yıldır klinik uygulamada uygulanmaktadır. Kaynatma formülünün kalitesi, geleneksel Çin tıbbının klinik etkinliğinden doğrudan sorumludur; Bu nedenle, kaynatma formülünün standardizasyon süreci, öznel faktörlerin neden olduğu kaynatma kalitesindeki farklılıkları önlemek için önemlidir. Bu arada, klinik deneylerin yapılmasının sınırlamaları nedeniyle, fareler gibi insan hastalıkları taşıyan küçük hayvanlar, geleneksel Çin tıbbı için kaynatma formülü de dahil olmak üzere farklı müdahalelerin terapötik etkinliğini ve kapsamlı mekanizmalarını araştırmak için tıbbi araştırmalarda sıklıkla kullanılmaktadır. Sonuç olarak, önemli bir trans-oral uygulama yöntemi olarak, yetenekli gavaj tekniği, her model hayvana eşit miktarda ilaç uygulanmasını sağlayacak ve doğru deneysel sonuçlara yol açacak potansiyel yemek borusu hasarını ve ilaç dökülmesini önlemek için özellikle önemlidir. Ayrıca, hayvan refahını korumak ve kullanılan hayvan sayısını en aza indirmek için standartlaştırılmış kaynatma formülü hazırlama yöntemi ve vasıflı gavaj stratejisi gereklidir. Burada, örnek olarak osteosarkom fare modelinde Yiqi Jiedu kaynatma ile kaynatma formülü ve gavaj tekniğinin ayrıntılı bir standardizasyon sürecini bildirdik. Etkinlik, tümör hacmine göre değerlendirildi. Bu protokol, hayvanların korunmasını en üst düzeye çıkaracak ve araştırma verilerinin güvenilirliğini artıracak, bu nedenle in vivo olarak geleneksel Çin tıbbı için kaynatma formülünün terapötik etkinliğini ve moleküler mekanizmalarını araştırmak için etkili stratejiler sağlayacaktır.

Yiqi Jiedu kaynağının in vivo osteosarkomun büyümesi üzerindeki inhibitör etkisi, 143B osteosarkom hücrelerinin timik farelerin tibiasına enjekte edilmesiyle hazırlanan bir intra-tibial ksenogreft osteosarkom fare modelinde belirlendi. Yiqi Jiedu kaynatma, Yiqi Jiedu kaynatma grubunun farelerine 143B enjeksiyonunun ikinci gününden başlayarak 28 gün boyunca gavaj yoluyla uygulandı. Kontrol grubundaki farelere serum fizyolojik verildi. Tüm farelere 28 gün sonra ötenazi yapıldı. Sonuçlar, Yiqi ...

Yazar Spotlight: Gelişmiş Hayvan Çalışmaları için Standartlaştırılmış Bitkisel Kaynatma Protokolü

Protokol, örnek olarak osteosarkom fare modelinde Yiqi Jiedu kaynatma ile kaynatma formülü ve gavaj tekniğinin ayrıntılı bir standardizasyon sürecini sağlar. Hayvanların korunmasını açıklar ve araştırma verilerinin güvenilirliğini artırır, in vivo kaynatma formüllerinin terapötik etkinliğini ve moleküler mekanizmalarını araştırmak için etkili stratejiler sağlar.

Osteosarkom Model Farelerde Geleneksel Çin Tıbbının Kaynatma Formülü için Gavaj Stratejisi

Decoction formula is the most commonly used dosage form in traditional Chinese medicine and applied in clinical practice for thousands of years by ...

