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Method Article
* 这些作者具有相同的贡献
该协议概述了利用可变温度控制机器灌注 (MP) 建立猪模型以保存供体肝脏的方法,然后进行原位肝移植 (OLTx)。旨在提高循环死亡 (DCD) 肝脏后使用供体捐献的 OLTx 成功率,并建立稳定的模型。
传统的静态冷藏 (SCS) 加剧了 DCD 肝脏的缺血性损伤,导致移植受者出现严重的并发症。为了解决这个问题,MP 技术在供体肝脏保存方面的临床应用正在进行中。同时,工作重点是开发各种 MP 仪器,并通过相关的动物模型实验进行验证。有效的大型动物试验在临床应用中起着关键作用。然而,DCD 肝脏的 离体 保存和猪移植程序的挑战仍然存在。这些障碍包括解决供体肝脏的长期保存问题、进行活力测试、减轻缺血性损伤和缩短肝末期。使用可变温度控制的 MP 设备有助于通过顺序双低温氧合机灌注 (DHOPE) 和正常机灌注 (NMP) 模式延长 DCD 肝脏的保存。该方案通过提高 DCD 肝脏的质量、优化吻合技术和减少肝末期的持续时间来增强猪 OLTx 模型。
肝移植仍然是终末期肝病和特定肝癌的唯一治愈性治疗方法。尽管在采购、保存、手术技术和移植后免疫抑制方面取得了重大进展,但由于缺乏合适的供体器官,等待名单上的患者死亡率仍然存在显着。主要挑战在于保存从 DCD 获得的肝脏,因为这些器官需要专门的护理来减轻缺血性损伤1。 离体 肝机灌注提供了一种独特的方法,可以在移植前保存和评估 DCD 肝移植物2。临床试验强调了采用低温或常温条件的标准和扩展标准供体对标准和扩展标准供体进行 离体 肝机灌注的可行性和安全性3。重要的是, 离体肝 机灌注期间的治疗干预已显示出减少缺血再灌注损伤 (IRI) 的前景4。
为了延长保存时间和提高 DCD 肝移植物的质量,正在进行的动物实验旨在优化 MP 设备的性能并改进离体肝脏保存的方法5。猪 OLTx 是临床导向研究的最佳模型,验证了 MP 的防腐剂质量。然而,猪 OLTx 肝期供体的缺血性损伤、血流动力学不稳定和肠道充血共同影响猪模型的存活率 6,7。
在以下方案中,使用集成 NMP 和 DHOPE 模式的可变温度控制 MP 装置来保存猪的 DCD 肝脏。与传统 SCS 相比,该装置有助于延长 DCD 肝脏的 离体 保存并减轻供体肝脏的缺血性损伤。该仪器可确保温度调节,支持长距离运输,并提供仿生灌注以及对供体质量的动态和准确评估。该方案包含利用顺序 DHOPE-NMP 模式和猪 OLTx 的 DCD 肝脏保存稳定模型的所有信息,包括灌注设置的过渡、优化吻合技术和肝末期的程序。
所有动物实验均按照《实验动物管理条例》(中华人民共和国科学技术部,2017 年)进行。使用巴马雌性微型猪 (40-45 kg)。该研究方案得到了中国人民解放军南方战区总医院机构动物护理和使用委员会的批准。移植前将猪饲养在研究设施中 1 周,然后在实验前 12 小时禁食但可以自由饮水。材料 表中列出了研究中使用的试剂和设备的详细信息。
1. 获得捐赠者
2. 使用 DHOPE 模式启动
3. NMP 模式灌注
4. 受者肝切除术
5. 原位移植物放置和血管吻合术
6. 移植后护理和监测
7. SCS 控制猪模型技术
DCD 肝脏在移植到受体猪之前接受了 DHOPE-NMP 手术作为保护措施。DHOPE-NMP 的程序如下:第一阶段将 WIT 为 30 min 的 DCD 肝脏 (n = 8) 在 DHOPE 中保存 8 h,然后转移到 NMP 模式再保存 6 h。随后,这些移植物用于猪受体的 LT。描述 组和协议的示意图如图 1 所示。移植手术中涉及的主要步骤的示意图如图 2A-D 所?...
肝脏 MP 目前广泛用于临床试验,但仍然需要使用大型动物模型进行进一步的临床前研究 5,6。猪 OLTx 带来了导致成功率低的重大挑战。这些挑战包括供体的热缺血、解剖学变化以及对腔静脉和门静脉长时间夹闭的不耐受 7,8。植入阶段仍然是 DCD 供体猪 OLTx 的重大障碍,肠充血、静脉回...
作者没有什么可披露的。
该研究得到了中国佛山市 离体 肝灌注系统开发重点科研计划[(2020)A007]的支持;广东省基础与应用基础研究基金(2020B1515120031);光周科学研究基金 (202002030201).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Anesthesia respirator | Mindray,Shenzhen | WATO EX-20 | |
Automatic biochemical analyzer | MNCHIP, China | Celercare V5 | |
Bama female miniature pigs | Pearl Lab Animal Sci & Tech Co,Ltd (Guangdong, China). | 40-45 kg | |
Blood gas analyzer | Abbott | i-STAT300 | |
ECG monitor | Shenzhen Ericon Medical Equipment Co., LTD China | M-9000S | |
Fully automatic snowflake ice | Changshu Shenghai Electric Co., Ltd. China | ||
Perfusate in NMP | 5% Human serum albumin 100-150 mL, Whole blood 1.2-1.5 L, 2.5% NaHCO3 21 mL, 10% CaCL2 7mL , Heparin 5000 U , Cefoxltin 1 g, Metronidazole 500 mg, Sodium taurocholate 5 g, Short acting insulin 72 U, Total parenteral nutrition solution 250-500 mL. | ||
Potal catheter | Jinxin technology,Shunde,China | Portal vein catheter for custom cannula of varying internal diameter (6-8.5 mm) | |
Refrigeration centrifuge | hermo Fisher Scientific - CN | ||
The CG8/CG4 blood gas test card | Abbott | ||
The CHEM 8 test card | Abbott | ||
The ex vivo liver machine perfuion device | Devocean Medical Instrument Co., Ltd, Guangdong, China | DEVOCEAN-LIVER 2000 | This is a multi-mode, temperature-controlled, biomimetic ex vivo liver machine perfusion device, capable of preserving the liver outside the body for 24 h |
UW Cold Storage solution | Bridge to Life, Ltd., USA | Belzer UW | Liver in SCS group were preserved in UW Cold Storage solution |
UW Machine Perfusion Solution | Bridge to Life, Ltd., USA | Belzer MPS | Adenine (free base) 0.68 g, Calcium Chloride (dihydrate) 0.068 g, Dextrose (+) 1.80 g, Glutathione (reduced) 0.92 g, HEPES (free acid) 2.38 g, Hydroxyethyl Starch 50.0 g, Magnesium Gluconate 1.13 g, Mannitol 5.4 g, Potassium Phosphate (monobasic) 3.4 g, Ribose, D(-) 0.75 g, Sodium Gluconate 17.45 g, Sodium Hydroxide 0.70 g, Sterile Water for Injection To 1000 mL Volume |
Vacuum extractor | SMAF | DYX-2A |
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