大鼠原位肝移植是不可缺少的生物医学研究的实验模型。在这里,我们提出我们的程序使用了50%的部分移植肝动脉重建的大鼠原位肝移植手术。
在整体或局部移植的大鼠原位肝移植(OLT)是一个不可缺少的实验模型,移植的研究,如对移植物的保存和缺血再灌注损伤1,2,免疫反应3,4 5,6血流动力学的研究,为小尺寸综合征7。大鼠肝移植动物模型的实验性手术中最困难的,需要先进的显微外科技术,需要很长的时间来学习。因此,该模型的使用受到了限制。由于可靠性和可重复性的结果是在这种复杂的动物模型用于实验的重要组成部分,它是必不可少的外科医生参与培训的标准化和复杂的程序,这种模式在大鼠OLT。
虽然不同的技术和修改的OLT的影响已报道8月以来的第一个模型是describLee 等人于1973年9的消除肝动脉重建10和袖套吻合技术引进由镰田等人。11人在这个模型中的一个重大进步,因为他们在很大程度上简化了重建的程序。在该模型中由镰田等人。,肝rearterialization也被淘汰。由于老鼠可以存活肝移植无肝动脉血流后,有相当大的争议肝动脉的价值。然而,生理的动脉模型的优势已经日益认识到,特别是在维护胆管系统8,12和肝脏完整性8,13,14。
在这篇文章中,我们提出了详细的手术过程OLT与肝动脉重建的大鼠模型中使用了50%的部分离体肝脏移植后resecTION。每个容器和胆管的重建程序,执行由以下方法:7-0聚丙烯连续缝合为超和肝下腔静脉,门静脉的袖带技术和肝动脉的支架技术和胆管。
1。基本技术和通用程序
2。术前准备
3。供体手术
从供体大鼠肝脏的去除是在图2中所示的架构。此过程大约需要imately 30-35分钟。
4 体外移植准备。
肝移植的所有程序进行在用冰冷的HTK溶液的金属杯装满。在活体外的移植准备大约需要30分钟。
5。接收方操作
收件人大鼠的移植在图9中所示的架构。受体手术需要60-70分钟,其中包括10-11分钟的无肝期时间约23日至24日夹紧时间IHVC分钟。
6。术后治疗和后续
紧随该操作后,治疗的收件人大鼠皮下注射头孢呋辛钠(16毫克/千克)和丁丙诺啡(0.1毫克/千克)在1.5ml的生理盐水溶液的总。允许的大鼠恢复60分钟,在一个特殊的深切治疗部笼与温热的空气(30-35℃)和氧供应。注射丁丙诺啡(0.1毫克/千克),皮下作为镇痛药,每12小时,3天。之后将老鼠到正常笼,并提供水和食物随意访问。
所有受体大鼠组(n = 20)的成活,无明显的并发症,直到计划安乐死采血1,3,24,和168小时(7天)后,门静脉灌注组(n = 5在每个时间点)。用27号针头直接穿刺从IHVC收集血液样本的。 5,340 xg离心10分钟,离心后,血清样品和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,这反映了移植后的肝细胞损伤程度进行分析。血清ALT水平的变化的是,在图16中所示的时间-过程。 ALT水平达到高峰,24小时(平均值±标准差:212.6±67.9 IU / L),然后在正常范围之内下降到168小时(33.6±6.8 IU / L)。
图1。袖口门静脉(PV)从14号导管,肝动脉(HA)和胆管(BD)24号导管和支架。
图2。 BD,胆管,HA,肝动脉; IHVC,肝下下腔静脉,PV,门静脉; SHVC,肝上下腔静脉切除的肝脏供体鼠的架构 。
图3。供体手术。一个将大鼠放置在一个加热垫用磁力固定器回缩系统。腹部正中切口,打开双边扩展的胆管支架插入的。经门静脉灌注肝脏。缩写解释在图2中 。
图4。扣押的门静脉压脉袋。 A,B,狄见贝基斗牛犬钳,抓住门静脉主干被放置在金属杯。将杯安装在填充有碎冰的塑料盒,门静脉通过袖带。D,门静脉的壁在压脉袋与在7以外的压脉袋的脾静脉残端外翻点的位置,并在12点钟位置延伸的袖口电子门静脉固定的圆周6-0丝线袖口上。黑色箭头表示的脾静脉残端。
图5。 体外插入到肝动脉的支架。 。肝脏被固定通过夹紧的振动板的两个边缘,和肝动脉被直线牵拉保持动脉结扎的线程。的小切口上的肝动脉的前壁具有直微钳子举行C,D。肝动脉的支架插入,并用6-0丝线固定。
图6。被删除的架构体外 50%的肝切除术。瓣灰色。 ACL,尾状叶; PCL前,后尾状叶; LLL,左外叶; LML,左中叶的部分; RML,右侧部分中叶,SRL,卓越的右侧肺叶,IRL,右下侧叶。
图7 50%。 体外肝切除。 。椎弓根的后尾叶结扎。中叶。C的左部的椎弓根结扎前50%的肝切除。50%后的肝切除。
图8。 体外肝上下腔静脉成形术。 。肝脏被固定通过夹紧的振动板的两个边缘与蚊子钳子。,。保持缝合线用7-0聚丙烯的连接在两个角的。