Bu çalışma, ihtiyacı olanlara referans sağlayan kademeli operasyon altında önlem hazırlığı için ayrıntılı ve standartlaştırılmış bir protokol sunmaktadır. Araştırmamız, doğru sonuçlar elde etmek için her hayvanın eşit dozda alınmasını sağlar. Çalışmamız, hayvanların korunmasını en üst düzeye çıkarmayı ve kaynatma formülasyonları ile ilgili çalışmalardan elde edilen sonuçların güvenilirliğini artırmayı amaçlamaktadır.

gavage-strategy-for-decoction-formula-traditional-chinese-medicine

Research

JoVE Journal

Medicine

Gavage Strategy for Decoction Formula of Traditional Chinese Medicine in Osteosarcoma Model Mice

528 Görüntüleme.  Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. Bu çalışma, ihtiyacı olanlara referans sağlayan kademeli operasyon altında önlem hazırlığı için ayrıntılı ve standartlaştırılmış bir protokol sunmaktadır. Araştırmamız, doğru sonuçlar elde etmek için her hayvanın eşit dozda alınmasını sağlar. Çalışmamız, hayvanların korunmasını en üst düzeye çıkarmayı ve kaynatma formülasyonları ile ilgili çalışmalardan elde edilen sonuçların güvenilirliğini artırmayı amaçlamaktadır.

Video: Yazar Spotlight: Gelişmiş Hayvan Çalışmaları için Standartlaştırılmış Bitkisel Kaynatma Protokolü

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the body, an additional extraction procedure is commonly required to release the active constituents from raw herbs. Water decoction is a classical extraction procedure that is still broadly used in the clinical settings. Here, we propose a detailed protocol for er-xian decoction (EXD) in order to apply herbal decoctions to experimental studies. The calculation of an animal-appropriate dose is described, as well as the four main steps of EXD: soaking, water decoction, filtration, and concentration. In addition, serum-containing EXD is introduced to rats as a means of in vitro validation. Here, rats were orally administered EXD for three days. Blood samples were then collected, inactivated, centrifuged, and filtered. The serum, diluted with the culture medium, can be utilized to treat cells or tissues in vitro. For example, EXD was applied to both in vivo and in vitro studies and demonstrated that EXD enhances osteogenesis. This protocol can be used as a reference for the preparation and application of herbal medicines.

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Here, we present the preparation of an er-xian decoction (EXD) in four steps&#8212;soaking, decoction, filtration, and concentration&#8212;and demonstrate the administration of a prepared EXD-containing serum to rats. These methods are applicable to the in vivo and in vitro study of herbal decoctions such as traditional Chinese medicines.

Bitkisel Tıbbın Hazırlanması: Er-Xian Kaynatma ve Er-Xian içeren Serum<emIn vivo</emVe<em&gt; In vitro</em&gt; Deneyler

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Tıp

An In Vitro Dissolution Determination of Multi-Index Components in Tibetan Medicine Rhodiola Granules

The composition of the Tibetan medicine Rhodiola granules (RG) is complex, and the overall quality of RG is difficult to determine. Therefore, establishing a method to determine the multi-component in vitro dissolution of RG is of great significance for quality control. This study uses the second paddle method of the fourth general rule 0931 from the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition), compliant with apparatus 2 of the United States Pharmacopeia (USP). The dissolution apparatus was set to a rotation speed of 100 rpm with ultrapure water as the dissolution medium. A sample volume of 1 mL was collected at each timepoint. Furthermore, the cumulative dissolution of gallic acid, salidroside, and ethyl gallic acid in RG at different time points was determined by high-performance liquid chromatography (HPLC). Finally, the dissolution curves were drawn, and the curves were fitted to the GompertzMod, the Gompertz, the Logistic, and the Weibull equations. The results showed that the cumulative dissolution of gallic acid in RG was over 80% at 1 min, the cumulative dissolution of salidroside and ethyl gallic acid was over 65% at 5 min, and the cumulative dissolution of each index component decreased after 30 min. The curve fitting demonstrated that the GompertzMod equation was the best-fitting model for each index component of RG. In conclusion, the dissolution test method described in this protocol is simple, accurate, and reliable. It can characterize the dissolution behavior of the index components in RG in vitro, which provides a methodological reference for quality control of RG and quality evaluation of other ethnic compounds.

An In Vitro Dissolution Determination of Multi-Index Components in Tibetan Medicine Rhodiola Granules

Here, we test the dissolution of Rhodiola granules (RG) in vitro, draw dissolution curves of salidroside, gallic acid, and ethyl gallate in ultrapure water, and fit the curves to different mathematical models. This protocol provides information and guidance for in vivo bioequivalence and in vivo-in vitro correlation studies of RG.

