通过嗅觉挖掘任务评估小鼠判断偏差

摘要

本文详细介绍了一种新型小鼠判断偏倚协议。还证明了这种嗅觉挖掘任务对情感状态的敏感性的证据，并讨论了其在不同研究领域的实用性。

摘要

判断偏差（JB）是处于积极和消极情感/情绪状态的个体解释模棱两可信息的方式的差异。这种现象在人类中早已观察到，处于积极状态的个体"乐观地"对模糊性做出反应，而处于消极状态的个体则表现出"悲观主义"。旨在评估动物影响的研究人员利用了这些差异反应，开发了评估判断偏差的任务，作为情感状态的指标。这些任务在各种物种和研究领域越来越受欢迎。然而，对于实验室小鼠，研究中使用最广泛的脊椎动物和严重依赖的物种来模拟情感障碍，只有一个JB任务被成功验证为对情感状态的变化敏感。在这里，我们详细介绍了这种新型小鼠JB任务，并证明了它对小鼠的影响是敏感的。虽然改进仍然是必要的，但对小鼠JB的评估为回答有关小鼠福利的实际问题和关于情感状态在转化研究中的影响的基本问题打开了大门。

引言

测量情感调节的判断偏差（以下简称JB）已被证明是研究动物情绪状态的有用工具。这种创新方法借鉴了人类心理学，因为经历积极或消极情感状态（情绪和长期情绪）的人类可靠地证明了他们处理信息的方式的差异^1，2，3。例如，经历焦虑或抑郁的人可能会将中性的面部表情解释为消极的，或将中性的句子解释为威胁^4，5。这些偏差很可能具有适应性值，因此在物种^6，7中是保守的。旨在评估动物影响的研究人员巧妙地利用了这一现象，将乐观主义视为对中性或模糊线索的奖励期望增加，并将悲观主义视为对惩罚或奖励缺失的期望增加^8，9。因此，在实验环境中，对模糊刺激的乐观和悲观反应可以分别解释为积极和消极影响的指标，分别为^10，11。

与其他动物影响指标相比，JB任务有可能成为特别有价值的工具，因为它们能够检测情感状态的价态和强度^10，11。JB任务检测阳性状态的能力（例如，Rygula等人¹²）特别有用，因为大多数动物影响指标仅限于检测阴性状态¹³。在JB任务期间，动物通常被训练对预测奖励的正判别提示（例如，高频音调）和预测惩罚的负判别提示（例如，低频音调）做出反应，然后再呈现模棱两可的提示（例如， 中间音调）⁸。如果为了回应模棱两可的线索，动物"乐观地"对积极线索执行训练的反应（好像期待奖励），这表明存在积极的判断偏差。或者，如果动物表现出消极的训练反应以避免惩罚，这表明"悲观主义"或消极的判断偏差。

自从哈丁及其同事⁸成功开发出第一个动物JB任务以来，已经为不同研究领域的各种物种开发了几个JB任务⁷。但是，尽管它们越来越受欢迎，但动物JB任务通常是劳动密集型的。此外，也许是因为它们在方法上与启发它们的人工任务不同，它们有时会产生无效或违反直觉的结果¹⁴ ，并且通常只产生很小的治疗效果大小¹⁵。因此，开发和实现 JB 任务可能具有挑战性。事实上，对于实验室小鼠，研究中使用最广泛的脊椎动物^16，17 和严重依赖的物种来模拟情感障碍¹⁸，尽管在过去十年中进行了许多尝试，但只有一项JB任务被成功验证为对情感状态变化敏感¹⁹ （参见Resasco等人的补充材料¹⁹ 以获取摘要）。本文描述了最近验证的murine JB任务，详细介绍了其生物学上的相关设计，并强调了将这种人道任务应用于测试与小鼠影响相关的重要假设的方式。总体而言，该协议可以用于研究小鼠JB上任何感兴趣的变量的情感效应。这将包括此处描述的分类治疗变量（药物或疾病影响，环境条件，遗传背景等），或与连续变量的关系（生理变化，家庭笼子行为等）。

