저자 스포트라이트: HPLC 기반 비타민 A 프로파일링을 사용하여 비타민 A 수송체의 생리학적 기능 조사

저희 연구실에서는 두 가지 중요한 비타민 A 수송체인 STRA6와 Rbpr2를 연구하고 있습니다. 이 막 단백질은 혈액 속의 비타민 A가 눈과 간과 같은 조직으로 흡수되는 것을 촉진합니다. HPLC를 통해 형질전환 마우스에서 전신 비타민 A 프로필을 만들어 이러한 수송체의 생리적 기능을 조사할 수 있습니다.

이 분야에서 사용되는 또 다른 기술은 단백질의 결합 친화도와 동역학을 원하는 대로 검사하는 표면 플라즈몬 공명(Surface Plasmon Resonance, SPR)이며, SPR을 적용하여 RBP4 레티놀 결합 복합체인 STRA6 또는 Rbpr2 사이의 결합을 조사했습니다. 이 방법의 현재 과제 중 하나는 시료 처리량입니다. 용매 증발 단계는 이 프로토콜의 주요 병목 현상이며, 향후 연구자는 진공 증발과 비교할 때 처리량이 훨씬 더 큰 질소 블로우 다운 증발과 같은 건조 방법을 실험해야 합니다.

우리는 Rbpr2가 간에서의 기능을 통해 전신 비타민 A 항상성을 유지하는 데 중요한 촉진제로서의 역할을 결정했습니다. 그리고 형질전환 마우스에서 Rbpr2 발현의 중단은 HPLC를 통해 정량화된 모든 검사 전신 조직에서 비타민 A 수치의 상당한 중단으로 이어졌습니다. HPLC 기반 비타민 A 검출의 대부분의 다른 프로토콜은 역면 분석법을 사용하며 일반적으로 레티노이드 이성질체가 별도로 분리되는 것을 허용하지 않습니다.

당사의 정상 얼굴 프로토콜은 레틴알데히드와 망막 이성질체의 분리를 허용하여 상세한 비타민 A 프로필을 생성할 수 있으며, 이는 광전달 캐스케이드에서 비타민 A 광이성질체화의 중요성을 감안할 때 매우 중요합니다.