Mevcut çalışma, (1) Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81973877 ve 82174408), (2) Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2020YFE0201600), (3) Şanghay En Öncelikli Araştırma Merkezi inşaat projesi (2022ZZ01009), (4) Hastane TCM Hazırlığının Endüstriyel Dönüşümü için Şanghay İşbirlikçi İnovasyon Merkezi ve (5) Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Bütçesi kapsamındaki Araştırma Projeleri (2021LK047).

Bu protokol, örnek olarak Yiqi Jiedu kaynatma kullanılarak osteosarkom model farelerde ayrıntılı gavaj tekniğini açıklar. Bu deneyde dört haftalık erkek atletik fareler (BALB / c çıplak) kullanıldı ve Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'ndeki Laboratuvar Hayvanları Merkezi'nin SPF dereceli üreme odasında tutuldu. Tüm hayvan deneyleri, Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Yönetimi ve Komitesi tarafından onaylanmış, Laboratuvar Hayvanları için Etik Kurallarına (Hayvan Etiği Onay Numarası: PZSHUTCM2304060007) uyulmuş ve laboratuvar hayvanlarıyla ilgili uluslararası gerekliliklere sıkı sıkıya bağlı kalınarak yürütülmüştür.
1. Malzemeler
<ol><li>Aşağıdaki malzemeleri elde edin: Çin otları (Ginseng 42 g, Hedyotis diffusa 52.5 g, Dikenli takke otu 31.5 g), 1 mL şırınga ve 12G / 55 mm dirsek gavaj iğnesi (Şekil 1).</li>
</ol>2. Dozaj tayini
<ol><li>Günlük dozu şu şekilde hesaplayın: standart vücut ağırlığı 60 kg olan yetişkinler için günlük doz Ginseng 12 g, Hedyotis diffusa 15 g ve Dikenli takke otu 9 g, toplam 36 g kaynatma hazır ilaç, yani 0.6 g kaynatmaya hazır ilaçlar / kg vücut ağırlığı. Vücut yüzey alanına göre standart vücut ağırlığı 60 kg olan yetişkinler ile standart vücut ağırlığı 25 g olan fareler arasında eşdeğer doz için 12 kez, düşük doz için 6 kez ve yüksek doz için 24 kez atıfta bulunarak11 ve ön verilerimiz, mevcut çalışmada fareler için 20 kat doz oranı Yiqi Jiedu kaynatma kullanın, Bu nedenle, fareler için dozaj 12 g kaynatmaya hazır ilaçlar / kg vücut ağırlığı idi.</li>
	<li>Denklemi kullanarak her fare için dozu hesaplayın: Fare için dozaj (stand vücut ağırlığı) = yetişkin için dozaj (stand vücut ağırlığı) x 20 (belirlenmiş eşdeğer doz oranı). Her farenin günlük dozu, 200 μL'de 0.3 g [(12 g kaynatmaya hazır ilaçlar / 1000 g vücut ağırlığı) x 25 g vücut ağırlığı] ve nihai konsantrasyon 1.5 g / mL'dir.</li>
	<li>Yiqi Jiedu kaynatma grubundaki fareler (n = 7) için 28 gün boyunca gavaj uygulaması ile toplam kaynatmaya hazır ilaçları 58.8 g olacak şekilde hesaplayın. 1,5 g/mL'lik bir nihai konsantrasyona ulaşmak için bunu 39,2 mL'ye konsantre edin.</li>
	<li>Kaynatma ve gavaj aşamaları sırasında olası ilaç kaybını göz önünde bulundurarak ve hesaplama kolaylığı için, toplam 126 g (Ginseng 42 g, Hedyotis diffusa 52.5 g, Dikenli takke bitkisi 31.5 g) kaynatmaya hazır ilaç hazırlayın, 84 mL'lik bir son hacme konsantre edin.</li>
</ol>3. Hücre kaynağı ve kültürü
<ol><li>ATCC hücre bankasından insan kaynaklı 143B osteosarkom hücreleri satın alın.</li>
	<li>10 cm'lik bir hücre kültürü kabında% 10 FBS, 100 U / mL penisilin ve 100 μg / mL streptomisin içeren 10 mL MEM ortamında 1 x 106 143B hücrelerini tohumlayın.</li>
	<li>Hücreler% 80 -% 90 birleşene kadar% 5 CO2 inkübatörde 37 ° C'de 143B hücrelerini kültürleyin.</li>
</ol>4. Modelleme yöntemleri
<ol><li>% 80 birleşik kültürlenmiş 143B hücrelerini toplayın, 6 mL% 10 serum içeren MEM ortamına yeniden süspanse edin ve 1 x 107 hücre / mL nihai konsantrasyona sahip bir hücre süspansiyonu yapmak için 1: 1 hacim oranında bazal membran matris jeli ile karıştırın.</li>