研究方案

实验由圭尔夫大学动物护理委员会（AUP #3700）批准，符合加拿大动物护理委员会指南，并根据ARREAT（动物研究: 体内 实验报告）²⁰ 要求进行报告。

1. 实验准备

1. 实验设计（参见 表 1).
   注意:此行为测试是一项基于气味的Go/Go挖掘任务，其中老鼠必须挖掘以获得高价值或低价值的奖励。它使用一个矩形竞技场（图 1）有两只胳膊，其中一只胳膊有香味，而另一只胳膊没有香味。如下所述，在呈现模棱两可的气味混合物之前，小鼠被训练区分阳性和负性气味线索。
   1. 假随机地将笼子分配给薄荷或香草阳性判别刺激（DS +）组，如下所示。
      注意:该协议仅适用于分配到香草DS +气味混合物的小鼠（有关详细信息，请参阅代表性结果和Resasco等人¹⁹ ）。但是，强烈建议进行试点测试，以确认 DS+、DS-和不明确的混合物符合有效 JB 评估的要求（步骤 4.7.3 和 5.3）。因此，这里概述的方法包括测试香草和薄荷DS +，以提供成功满足评估JB要求的组（香草DS +小鼠）和未能满足评估要求的组（薄荷DS +小鼠）的示例。先前的试点测试将提前识别此类问题。
   2. 薄荷DS+小鼠:对于这些小鼠，在竞技场设置训练期间（见下面的步骤1.4），用薄荷气味提示标记含有高价值奖励的气味分配器和罐子，以及那些没有香草气味提示的奖励。
   3. Vanilla DS+小鼠:对于这些小鼠，在竞技场设置训练期间（请参阅下面的步骤1.4），用香草气味提示标记含有高价值奖励的气味分配器和罐子，以及那些没有薄荷气味提示的奖励。
      注意:此任务包括强化训练试验和未强化试验。在未强化的测试试验期间，小鼠无法获得任何奖励（参见下面的步骤1.4.3），并且薄荷和香草DS +小鼠的模糊气味提示是相同的1:1薄荷/香草混合物。
   4. 假性地将笼子分配给左侧或右侧气味的手臂组（平衡DS +气味组），如下所示。
   5. 左图:对于这些小鼠，在竞技场设置进行训练和测试期间（请参阅下面的步骤1.4），用适当的DS +或DS-气味提示标记左臂，并确保右臂始终无味（仅用蒸馏水标记）。
   6. 右:对于这些小鼠，在竞技场设置进行训练和测试期间（请参阅下面的步骤1.4），用适当的DS +或DS-气味提示标记右臂，并确保左臂始终无味（仅用蒸馏水标记）。
   7. 随机为每个动物分配一个"盲码"，如下所示。
      注意:盲法允许研究人员处理小鼠并对其行为进行评分，以保持对动物ID或治疗的不知情，从而避免不良的主观偏差。这是遵守ARREAGE（动物研究: 体内 实验报告）指南和其他参考文件²⁰的强制性步骤。
   8. 在电子表格中添加盲码列，其中包含每个动物ID以及它们被分配到的相应处理方法。
   9. 随机为每个动物分配一个与笼号或处理无关的唯一代码（例如，字母和数字组合"A2"）。
      注意:所有随机化都应使用随机数生成器（例如，Random.org）进行。在此随机化步骤中，在适用的情况下，在治疗，菌株等之间进行平衡。由研究助理完成这项工作，他将在整个实验过程中保持"不盲目"的治疗。此人不得在测试期间收集数据，以避免有偏见的评估。
   10. 在所有数据收集过程中，为"盲人"研究人员提供实时和视频评分延迟，以便仅使用动物的盲码进行挖掘和挖掘，以使研究人员对治疗视而不见。
       注意:数据收集期间使用的电子表格将仅包括动物的盲码以及每次试验的相应挖掘和挖掘延迟。在实验结束时，可以将相应的动物ID和治疗信息添加到电子表格中，从而"解盲"研究人员进行数据分析。
2. 材料准备。
   1. 高价值食品奖励:用手将干的加糖香蕉片分成约0.5厘米x 0.5厘米的碎片。
   2. 低价值食物奖励:使用砧板和刀，将啮齿动物的chow（从动物的常规饮食中）切成约0.125厘米³ 块。
      注意:在开始任务之前，应进行试点测试以确定高价值和低价值奖励。
   3. 薄荷和香草精华:使用1毫升注射器或微量移液器，将薄荷和香草精加入标记的离心管中。用蒸馏水以1:4稀释提取物，并通过倒置几次混合。每天制作这些，并在使用前反复倒置，以确保混合物新鲜且一致。
   4. 气味模糊的混合物:薄荷和香草香精稀释后，向离心管中加入等体积的离心管（产生稀释香精的1:1混合物）。在测试对模糊气味混合物的反应的当天进行这些，并在使用前反复反转，以确保混合物新鲜且一致。
