Analyse quantitative des métabolites alimentaires de la vitamine A dans les tissus oculaires et non oculaires murins à l’aide de la chromatographie liquide à haute performance

Notre laboratoire étudie deux transporteurs essentiels de la vitamine A, STRA6 et Rbpr2. Ces protéines membranaires facilitent l’apport de vitamine A dans le sang dans les tissus tels que l’œil et le foie. Grâce à la HPLC, nous pouvons étudier les fonctions physiologiques de ces transporteurs en établissant un profil systémique de la vitamine A chez les souris transgéniques.

Une autre technique utilisée dans notre domaine est la résonance plasmonique de surface, SPR qui examine les affinités de liaison et la cinétique d’une protéine à son goût et nous avons appliqué la SPR pour étudier la liaison entre STRA6 ou Rbpr2, le complexe de liaison au rétinol RBP4. L’un des défis actuels de cette méthode est le débit d’échantillons. L’étape d’évaporation du solvant est un goulot d’étranglement majeur dans ce protocole, et les futurs chercheurs devraient expérimenter des méthodes de séchage telles que l’évaporation par purge d’azote, qui ont un débit beaucoup plus élevé par rapport à l’évaporation sous vide.

Nous avons déterminé le rôle de Rbpr2 en tant que facilitateur important dans le maintien de l’homéostasie systémique de la vitamine A grâce à sa fonction dans le foie. Et la perturbation de l’expression de Rbpr2 chez les souris transgéniques a conduit à une perturbation significative des niveaux de vitamine A dans tous les tissus systémiques examinés, tels que quantifiés par HPLC. La plupart des autres protocoles de détection de la vitamine A basés sur la HPLC utilisent des méthodes de face inversée et ne permettent généralement pas aux isomères rétinoïdes de se résoudre séparément.

Notre protocole facial normal permet de résoudre à la fois le rétinaldéhyde et les isomères rétiniens, ce qui nous permet de créer un profil détaillé de la vitamine A, ce qui est essentiel compte tenu de l’importance de la photoisomérisation de la vitamine A dans la cascade de phototransduction.