Tibet Tıbbında Rhodiola Granüllerinde Çok İndeksli Bileşenlerin In Vitro Çözünme Tayini

The composition of the Tibetan medicine Rhodiola granules (RG) is complex, and the overall quality of RG is difficult to determine. Therefore, ...

Visualization of Metabolites Identified in the Spatial Metabolome of Traditional Chinese Medicine Using DESI-MSI

The medicinal use of traditional Chinese medicine is mainly due to its secondary metabolites. Visualization of the distribution of these metabolites has become a crucial topic in plant science. Mass spectrometry imaging can extract huge volumes of data and provide spatial distribution information about these by analyzing tissue slices. With the advantage of high throughput and higher accuracy, desorption electrospray ionization mass spectrometry imaging (DESI-MSI) is often used in biological research and in the study of traditional Chinese medicine. However, the procedures used in this research are complicated and not affordable. In this study, we optimized sectioning and DESI imaging procedures and developed a more cost-effective method to identify the distribution of metabolites and categorize these compounds in plant tissues, with a special focus on traditional Chinese medicines. The study will promote the utilization of DESI in metabolite analysis and standardization of traditional Chinese medicine/ethnic medicine for research-related technologies.

In this study, a series of methods are presented to prepare DESI-MSI samples from plants, and a procedure of DESI assembly installation, MSI data acquisition, and processing is described in detail. This protocol can be applied in several conditions for acquiring spatial metabolome information in plants.

Geleneksel Çin Tıbbının Mekansal Metabolomunda Tanımlanan Metabolitlerin DESI-MSI Kullanılarak Görselleştirilmesi

The medicinal use of traditional Chinese medicine is mainly due to its secondary metabolites. Visualization of the distribution of these metabolites has ...

Enema of Traditional Chinese Medicine for Patients with Severe Acute Pancreatitis

Severe acute pancreatitis (SAP) is characterized by high mortality rates, numerous complications, and extreme difficulties in treatment. A traditional Chinese medicine (TCM) enema has been widely utilized in clinical and experimental studies of SAP. It has been demonstrated to have beneficial effects in protecting pancreatic function and delaying disease progression. The procedure of TCM enema is to perfuse the Chinese medicinal liquid of raw rhubarb (Rheum officinale Baill. DaHuang) from the anus into the rectum and colon. Basic steps of the procedure include boiling the herbal solution in advance, using a disposable enema kit to assist patients in taking a left lying position, raising the patient's hip 10 cm, and carefully inserting the enema 30-35 cm into the anus, with a drip speed of 60-80 drops/min. The medicine liquid temperature should be equivalent to the patient's body temperature, typically between 37-39 &#176;C. The end of the enema operation should be slow, and Tui na (massage therapy) should be administered before extubation. The medication liquid should be kept in the rectum for more than 1 h. After issuing an enema, it is essential to observe the patient's feces and abdomen, and to evaluate the remission of abdominal signs and symptoms.

An enema is a type of traditional Chinese medicine (TCM) therapy used to treat severe acute pancreatitis (SAP). The therapy involves instilling a TCM liquid into the rectum and colon through the anus to keep the liquid in the intestine, absorbing through the intestinal mucosa. This study aims to standardize the enema procedure for SAP patients.

Şiddetli Akut Pankreatitli Hastalar için Geleneksel Çin Tıbbı Lavmanı

Severe acute pancreatitis (SAP) is characterized by high mortality rates, numerous complications, and extreme difficulties in treatment. A traditional ...

A Traditional Chinese Medicine Characteristic Therapy for Bronchial Asthma: Moxibustion

Bronchial asthma is a chronic inflammatory disease of the airway which can lead to symptoms such as recurrent wheezing, shortness of breath, chest tightness, or cough, as a result of increased airway reactivity. With high diurnal variation, these symptoms often occur or worsen at night or in the morning. By burning and roasting the Chinese medica above human acupoints, moxibustion is a type of treatment that stimulates the activity of the human meridians through drugs and heat stimulation to prevent and treat diseases. According to the principle of syndrome differentiation and treatment of traditional Chinese medicine, acupoints are selected on the corresponding parts, which has a definite effect. It is regarded as a characteristic traditional Chinese medicine therapy for bronchial asthma. This protocol elaborates the methods and steps of patient management, material preparation, selection of acupoints, operation, and postoperative nursing to ensure safe and effective moxibustion treatment to significantly improve the clinical symptoms and quality of life of patients with bronchial asthma.