      注意:强烈建议进行试点测试，以确定适当的稀释液和中间气味混合物，以确保模棱两可的探头的效用，因为强度可能因制造商，批次等而异。如果提供了多个模棱两可的线索，则随机将小鼠分配到接近阳性，中点，接近阴性的测试线索。有关更多详细信息，请参阅讨论。
   5. 化妆棉:将每个圆形化妆棉切成六块相等的碎片（使它们适合用作香味分配器的组织盒）。
      注意:高价值和低价值食品奖励，化妆棉和气味混合物的数量将取决于被测试的受试者数量。请参阅 表1 了解每个阶段每个受试者的试验数量， 以及表2 了解每种试验类型所需的材料。
   6. 确定实验区域:在蚁群室或其他地方的长凳上进行训练和测试。在小鼠活跃的黑暗阶段在红光下进行所有试验。
3. 预训练（实验前1周）在家庭笼子里挖掘。
   1. 对于每个被测试的笼子，将少量玉米棒垫料倒入两个挖罐中（刚好足以覆盖锅的底部），以帮助零食在被埋葬时留在锅的中心。
   2. 在一个锅中，将高价值奖励的碎片放在玉米棒层的顶部，以便笼子中的每只老鼠都可以有一块（例如，三只老鼠的笼子里有三块香蕉片）。在另一个锅中，将低价值奖励的碎片放在玉米棒层的顶部，以便笼子中的每只老鼠都可以有一块（例如，三块食物为三只老鼠的笼子）。
   3. 慢慢地将玉米棒垫料倒在每个花盆的零食上，盖上它们，并将花盆填满3厘米的高度。
   4. 同时在每个笼子中放置一个高值和一个低值的锅10分钟。10分钟后，从所有笼子中取出锅。
   5. 丢弃锅中剩余的玉米棒和零食。用70%乙醇彻底擦拭所有罐子，以防止动物和笼子的气味影响未来的试验。
   6. 每天重复一次步骤 1.3.1-1.3.5，连续 5 天。
      注意:这个阶段的目标是让所有笼子的同伴有机会在正式训练开始之前挖出和吃点心。这也有助于习惯食物奖励。
4. 竞技场设置为培训和测试。
   1. 将竞技场放在工作台上，在红灯下。用70%乙醇彻底擦拭竞技场，挖掘锅和香味分配器的所有组件，以去除先前试验中的灰尘和任何气味。
   2. 按如下方式准备挖掘锅。
   3. 将适当的食物奖励放入"无法进入的隔间"中（见 图1）。
      注意:此隔间中包含的奖励取决于在给定试验中埋藏的零食（如果有的话）（见 表2）。因此，每个锅将始终包含一块香蕉片和一块横跨两个隔间的chow。
      1. DS+异味罐:在强化试验期间，将一块食物放在无法进入的隔间中，并将一块香蕉片埋在锅的可触及区域。
      2. DS-气味罐:在强化试验期间，将一块食物和一块香蕉片放在难以接近的隔间中。在锅的可访问区域将不提供食物奖励。
      3. 无味的罐子:在强化试验期间，将一块香蕉片放在难以接近的隔间中，并将一块chow埋在锅的可触及区域。
      4. 在所有未强化的测试试验（阳性、阴性和含糊不清）中，将一块食物和一块香蕉片放在难以接近的隔间中。在锅的可访问区域将不提供食物奖励。
         注意:此步骤是为了防止埋藏的零食的气味显示哪个锅是奖励的。因此，两个隔间之间的屏障被穿孔以促进气味的传播。
   4. 将少量的玉米棒床上用品倒入每个锅中，以便在埋葬时保持食物奖励的中心。将一块适当的食物奖励（见 表2）放在玉米棒层的顶部，慢慢地将玉米棒垫料倒在零食上，盖上它们并将花盆装满3厘米高。
   5. 使用1 mL注射器或微量移液器，吸取0.1 mL适当的气味混合物（即薄荷，香草或模棱两可的混合物）或蒸馏水（见 表2），并以圆周运动将其直接注射在玉米芯上。
   6. 准备香味分配器。
      1. 将一块化妆棉片放在纸巾盒的底部。使用1mL注射器或微量移液器，吸取0.1mL适当的气味混合物（即薄荷，香草或模棱两可的混合物）或蒸馏水（见 表2）并将其注射到棉片上。用盖子盖住纸巾盒，以包裹有香味的棉花，形成一个香味分配器。
   7. 将挖罐放在手臂的末端，将香味分配器放在每个手臂的开头。将可拆卸的"门"插入暗盒插槽的正前方，以阻止进入竞技场臂并创建启动隔间（请参阅 图 1）。
      注意:挖壶、香氛分配器和注射器必须明确标明，并且在整个实验过程中仅用于一种香味，以避免无意中混合气味线索（即，在整个过程中对薄荷、香草、无香味和含糊不清的混合物使用不同的材料）。