	<li>Önceki yayınımız 12'de açıklandığı gibi, bir in situ ksenogreft osteosarkom fare modeli oluşturmak için her bir timik farenin sol tibiasına10 μL hücre süspansiyonu enjekte edin. Kısaca adımlar aşağıdaki gibidir.<ol><li>Hücreleri PBS ile 2 kez yıkayın. Hücreleri 3 dakika boyunca 1.5 mL% 0.25 tripsin ile tripsinize edin. 6 mL %10 serum içeren MEM ortamı ekleyin. Hücreleri 15 mL'lik bir santrifüj tüpünde toplayın.</li>
		<li>Hücre sayma plakasının haznesine 20 μL hücre süspansiyonu aspire edin ve otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücre konsantrasyonunu hesaplayın. Hücreleri oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 800 x g'da santrifüjleyin.</li>
		<li>Süpernatanı bir pipetle atın, hücre peletini 8.5 mg/mL bazal membran matrisinde yeniden süspanse edin ve buz üzerine yerleştirin.</li>
		<li>Fareleri %2 izofluran ve %98 oksijene (oksijen akış hızı, 2 L/dk) maruz bırakarak uyuşturun. Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için gözlere az miktarda veteriner merhemi sürün.</li>
		<li>Tüm prosedürü iyi havalandırılan bir alanda gerçekleştirin. Osteosarkom hücre enjeksiyonundan önce, ayağa hafifçe dokunarak her farenin derin anestezi altında olduğundan emin olun; Farenin hala seğirme veya sarsıntı gibi yanıtları varsa. Farenin hala seğirme veya sarsıntı gibi yanıtları varsa, bu yanıtlar kaybolana kadar daha uzun süre bekleyin.</li>
		<li>Fareyi sırtüstü pozisyona getirin. Başparmağınızı ve işaret parmağınızı kullanarak farenin ayak bileğini tutun ve tibianın enjeksiyon bölgesini üç alternatif betadin ve% 70 etanol çubuğu ile dezenfekte edin.</li>
		<li>İğneyi 1 mL'lik bir şırıngaya takın ve iğne ucunu tibia eksenine paralel olarak enjeksiyon bölgesine doğru tutun. Tibia platformundan tibianın distal ucuna doğru bir delik açmak için iğneyi perkütan olarak sokun.</li>
		<li>Daha önce buz üzerine yerleştirilen osteosarkom hücre süspansiyonunu mikro hacimli bir şırıngaya yükleyin ve tibiadaki 1 mL'lik şırıngayı osteosarkom hücresi yüklü mikro hacimli şırınga ile değiştirin. Her bir timik farenin kaval kemiğine yaklaşık 10 μL (1 x 107 hücre/mL) osteosarkom hücre süspansiyonunu yavaşça enjekte edin.</li>
		<li>Mikro hacimli şırıngayı enjeksiyon bölgesinden çıkarın ve enjeksiyon bölgesini pamuklu çubukla yaklaşık 30 saniye bastırın. Fareyi temiz bir kafese geri koyun ve 10 dakika boyunca iyileşmesini gözlemleyin.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Gavaj için geleneksel Çin tıbbı kaynatma formülünün hazırlanması (Şekil 2)
<ol><li>Dozu 2. adıma göre hesaplayın.</li>
	<li>Pahalı bitki Ginseng hariç, tüm şifalı bitkileri kaynatma için, ilaç yüzeyinden 3 cm daha yüksek bir seviyeye sahip içme suyunda 30 dakika bekletin ve ardından kaynatma işlemini aşağıda açıklandığı gibi 2x yapın.</li>
	<li>İlk kaynatma işlemini güçlü bir ateşte kaynayana kadar ısıtarak ve ardından hafif bir ateşte 15-25 dakika ısıtarak gerçekleştirin. Hafif ateş, tipik olarak 80 °C ila 100 °C arasında değişen sıcaklıklara sahip düşük güçlü bir ısıyı ifade ederken, güçlü ateş, tipik olarak 200 °C ila 300 °C arasında değişen yüksek güçlü bir ısıyı ifade eder.</li>
	<li>Kaynatma sıvısını bir kaba dökün.</li>
	<li>İkinci kaynatmayı, şifalı bitkileri içme suyunda, ilaç yüzeyini batırmaya yetecek bir hacimde, güçlü bir ateşte kaynatarak ve ardından hafif bir ateşte 15-25 dakika ısıtarak gerçekleştirin.</li>
	<li>Kaynatma sıvısını adım 5.4'teki gibi aynı kaba dökün.</li>
	<li>Pahalı olduğu için 42 g Ginseng'i ayrı ayrı, ilaç yüzeyinden 3 cm daha yüksek içme suyuyla ıslatın ve kaynatın.</li>
	<li>Islatılmış Ginseng'in ilk kaynatma işlemini 60 dakika boyunca güçlü bir ateşte ısıtarak gerçekleştirin. Kaynatma sıvısını adım 5.4'teki gibi aynı kaba dökün.</li>