图9所示。接枝收件人大鼠植入的架构。重建程序进行超和肝下腔静脉(SHVC和IHVC)与7-0连续缝合,通过压脉袋的技术,门静脉(PV)和肝动脉(HA)和胆管(BD)的支架技术。
图10。直到本机肝除去受 体手术。 。腹部正中切口打开。右肾上腺静脉结扎。本机的肝脏被切除。在图2中,缩写的解释。
图11。吻合的suprahe的patic腔静脉。 ,为肝上腔静脉的末梢血管钳固定在油基粘土疙瘩。在两个角的住宿缝合保持,轻轻牵引superiolaterally,以扩大吻合。连续腔内缝合后的行进步。。正在进行中前行连续缝合。
图12。门静脉的重建。 ,。蚊子钳子夹持门静脉被固定在油基粘土被拉向肝脏肺门。 比照袖带进入门静脉中的插入。
图13。肝动脉重建。 A,B。 G>插入到受体肝总动脉分叉处,肝固有动脉(PHA)和胃十二指肠动脉(GDA)(CHA)的支架。
图14。肝下腔静脉吻合。一个在两个角的住宿缝合。连续缝合后的行。C。连续缝合前行。再灌注损伤的肝下腔静脉。在图2中,缩写的解释。
图15。所有重建程序完成。在图2中,缩写的解释。
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图16。术后血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平的变化的时间过程(= 20,N = 5在每个时间点)。数据被表示为与误差棒表示标准偏差的装置。 ALT水平在24小时达到高峰(212.6±67.9 IU / L),然后在正常范围之内下降到168小时(33.6±6.8 IU / L)。
Lee 等人报道的第一个模型大鼠OLT于1973年9,所有船只,包括肝动脉重建手工缝制的方法和使用的门体分流术,体外循环。这种模式在技术上是复杂和难以执行。接下来的模型是一个无肝动脉重建和体外分流,开发由同一作者1975年的10。随后在1979年,镰等人介绍了袖套吻合技术的模型无肝rearterialization 11。与这些修改,OLT在大鼠缩短无肝在收件人的操作的时间,简化了,并已被广泛地用作一个公认的实验模型。
然而,相当大的争议,自那时以来,在大鼠肝移植的肝动脉8的意义,因为动脉是一个艰巨的任务,但二倒是不影响移植后的生存。肝动脉,使用各种重建技术的许多研究已报道8,如主动脉段主动脉吻合3,9,17,袖套吻合技术18,19,20,一个可伸缩技术5,支架技术13, 16,以及一个套筒吻合技术12,21-23。虽然该技术对大鼠肝移植仍是不规范的今天,越来越多的动脉模型在其生理优势8,12,13,14的青睐。在上述的技术中,这是简单的和快速的执行的支架技术报道Lehmann 等人在2005年16。该研究显示了优异的成绩:,没有重建肝动脉闭塞率观察8小时,24小时,再灌注后6个月。因此,我们采用了这种技术对肝动脉。
我们PERFOR马手工缝制的吻合重建的SHVC和IHVC。这种方法提供了一个最佳的生理条件下,这会导致血栓形成的发生率降低8吻合部位,并且是最好的显微对外科医生的模拟和训练。此外,吻合口可以是可能的,即使短的容器树桩。关于的吻合IHVC,此方法并不需要很长的IHVC接枝侧与袖带吻合技术相比。因此,当供肾静脉解剖长时间来使接枝IHVC,此方法是适用于一个小的移植物的移植需要一种的长IHVC,如30%的接枝,由右横向和尾状叶和一个短的肝内腔静脉没有SHVC 2。
关于肝切除术的实验研究,至今几种方法的技术已经报道了两个主要技术是的经典质量结扎技术和船舶技术24。我们执行50%肝切除15古典绑带的技术,但在手术显微镜下使程序更细,和剩余的裂片和结构,以避免损坏。
我们描述了具有代表性的结果,在我们的模型中的受体大鼠,大鼠存活在7天的观察期,没有明显的并发症。实验不同的目的选择不同的设置,如长时间冷藏,热缺血时间延长,其中包括捐赠心脏死亡后,使用较小的肝移植或移植的肝损伤或疾病的实验模型,该模型可以修改。
在我们的经验,整个程序可能会影响移植后的生存,最可靠的参数结果大鼠OLT的三个关键因素:失血量,手术时间,Ë特别的门静脉和IHVC的阻断时间,和重建每艘船舶的充分性,这可能会导致管腔狭窄,血栓形成或出血。这种模式在培训期间,大部分故障可能会涉及到这些因素。在这个视频文章中,我们提出了一步一步的指示,为我们的模型大鼠的肝动脉重建的部分OLT的外科手术。 ,虽然大鼠模型的OLT是复杂的,需要先进的显微外科技术,本文提供了大量的实用信息,将其作为这种模式的培训和学习的一个很好的指导。学习此模型有效地缩短的学习期间,减少的数量的动物和实践所需的成本,和购买再现可靠的实验结果是特别重要的。这是符合3R的概念(替代,减少和细化)的动物实验推测,这是由Russell和Burch在1959年25。