2. 挖掘训练:5天，每天2次阳性试验（表2）

1. 快速小鼠在家庭笼子中训练1小时，方法是从料斗中取出食物。
2. 按照上面的竞技场设置说明（步骤1.4）设置竞技场以进行强化的积极试验。
3. 在挖掘训练的第1天，将食物奖励放在3厘米的玉米棒垫料上，而不是埋葬它们。
4. 在接下来的4天里，逐步将奖励埋在玉米芯下更深处，直到它们在第5天（即第1天:在玉米芯的顶部，第2天:被一层非常薄的玉米芯埋下，第3天:埋在锅底的一半，第4天: 埋到锅底的四分之三路，第5天:埋在锅底）。
5. 将小鼠从家笼子转移到空的运输笼中。在运输笼的顶部放置一张带有动物盲码的提示卡，以便进行实验的研究人员对动物ID和治疗视而不见。将小鼠带到实验区。
   注意:步骤2.1和2.5应由熟悉小鼠的研究助理完成。试验期间的后续步骤将由对动物ID（和治疗，如果适用）视而不见的研究人员进行。始终使用杯子处理（张开手）或隧道处理（用纸杯或塑料隧道）来处理小鼠，以避免传统尾巴处理的厌恶效果²¹。
6. 将小鼠从运输笼移动到竞技场的起始隔间。取下起始"门"，立即将有机玻璃盖放在竞技场上，然后启动5分钟的试用计时器。
   注意:如果来自同一笼子的多只小鼠正在接受测试，则应同时进行测试。然而，同时接受测试的动物数量将取决于可用的盲人观察者的数量;理想情况下，研究人员将一次观察和处理一只动物，但如有必要，一个人可以同时观察和处理两只动物。
7. 实时得分延迟挖掘和延迟吃掉两只手臂的奖励。
   1. 将要挖掘的延迟记录为观察到第一次挖掘的时间。挖掘被描述为老鼠用前爪和/或枪口主动推动或操纵玉米棒垫料。
   2. 将进食延迟记录为观察到第一次进食的时间。进食被描述为老鼠在将它抱在前爪并坐在趴上时消耗奖励。
8. 试验结束后，提起有机玻璃盖，然后将鼠标移回其运输笼。
9. 丢弃所有留在花盆中的玉米棒床上用品和零食。打开纸巾盒并丢弃棉花片。擦拭竞技场和挖掘锅的所有组件，并用70%乙醇彻底闻到分配器的香味。
10. 为第二次阳性试验设置竞技场（步骤1.4）。重复步骤2.6-2.9以获得强化的阳性试验。
11. 将运输笼归还给研究助理，以便将小鼠放回家中。
12. 连续 5 天重复步骤 2.1-2.11。