	<li>Ginseng'in ikinci kaynatma işlemini, 40 dakika boyunca hafif bir ateşte ısıtarak, ilaç yüzeyini batırmaya yetecek bir hacme sahip içme suyunda gerçekleştirin. Kaynatma sıvısını adım 5.4'teki gibi aynı kaba dökün. NOT: Kaynatma için kullanılan kaplar, tıbbi maddelerle olası kimyasal reaksiyonları önlemek için güveç (klinik uygulamada en yaygın kullanılan), seramik, cam ve paslanmaz çelik gibi kimyasal olarak kararlı olmalıdır. Farklı adımlardan elde edilen tüm kaynatma sıvıları aynı kaba konulmalıdır.</li>
	<li>Lastik bantlı bir ölçüm kabının ağzına sabitlenmiş üç kat gazlı bez kullanarak kaynatma sıvısını karıştırın ve süzün.</li>
	<li>Filtrelenmiş kaynatma maddesini bir tencerede güçlü bir ateşte kaynatın, ardından hafif ateşe geçin ve hedef konsantrasyona ulaşana kadar hafif ateşi tutun (son konsantrasyon 1,5 g/mL olan 84 mL'lik bir nihai hacim).</li>
	<li>1 hafta boyunca intragastrik uygulama için gereken doza göre konsantre kaynatma 21 mL alikot hazırlayın ve alikotları -20 ° C'de buzdolabında saklayın.</li>
</ol>6. Bir gavaj cihazı kullanarak farelerde gavaj uygulaması
<ol><li>Fareyi fare kafesinin yüzeyine veya daha pürüzlü başka bir yüzeye yerleştirin.</li>
	<li>Farenin kuyruğunu sağ elin başparmağı ve işaret parmağıyla kavrayın. Ardından, sol elin başparmağı, işaret parmağı ve orta parmağıyla farenin boynunu kavrayın.</li>
	<li>Farenin başını, boynunu ve gövdesini düz bir çizgide yapmak için sol elin diğer iki parmağıyla fare kuyruğunu tutun. NOT: Tüm kavrama işlemi boyunca fareyi rahat tuttuğunuzdan emin olun. Fare hareket etmekte zorlanmaya devam ederse, fare rahatlayana kadar kavrama işlemi gerçekleştirilmelidir.</li>
	<li>Gavaj cihazını sağ elinizde tutun ve 20 g vücut ağırlığına sahip bir fare için 200 μL kaynatma formülü yükleyin (100 μL kaynatma formülü/farenin 10 g vücut ağırlığı).</li>
	<li>Gavaj iğnesini köşeden ağza sokun ve dili farenin üst çenesine doğru itin.</li>
	<li>Fare gövdesini aynı yönde tutun ve gavaj iğnesinin yaklaşık 10 mm'si dışarıda kalana kadar gavaj iğnesini yemek borusu boyunca mideye doğru hafifçe itin. NOT: Gavaj iğnesi yemek borusuna girdiğinde çukurluk hissi vardır. Fareye sokulan gavaj iğnesinin uzunluğu sternumun tepesine kadar ölçülmelidir. Gavaj iğnesinin toplam uzunluğu 60 mm'dir (Şekil 3), bu nedenle, kaynatma formülü farenin midesine enjekte edilmeden önce yaklaşık 50 mm'lik gavaj iğnesi farenin gövdesine yerleştirilmelidir.</li>
	<li>Kaynatma formülünü farenin midesine enjekte edin. Dirençle karşılaşmak veya ağız köşesinden sıvı gelmesi, gavaj iğnesinin yanlış yerleştirilmesi anlamına gelir ve bundan kaçınılmalıdır. Ek olarak, kaynatma formülü kalınsa enjeksiyon hızı yavaşlatılmalıdır.</li>
	<li>Fareyi bırakın ve 10 dakika boyunca gözlemleyin. Solunum anormalliği gözlenmezse gavaj başarılı olur ve fareyi kafese geri döndürür (Şekil 4).</li>
</ol>7. Tedavi süresi
<ol><li>Yiqi Jiedu kaynatma işleminin terapötik etkinliğini keşfetmek için bir kontrol grubu ve bir Yiqi Jiedu kaynatma grubu kurun. Kontrol grubundaki fareler için, 28 gün boyunca günde bir kez fizyolojik salin uygulayın. Yiqi Jiedu kaynatma grubundaki fareler için, Yiqi Jiedu kaynatma işlemini 28 gün boyunca günde bir kez uygulayın.</li>
</ol>8. Olumsuz reaksiyonlar
<ol><li>Farelerin kafese geri yerleştirildikten sonra, kilo kaybı ve yiyeceklerin mideye girememesi nedeniyle zihinsel durumun azalması da dahil olmak üzere durumunu yakından gözlemleyin.</li>
	<li>Fareler, gıdaya bağlı trakeal tıkanıklık nedeniyle nefes almada zorluk ve nefes darlığı yaşayacak ve trakeayı temizlemek için öksüreceklerdir. Gavaj sırasında bu semptomlardan herhangi biri gözlenirse, gavajı hemen durdurun ve farelere ötenazi yapın.</li>
</ol>