我们没有利益冲突的披露。大鼠被安置在无特定病原体的情况下,根据实验动物科学协会(FELASA),联合会的指导方针。所有的实验都按照德国联邦法律中有关保护动物的"实验动物护理和使用指南"(美国国立卫生出版物号86-23,1985年修订)。
该的作者感谢Pascal Paschenda和Mareike舒尔茨提供的技术援助。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
名称 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
手术显微镜 | 徕卡 | M651 | |
光源 | 肖特 | KL1500LCD | |
棉签 | NOBA Verbandmittel | 974202 | |
纱布拭子(5x5厘米) | FUHRMANN | 10002 | |
聚维酮碘溶液 | Mundipharma | 6108022.00.01 | |
石油为基础的粘土 | Debika公司 | 090148 | |
TachoSil | 武田制药国际贸易有限责任公司 | EU/1/04/277/001-004 | 适用于肝表面 |
手术刀片11号 | pfm医疗 | 200130011 | 的袖口和支架的制备 |
14号导管 | 贝朗 | 4268210S | 袖口为PV |
18号导管 | 贝朗 | 4268130S | 灌注通过PV |
24号导管 | 贝朗 | 4269071S | 支架BD和HA |
4-0丝线缝合 | Resorba | H3F | 肝切除术 |
6-0丝线缝合 | Resorba | H1F | |
7-0聚丙烯缝线(聚丙烯)缝合 | 爱惜 | 8701H | SHVC和IHVC |
4-0薇乔缝线 | 爱惜 | V304H | 腹部闭合 |
5-ml注射器 | 泰尔茂 | SS + T05ES1 | 背枕 |
加热垫 | 热 | 190 x 260毫米 | |
磁性固定支架回缩系统 | 精细科学工具有限公司 | 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 | |
冷水浴 | 胡贝尔 | 740.000X | 移植保护 |
双极钳 | Söring | MBC-200 | |
蚊式钳 | BONIMED | 451-476-03 | 使用两对 |
ADSON微镊子 | Dimeda | 10.176.12 | |
弯曲英里CRO钳 | 蛇牌 | FD281R | |
直微型镊子 | Bonimed | 451-476-03 | |
弯曲的微型剪刀 | Medicon | 83年5月15日 | |
直显微剪 | 蛇牌 | FD12 | 精细切口 |
剪刀 | 蛇牌 | BC211W | |
微针持有人 | 蛇牌 | FD241R | 重建 |
市长Hegar持针器 | 瑞穗Ikakogyo | 06-798-00 | 腹部闭合 |
狄见贝基斗牛犬钳(直) | ULRICH | CV3054 | |
狄见贝基斗牛犬钳(弯) | 科德曼 | 37-1062 | |
Satinsky钳 | Mizuhoika | 09-230-24 | |
周围血管钳 | 泰利福医疗 | 353494 | 收件人SHVC |
微血管钳(一次性) | AROSurgical仪器公司 | TKM-1-60克的 | PV,移植IHVC,收件人HA |
微型血管夹(金属) | 精细科学工具有限公司 | 18052-01 | 收件人IHVC |
乳酸林格氏液 | 费森尤斯卡比 | 6150917.00.00 | |
生理盐水溶液 | DeltaSelect | 1299.99.99 | |
HTK液 | 弗朗茨·克勒博士Chemie GmbH公司 | 31268.00.00 | 保护解决方案 |
肝素钠 | Ratiopharm公司 | 5394.02.00 | 500 IU前移植灌注 |
8.4%的碳酸氢钠 | 费森尤斯卡比 | 4399.97.99 | 0.5 ml后,再灌注 |
5%葡萄糖溶液 | 贝朗 | 6714567.06.00 | 1.0 ml后,再灌注 |
Cefuroxim钠 | 费森尤斯卡比 | 38985.01.00 | 抗生素,16毫克/公斤 |
丁丙诺啡 | 埃塞克斯医药 | 997.00.00 | 止痛药,0.1毫克/千克 |
重症监护病房笼 | Brinsea制品有限公司 | Vetario S10 | 术后护理 |
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