3. 鉴别训练:10天，每天四次试验

1. 按照步骤 1.4 中的说明设置阳性或阴性试验的竞技场（请参阅 表 2）。
2. 按照 表2 中概述的顺序每天进行两次阳性和两次阴性试验（即，第1-5天交替进行阳性和阴性试验，第6-10天进行假随机试验）。
3. 在每个培训日开始时，按照步骤 2.1 中的说明进行操作，然后按照步骤 2.5-2.10 进行操作。重复此步骤，直到小鼠总共接受了四次试验。
4. 将运输笼归还给研究助理，以便将小鼠放回家中。
5. 每天重复一次步骤 3.1-3.4，总共 10 天（即，连续两个 5 天工作周，以 2 天的周末间隔）。

4. 测试

注意:测试持续时间为3-5天（取决于每只小鼠满足学习标准所需的时间），进行阳性和阴性测试试验的会话每天五次试验，进行模糊测试时每天进行三次试验。

1. 在从料斗中取出食物，在家庭笼子中训练/测试之前，快速小鼠1小时。
2. 按照步骤 1.4中的竞技场设置说明和步骤2.5-2.10中的强化试验说明，以随机顺序进行一次阳性试验和一次阴性试验（见表1）。
3. 执行一次视频录制的未强化测试试验。
   注意:未强化的试验与强化的试验相同，但奖励的放置位置除外。因此，在未强化的试验中，每个高价值和低价值奖励的一块被放置在难以接近的隔间中，用于有香味和无味的罐子。
   1. 每天对每只小鼠进行一次阳性或阴性测试试验，直到满足学习标准（最多4天;学习标准在步骤4.7.3中描述）。确保阳性和阴性测试试验在几天内交替进行（例如，第1天:阳性测试，第2天:阴性测试，第3天:阳性测试等）。
   2. 按照步骤 1.4 中的竞技场设置说明进行操作。
   3. 将小鼠从运输笼移动到竞技场的起始隔间。在三脚架上设置摄像机，以便手臂末端的两个花盆都在视野中，然后开始录制。确保在视频中记录带有动物盲码和试验类型（阳性测试或阴性测试）的提示卡（在视频评分期间参考）。
   4. 取下起始"门"，立即将有机玻璃盖放在竞技场上，然后启动2分钟的试用计时器。
   5. 试用结束后，停止录制，将相机移到一侧，提起有机玻璃盖，将鼠标移回运输笼。
   6. 丢弃所有留在花盆中的玉米棒床上用品和零食。打开纸巾盒并丢弃棉花片。用70%乙醇彻底擦拭竞技场，挖掘锅和香味分配器的所有组件。
4. 按照步骤 1.4中的竞技场设置说明和步骤2.5-2.10中的强化试验说明，以随机顺序进行一次阳性试验和一次阴性试验（见表1）。
5. 将运输笼归还给研究助理，以便将小鼠放回家中。
6. 一旦所有小鼠都完成了每天的五次试验，将视频从相机存储卡传输到计算机进行视频评分。
7. 在测试当天对测试试验视频进行阳性和阴性评分，以评估小鼠是否符合学习标准。确保当天的视频评分，因为符合学习标准的动物将在第二天接受模棱两可的测试。
   1. 使用事件记录软件或秒表，让对治疗视而不见的研究人员记录每只小鼠在阳性和阴性测试试验的第一分钟内在每个罐中挖掘和挖掘的潜伏期。
   2. 将要挖掘的延迟记录为观察到第一次挖掘的时间。挖掘被描述为老鼠用前爪和/或枪口主动推动或操纵玉米棒垫料。将挖掘持续时间记录为鼠标进行挖掘的总时间。
   3. 比较每只小鼠的阳性（DS+）和阴性（DS-）试验之间在有香味的手臂中的挖掘持续时间，以确定动物是否可以区分任务。在测试的第一分钟（DS+ 挖挖持续时间最短为 3 秒），如果 DS+ 香味臂的挖掘时间至少是 DS-香味臂的两倍，请考虑要满足的学习标准。
8. 每天重复步骤4.1-4.7，直到小鼠达到学习标准。
   1. 从模棱两可的试验中排除到第4天未达到标准的个体（从而进行判断偏倚评估）。
9. 对于符合学习标准的小鼠，测试对模糊气味混合物的反应。
   1. 在从料斗中取出食物，在家庭笼子中训练/测试之前，快速小鼠1小时。
   2. 按照步骤 1.4 中的竞技场设置说明和步骤 2.5-2.10 中的强化试验说明，以随机顺序执行一次阳性和一次阴性强化试验。
   3. 使用模糊的气味混合物，按照步骤4.3中所述进行一次视频记录的未增强测试试验（见 表2）。
10. 对模棱两可的试验视频进行评分，以评估判断偏差。
    1. 使用事件记录软件或秒表，让一名对动物ID和治疗视而不见的研究人员记录每只小鼠在测试试验的前1分钟和2分钟内在每个罐中挖掘的潜伏期（参见步骤4.7.2）。