Osteosarkom Farelerinde Bitki Kaynatma Formülasyonu ve Gavaj Standardizasyonu

<ol>
	<li>Gao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discussion+on+advantages+and+improvement+of+traditional+Chinese+medicine+decoction.">Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction.</a> Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).</li><li>An, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interpretation+on+specification+of+traditional+Chinese+medicine+decoction.">Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction.</a> Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+strategies+in+standard+decoction+of+medicinal+slices.">Research strategies in standard decoction of medicinal slices.</a> China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).</li><li>Luo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+soaking+traditional+Chinese+medicine+before+decoction+on+active+components.">Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components.</a> Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).</li><li>Liu, F., Chen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+standardization+of+decocting+methods+of+modern+decoction.">On the standardization of decocting methods of modern decoction.</a> Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+decocting+times+and+instrument+on+the+quality+of+decoction.">Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction.</a> J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbal+decoctosome+is+a+novel+form+of+medicine.">Herbal decoctosome is a novel form of medicine.</a> Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).</li><li>Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflections+on+PK+-+PD+model+based+on+animal+experiments+for+study+of+Chinese+medicine.">Reflections on PK - PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine.</a> Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).</li><li>Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+and+reflection+on+standard+decoction+of+Chinese+materia+medica.">Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica.</a> Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).</li><li>. Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers">https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers</a> (2005)</li><li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratibial+osteosarcoma+cell+injection+to+generate+orthotopic+osteosarcoma+and+lung+metastasis+mouse+models.">Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models.</a> J Vis Exp. (176), 63072 (2021).</li><li>He, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+animal+science.">Laboratory animal science.</a> , (2006).</li><li>Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+different+animal+models+of+fetal+alcohol+spectrum+disorders+and+their+use+in+studying+complex+behaviors.">A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors.</a> Fronti Pedia. 2, 93 (2014).</li><li>Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+mice+undergoing+serial+oral+gavage+while+awake+or+anesthetized.">Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).</li><li>Recena Aydos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonalcoholic+fatty+liver+disease+induced+by+high-fat+diet+in+C57bl/6+models.">Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models.</a> Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).</li></ol>

