التحليل الكمي لمستقلبات فيتامين أ الغذائية في أنسجة العين وغير العينية في الفئران باستخدام كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء

يبحث مختبرنا في اثنين من الناقلين الهامين لفيتامين أ ، STRA6 و Rbpr2. تسهل بروتينات الغشاء هذه تناول فيتامين أ في الدم في الأنسجة مثل العين والكبد. من خلال HPLC ، يمكننا التحقيق في الوظائف الفسيولوجية لهذه الناقلات عن طريق عمل ملف تعريف جهازي لفيتامين أ في الفئران المعدلة وراثيا.

تقنية أخرى مستخدمة في مجالنا هي Surface Plasmon Resonance ، SPR الذي يفحص الصلات المرتبطة وحركية البروتين حسب رغبته وقد طبقنا SPR للتحقيق في الارتباط بين STRA6 أو Rbpr2 ، مركب ربط الريتينول RBP4. أحد التحديات الحالية لهذه الطريقة هو معدل نقل العينة. تعد خطوة تبخر المذيبات عنق الزجاجة الرئيسي في هذا البروتوكول ، ويجب على الباحثين في المستقبل تجربة طرق التجفيف مثل تبخر النيتروجين ، والتي تتمتع بإنتاجية أكبر بكثير عند مقارنتها بالتبخر الفراغي.

لقد حددنا دور Rbpr2 كميسر مهم في الحفاظ على توازن فيتامين أ الجهازي من خلال وظيفته في الكبد. وقد أدى اضطراب تعبير Rbpr2 في الفئران المعدلة وراثيا إلى اضطراب كبير في مستويات فيتامين أ عبر جميع الأنسجة الجهازية التي تم فحصها كما تم تحديدها كميا من خلال HPLC. تستخدم معظم البروتوكولات الأخرى في الكشف عن فيتامين أ المستند إلى HPLC طرق الوجه العكسي وعادة لا تسمح لأيزومرات الريتينويد بالحل بشكل منفصل.

يسمح بروتوكول الوجه العادي الخاص بنا بحل كل من ريتينالديهايد وأيزومرات الشبكية ، مما يسمح لنا بإنشاء ملف تعريف مفصل لفيتامين أ ، وهو أمر بالغ الأهمية نظرا لأهمية الأيزومرة الضوئية لفيتامين أ في سلسلة النقل الضوئي.