5. 数据分析

注意:所需的精确分析将取决于实验设计的细节。这里概述了一个总体概述，但强烈建议研究人员在计划动物JB实验分析时参考Gygax²² ，在选择样本量时参考Gaskill和Garner²³ （因为所需的分析对于 先验 功效分析来说通常太复杂了）。

1. 研究人员通过向电子表格中"非盲"地将每个盲码的相应动物ID和治疗信息（例如，富集或常规外壳，药物或安慰剂等）添加到电子表格中。确保生成的电子表格包含符合学习标准（即阳性、阴性和模棱两可的测试试验）的每只动物的三行，表明在有香味的手臂中挖掘的潜伏期。
2. 使用首选统计软件运行重复测量广义线性混合模型。在这里，结果变量将是挖掘的延迟。确保模型包含"处理"（或感兴趣的连续变量）、"试验类型"和"处理 x 试验类型"交互作用作为固定效应。包括鼠标ID（嵌套在治疗中）作为随机效果。模型中包含的其他术语将取决于所应用的实验设计。
   注意:如果小鼠是群居的（适合这个社会物种²⁴）并且笼子配偶被测试，那么在处理中嵌套的笼子（如果存在）必须作为随机效应包含在模型中（并且小鼠ID随后必须嵌套在笼内）。
3. 绘制每种试验类型中延迟的最小二乘均值，以确认所呈现的模糊提示被解释为中间值（即，模棱两可试验的延迟最小二乘均值估计值应落在正延迟和负延迟之间的中间点）。仅当满足此要求时才评估鼠标 JB。
4. 通过调查治疗x试验类型相互作用来确定小鼠是否显示情感调节的JB，评估治疗（或感兴趣的连续变量）对潜伏期的简单影响，以挖掘模糊试验。

图1:实验装置示意图。 JB设备包括一个带有两个手臂的矩形竞技场。每个臂都包含一个位于起点的香味分配器和一个位于末端的挖掘锅。经爱思唯尔许可转载自雷萨科等人¹⁹ 。 请点击此处查看此图的大图。

阶段:	试验设计
都	高价值奖励	香蕉片
	低价值奖励	啮齿动物周
	断续器+	薄荷或香草（平衡）
	断续器	薄荷或香草（平衡）
挖掘培训	挖掘训练时间表	5 天:2 次 POS 试用/天
	挖掘试验持续时间	5 分钟
歧视培训	歧视培训时间表	10 天:4 次试验/天
	挖掘试用订单	第1-5天:4次/天
		试用版 1:姿势
		试炼2:否定
		试用版 3:姿势
		审判4:否定
		第6-10天:4次/天*
	歧视审判期限	5 分钟
测试	测试时间表	3-5天（取决于达到学习标准的时间）
		5 次试验/天
	测试阶段顺序	试验 1 和 2:姿势或负**
		试验3:试验
		试验 4 和 5:姿势或否定**
	测试试用时间	2 分钟
*试验是伪随机化的，因此小鼠每天总是进行两次Pos试验和两次Neg试验
**试验是伪随机化的，因此小鼠在试验前后总是有一个Pos试验和一个Neg试验