Yazarlar açıklayacak hiçbir şeyleri olmadığını beyan ederler.

Geleneksel Çin tıbbında reçete edilen bitkilerin klinik etkinliği büyük ölçüde uygulanan doz ve dozaj formu ile ilişkilidir; Bu nedenle, standartlaştırılmış bir kaynatma stratejisinin oluşturulması ve yetenekli bir uygulama süreci, klinik uygulamada ve deneysel sonuçların güvenilirliğinin arttırılmasında gereklidir.
Bu çalışmada, ilk olarak, geleneksel Çin tıbbının klinik uygulamasında kullanılan Çin bitkilerinin standartlaştırılmış kaynatma için ayrı...

Kaynatma formülü, geleneksel Çin tıbbının ve sıvı tıbbi ilaçlarınen yaygın kullanılan dozaj şeklidir 1,2. Geleneksel Çin tıbbının kaynatma formülü, otların ıslatıldıktan sonra suda kaynatılması ve ardından tortuların atılması için süzülmesiyle işlenir.
Kaynatma formülü, özellikle geleneksel Çin tıbbında kanıta dayalı tedavinin özelliklerine uygun olarak, klinik gerekliliklere göre kişiselleştirilebildiğinden, trans-oral uygulama yoluyla bu dozaj formu, spesifik ve yeri doldurulamaz avantajlarla binlerce yıldır klinik uygulamada uygulanmaktadır 3,4. Kaynatma formülünün kalitesi doğrudan klinik etkinlik ile ilgilidir. Bu nedenle, kaynatma formülü, aktif bileşenlerin maksimum düzeyde ekstrakte edilmesini ve korunmasını sağlamak için standartlaştırılmış kaynatma yöntemlerinin ilkelerine göre hazırlanmalıdır3. Bu arada, kaynatmaya hazır ilaçlar, klinik uygulamada kullanılan çiğ Çin bitkilerinin ana şeklidir; Reçete edilen kaynatmaya hazır ilaçların kalite standartları ve üretim yöntemleri Çin Farmakopesi2 hükümlerine uygun olmalıdır. Ayrıca, reçete edilen kaynatmaya hazır ilaçlar, özel bir ilaç kabında ısıtılarak kaynatılmadan önce en az 30 dakika soğuk içme suyuna batırılmalıdır5. Çalışmalar, aktif bileşenlerin çoğunun iki kez kaynatma yoluyla ekstrakte edilebileceğini göstermiştir ve Tıbbi Kurumlarda Geleneksel Çin İlaçlarının Kaynatma Odalarının İdaresi için Uygulama Kuralları da kaynatma işleminin iki kez yapılmasını öngörmektedir 4,6,7. Sert dokulu veya tonikli olanlar gibi özel Çin otları reçete edilirse, kaynatma süresinin uzatılması önerilir. Reçete edilen kaynatmaya hazır ilaçların ıslatıldığı kaptan başlayarak, kaynatma formülü ile doğrudan temas eden kaynatma kapları ve saklama kapları, kimyasal olarak stabil olmalı ve güveç, seramik, cam ve paslanmaz çelik gibi kapaklara sahip olmalıdır. Bununla birlikte, alüminyum ve sıradan plastik ürünler kullanılmamalı, terapötik etkinliği azaltacak ve hatta zararlı etkiler yaratacak olası kimyasal reaksiyonlardan kaçınmak için demir ve diğer aşındırıcı kaplar yasaklanmalıdır 4,6,7.
Klinik deneylerin yapılmasının sınırlamaları nedeniyle, fareler gibi insan hastalıklarını taşıyan küçük hayvanlar, geleneksel Çin tıbbının kaynatma formülü de dahil olmak üzere farklı müdahalelerin terapötik etkinliğini ve kapsamlı mekanizmalarını araştırmak için tıbbi araştırmalarda sıklıkla kullanılır 8,9; Bununla birlikte, insanlardan farklı olarak, kaynatma formülleri her gün hazırlanmalı, birlikte karıştırılmalı ve klinik uygulamada günde 2 kez taze olarak uygulanmalıdır. Hayvanlar, ilaçlarını gerekli dozajla zamanında gönüllü olarak alamazlar ve geleneksel Çin tıbbı ile ilgili hayvan deneylerinin çoğu, şu anda kaynatma formüllerinin gavaj bazlı oral uygulamasıdır. İn vivo hayvan deneyleri için kullanılan kaynatma formülleri önceden