This protocol presents a curative procedure of moxibustion in treating patients with bronchial asthma.

Bronşiyal Astım için Geleneksel Çin Tıbbı Karakteristik Tedavisi: Yakı

Bronchial asthma is a chronic inflammatory disease of the airway which can lead to symptoms such as recurrent wheezing, shortness of breath, chest ...

Diz Osteoartritinin Tuina ile Bir Tavşan Modelinde Tedavi Edilmesi

Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of Tuina in treating KOA has been confirmed, but the underlying mechanism needs to be investigated. This study aims to establish a scientifically feasible KOA rabbit model treated with Tuina to reveal the underlying mechanisms. For this, 18, 6-month-old normal-grade male New Zealand rabbits were randomly divided into sham, model, and Tuina groups, with 6 rabbits in each group. The KOA model was established by injecting 4% papain solution into the knee joint cavity. The Tuina group was intervened with Tuina combined with the knee joint rotary correction method for 4 weeks. Only the standard grasping and fixation were performed in sham and model groups. At the end of the 1-week intervention, the knee joint range of motion (ROM) was observed, and cartilage hematoxylin-eosin (HE) staining was done. The study shows that Tuina could inhibit chondrocyte apoptosis, repair cartilage tissue, and restore knee joint ROM. In conclusion, this study demonstrates the scientific feasibility of Tuina treatment for KOA model rabbits, highlighting its potential application in the study of KOA and similar knee joint-related conditions.

Yazar Spotlight: Tuina'nın Diz Osteoartritinin Tedavisinde Etkinliğini Keşfetmek İçin Bir Tavşan Modeli Kullanma 

The protocol describes a method for Tuina intervention in a rabbit model of knee osteoarthritis.

Diz Osteoartritinin Tavşan Modelinde Tuina Müdahalesi

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of ...

Liujunzi Kaynatma: UC-CRC'nin Önlenmesi İçin Etkili Bir Tedavi

Establishment of Coloproctitis Cancer Model in Mice and Evaluation of Therapeutic Effect of Chinese Medicine

Colorectal cancer (CRC) is a common malignancy of the digestive system and has become the third most common malignancy worldwide and the second leading cause of malignancy-related death. Ulcerative coloproctitis (UC) is a precancerous lesion, and UC-associated CRC (UC-CRC) is the most common subtype of CRC. Therefore, a reasonable UC-CRC model is the cornerstone and guarantee of new drug development. Traditional Chinese medicine (TCM) has been widely used in the treatment of UC-CRC due to its good efficacy. As a classic tonic prescription of TCM, Liujunzi decoction (LJZD) has been widely used in the treatment of UC-CRC. In this study, a UC-CRC model was established by combining azomethane and dextran sulfate sodium, and the LJZD was administered. The data confirmed that LJZD can effectively inhibit cancer transition in UC-CRC by using mouse body weight, colorectal length, pathological and inflammatory factors, colorectal barrier function, and cancer markers. This protocol provides a system for evaluating the efficacy of TCM in the prevention and treatment of UC-CRC.

Yazar Spotlight: Koloproktit Kanseri için Geleneksel Çin Tedavisi Olarak Liujunzi Decottion

This protocol provides a mouse model of ulcerative coloproctitis-associated colorectal cancer induced by azomethane combined with dextran sulfate sodium. The model was used to evaluate the efficacy of traditional Chinese medicine compounds in the prevention and treatment of colorectal cancer.

Farelerde Koloproktit Kanser Modelinin Oluşturulması ve Çin Tıbbının Terapötik Etkisinin Değerlendirilmesi

Colorectal cancer (CRC) is a common malignancy of the digestive system and has become the third most common malignancy worldwide and the second leading ...