表1:实验设计和训练和测试时间表摘要 除了实验设计详细信息外，挖掘训练、鉴别训练和测试阶段每天的试验次数和顺序。经爱思唯尔许可转载自雷萨科等人¹⁹。

试用详情
阶段	试用类型	香薰手臂			无味的手臂
		气味提示	埋藏的奖励	无法获得的奖励	气味提示	埋藏的奖励	无法获得的奖励
挖掘和歧视培训	邮政培训	断续器+	香蕉	食物	水	食物	香蕉
	负训练	断续器	无奖励	香蕉+周	水	食物	香蕉
测试	位置测试	断续器+	无奖励	香蕉+周	水	无奖励	香蕉+周
	否定测试	断续器	无奖励	香蕉+周	水	无奖励	香蕉+周
	模棱两可的测试	薄荷/ 香草混合物	无奖励	香蕉+周	水	无奖励	香蕉+周
学习标准	老鼠在 DS+ 罐（Pos 测试）中的挖掘时间必须比 DS- 罐（负测试）长两倍，并且至少要挖 3 秒

表 2.试用详细信息摘要。 在挖掘训练、鉴别训练和测试阶段，每种试验类型中都呈现气味提示和奖励。DS（+）: 正判别刺激， DS（-）: 负判别刺激， Pos: 正， 否定: 负。经爱思唯尔许可转载自雷萨科等人¹⁹。有关扩展表，请参阅原始文章中的补充表 S2。

结果

这里介绍的结果反映了Resasco等人实验¹⁹的相关发现。本实验的受试者是18只雌性C57BL / 6NCrl（"C57"）和18只巴尔布/cAnNCrl（"巴尔布"）小鼠。动物在3-4周龄时到达设施，并在混合菌株四重奏²⁵中随机分配到环境丰富或常规住房治疗（分别为EH或CH）。每个笼子里含有一个C57和一个巴尔布，此外还有两个DBA / 2NCrl小鼠在另一个实验中使用。在这里，雌性小鼠的使用允许具...

讨论

这里概述的基于气味的挖掘方案和结果证明了这种新型JB任务检测小鼠情感状态变化的能力。因此，这项任务为不同的研究领域提供了一个有价值的工具。与任何JB任务类似，要评估动物影响，动物首先要学会区分线索（步骤4.7.3），并且将模糊刺激解释为中间刺激（步骤5.3）至关重要。虽然很简单，但满足这些要求可能具有挑战性，特别是在实验室小鼠中，过去超过15次开发和实施小鼠JB任务的尝...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Absolute ethanol	Commercial alcohol	P016EAAN	Dilute to 70% with distilled water, for cleaning
Centrifuge tubes	Fischer	55395	15 mL tubes used to dilute essences here. However, size may be selected based on total volume required for sample size
Cheerios (original)	Cheerios	N/A	Commercially available. Used as reward to train animals to enter annex cage for handling
Corncob bedding	Envigo	7092	Teklad 1/8 corncob bedding used in digging pots and animal cages
Cotton pads	Equate	N/A	Commercially available. Modified in lab to fit within tissue cassettes for scent dispensing
Digging pots	Rubbermaid	N/A	Commercially available. Containers were modified to fit the apparatus in the lab
Dried, sweetened banana chips	Stock and Barrel	N/A	Commercially available. High value reward in JB task
JB apparatus		N/A	The apparatus was made in the lab
JWatcher event recording software	Animal Behavior Laboratory, Macquarie University	Version 1.0	Freely available for download online. Used to score digging behavior during JB task
Mint extract	Fleibor	N/A	Commercially "Menta (Solución)". Discriminative stimulus odor
Rodent Diet	Envigo	2914	Teklad global 14% protein rodent maintenance diets. Low value reward in JB task and regular diet in home cage
SAS statistical software	SAS	Version 9.4	Other comparable software programs (e.g. R) are also appropriate
Vanilla extract	Fleibor		Commercially available "Vainilla (Solución)". Discriminative stimulus odor
Video camera	Sony	DCR-SX22	Sony handycam.