hazırlanmalı, aliquoted'lanmalı, -20 °C'de saklanmalı ve kullanımdan hemen önce çözülmelidir 3,4,10. Ayrıca, standart altı hayvan immobilizasyonu ve gavaj iğnesi manipülasyonu, gereksiz yaralanma ve olumsuz duygu riskini artırır. Bu nedenle, trans-oral ilaç dağıtımının önemli bir yöntemi olarak, yetenekli gavaj tekniği, olası özofagus yaralanmasını ve ilaç dökülmesini önlemek için özellikle önemlidir, böylece her model hayvanın doğru deneysel sonuçlar elde etmek için eşit miktarda reçeteli bitkisel ilaç almasını sağlar. Burada, geleneksel Çin tıbbının kaynatma formülü için bir gavaj protokolü sunuyoruz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>143B cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-8303</td>
			<td>osteosarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd</td>
			<td>R500IP</td>
			<td>The Equipment of Anesthesia mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic cell counter</td>
			<td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td>
			<td>IC1000</td>
			<td>Counting cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c athymic mice</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td>
			<td>Male</td>
			<td>Animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barbed skullcap herb</td>
			<td>Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd.</td>
			<td>20230606</td>
			<td>Decoction-ready medicines&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd</td>
			<td>356234, BD, Matrigel</td>
			<td>re-suspende cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube (15 mL)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>430790, Corning</td>
			<td>Centrifuge the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm)</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd.</td>
			<td>C21014-12</td>
			<td>Component of gastric perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Haishi Hainuo Group Co., Ltd.</td>
			<td>LC45</td>
			<td>Decoction filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ginseng</td>
			<td>Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd.</td>
			<td>20220704-2</td>
			<td>Decoction-ready medicines&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hedyotis diffusa</td>
			<td>Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd.</td>
			<td>2023071107</td>
			<td>Decoction-ready medicines&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>VETEASY</td>
			<td>Anesthesia mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-volume syringe</td>
			<td>Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd</td>
			<td>0-50 &#956;L</td>
			<td>Inject precise cells into the tibia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>ST447</td>
			<td>wash the human osteosarcoma cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands</td>
			<td>Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>XPJ</td>
			<td>Fixing gauze on the measuring cup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL )</td>
			<td>Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd.</td>
			<td>SBM0040</td>
			<td>Component of gastric perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>25200056, Gibco</td>
			<td>trypsin treatment of cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

gavage strategy for decoction formula of traditional chinese medicine in osteosarcoma model mice

Kaynatma formülü, geleneksel Çin tıbbında en sık kullanılan dozaj şeklidir ve hastaların spesifik sendromlarına göre hızlı etki, kolay emilim ve bireyselleştirilmiş tedavi ile karakterize edilen trans-oral uygulama ile binlerce yıldır klinik uygulamada uygulanmaktadır. Kaynatma formülünün kalitesi, geleneksel Çin tıbbının klinik etkinliğinden doğrudan sorumludur; Bu nedenle, kaynatma formülünün standardizasyon süreci, öznel faktörlerin neden olduğu kaynatma kalitesindeki farklılıkları önlemek için önemlidir. Bu arada, klinik deneylerin yapılmasının sınırlamaları nedeniyle, fareler gibi insan hastalıkları taşıyan küçük hayvanlar, geleneksel Çin tıbbı için kaynatma formülü de dahil olmak üzere farklı müdahalelerin terapötik etkinliğini ve kapsamlı mekanizmalarını araştırmak için tıbbi araştırmalarda sıklıkla kullanılmaktadır. Sonuç olarak, önemli bir trans-oral uygulama yöntemi olarak, yetenekli gavaj tekniği, her model hayvana eşit miktarda ilaç uygulanmasını sağlayacak ve doğru deneysel sonuçlara yol açacak potansiyel yemek borusu hasarını ve ilaç dökülmesini önlemek için özellikle önemlidir. Ayrıca, hayvan refahını korumak ve kullanılan hayvan sayısını en aza indirmek için standartlaştırılmış kaynatma formülü hazırlama yöntemi ve vasıflı gavaj stratejisi gereklidir. Burada, örnek olarak osteosarkom fare modelinde Yiqi Jiedu kaynatma ile kaynatma formülü ve gavaj tekniğinin ayrıntılı bir standardizasyon sürecini bildirdik. Etkinlik, tümör hacmine göre değerlendirildi. Bu protokol, hayvanların korunmasını en üst düzeye çıkaracak ve araştırma verilerinin güvenilirliğini artıracak, bu nedenle in vivo olarak geleneksel Çin tıbbı için kaynatma formülünün terapötik etkinliğini ve moleküler mekanizmalarını araştırmak için etkili stratejiler sağlayacaktır.

Decoction formula is the most commonly used dosage form of the traditional Chinese medicine and the liquid medicinal drugs1,2. The decoction formula of traditional Chinese medicine is processed by decocting the herbs in water after being soaked, followed by filtering to discard the dregs.
Because the decoction formula can be individualized based on clinical necessities, especially in line with the characteristics of evidence-based treatment in traditional Chinese medicine, this dosage form via trans-oral administration has been applied in clinical practice for thousands of years with specific and irreplaceable advantages3,4. The quality of the decoction formula is directly related to the clinical efficacy.&#160;Therefore, the decoction formula must be prepared based on the principles for the standardized decoction methods to ensure the active ingredients are maximally extracted and protected3. Meanwhile, decoction-ready medicines are the main form of raw Chinese herbs used in clinical practice; the quality standards and production methods of prescribed decoction-ready medicines must comply with the provisions of the Chinese Pharmacopoeia2. Moreover, the prescribed decoction-ready medicines must be soaked in cold drinking water for at least 30 min before being decocted in a special pharmaceutical pot by heating5. Studies have shown that most of the active ingredients can be extracted by decocting for two times, and the&#160;Code of Practice for the Administration of Decoction Rooms of Traditional Chinese Medicines in Medical Institutions also prescribes decoction to be done twice4,6,7. If special Chinese herbs, such as one with hard texture or tonics, are prescribed, the decoction time is recommended to be extended. The decoction utensils and storage containers that directly come in contact with the decoction formula, starting from the container in which the prescribed decoction-ready medicines are soaked, should be chemically stable and have lids, such as casseroles, ceramics, glass and stainless steel. However, aluminum and ordinary plastic products should not be used, while iron and other corrosive utensils should be prohibited to avoid possible chemical reactions, which will reduce therapeutic efficacy and even produce harmful effects4,6,7.
Due to the limitations of performing clinical experiments, small animals bearing the human diseases, such as mice, are often used in medical research to explore the therapeutic efficacy and comprehensive mechanisms of different interventions including the decoction formula of traditional Chinese medicine8,9; however, unlike humans, the decoction formulas should be prepared every day, mixed together, and freshly administered 2x a day in clinical practice. Animals are unable to voluntarily take their medications on time with the required dosage, and most of the animal experiments related to traditional Chinese medicine are gavage-based oral administration of the decoction formulas at present. The decoction formulas used for in vivo animal experiments should be prepared in advance, aliquoted, stored at -20 &#176;C and thawed just before use3,4,10. Moreover, substandard animal immobilization and gavage needle manipulation increase the risk of unnecessary injuries and negative emotions. Therefore, as an important method of trans-oral drug delivery, the skilled gavage technique is particularly important to avoid possible esophageal injury and drug spillage, thus ensuring that each model animal receives an equal amount of prescribed herbal medicine to achieve accurate experimental results. Here, we provide a gavage protocol for the decoction formula of traditional Chinese medicine.

Yazar Spotlight: Gelişmiş Hayvan Çalışmaları için Standartlaştırılmış Bitkisel Kaynatma Protokolü

Osteosarkom Model Farelerde Geleneksel Çin Tıbbının Kaynatma Formülü için Gavaj Stratejisi

This study provides a detailed and standardized protocol for about precaution preparation under gradual operation that's providing a reference for those in need. Our research ensures that each animal is dosed equally to produce accurate results. Our study aims to maximize the animal protection and improve the reliability of results from studies of about Decoction formulations.

Yiqi Jiedu kaynağının in vivo osteosarkomun büyümesi üzerindeki inhibitör etkisi, 143B osteosarkom hücrelerinin timik farelerin tibiasına enjekte edilmesiyle hazırlanan bir intra-tibial ksenogreft osteosarkom fare modelinde belirlendi. Yiqi Jiedu kaynatma, Yiqi Jiedu kaynatma grubunun farelerine 143B enjeksiyonunun ikinci gününden başlayarak 28 gün boyunca gavaj yoluyla uygulandı. Kontrol grubundaki farelere serum fizyolojik verildi. Tüm farelere 28 gün sonra ötenazi yapıldı. Sonuçlar, Yiqi ...

Protokol, örnek olarak osteosarkom fare modelinde Yiqi Jiedu kaynatma ile kaynatma formülü ve gavaj tekniğinin ayrıntılı bir standardizasyon sürecini sağlar. Hayvanların korunmasını açıklar ve araştırma verilerinin güvenilirliğini artırır, in vivo kaynatma formüllerinin terapötik etkinliğini ve moleküler mekanizmalarını araştırmak için etkili stratejiler sağlar.

Decoction formula is the most commonly used dosage form in traditional Chinese medicine and applied in clinical practice for thousands of years by ...

Bu çalışma, ihtiyacı olanlara referans sağlayan kademeli operasyon altında önlem hazırlığı için ayrıntılı ve standartlaştırılmış bir protokol sunmaktadır. Araştırmamız, doğru sonuçlar elde etmek için her hayvanın eşit dozda alınmasını sağlar. Çalışmamız, hayvanların korunmasını en üst düzeye çıkarmayı ve kaynatma formülasyonları ile ilgili çalışmalardan elde edilen sonuçların güvenilirliğini artırmayı amaçlamaktadır.

gavage-strategy-for-decoction-formula-traditional-chinese-medicine

Research

JoVE Journal

Medicine

Gavage Strategy for Decoction Formula of Traditional Chinese Medicine in Osteosarcoma Model Mice

382 Görüntüleme.  Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. Bu çalışma, ihtiyacı olanlara referans sağlayan kademeli operasyon altında önlem hazırlığı için ayrıntılı ve standartlaştırılmış bir protokol sunmaktadır. Araştırmamız, doğru sonuçlar elde etmek için her hayvanın eşit dozda alınmasını sağlar. Çalışmamız, hayvanların korunmasını en üst düzeye çıkarmayı ve kaynatma formülasyonları ile ilgili çalışmalardan elde edilen sonuçların güvenilirliğini artırmayı amaçlamaktadır.